胡燕
- 作品数：91 被引量：218H指数：8
- 供职机构：解放军第302医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学冶金工程更多>>
- 肠道病毒71型强神经毒分离株VP1蛋白的表达鉴定
- 胡燕白冰珂沈宏辉侯俊高蓉罗声栋貌盼勇
- 文献传递
- 利用减毒沙门菌递送的柯萨奇病毒A16型VP1基因重组质粒的构建和鉴定被引量：6
- 2011年
- 目的:构建能够稳定携带柯萨奇病毒A16型(CoxA16)VP1基因的重组减毒伤寒沙门菌并鉴定目的抗原的表达,研发利用减毒沙门菌递送的口服疫苗。方法:利用DNA重组技术,构建表达CoxA16 VP1蛋白的真核表达质粒,体外转染Vero细胞后检测VP1蛋白表达情况及抗原活性,并将该质粒通过电转化构建重组减毒伤寒沙门菌。结果:构建了表达CoxA16 VP1蛋白的重组质粒,转染vero细胞后检测到CoxA16 VP1蛋白的表达并具有抗原活性;获得能稳定携带该质粒的重组减毒伤寒沙门菌。结论:成功构建稳定携带柯萨奇病毒A16型(CoxA16)VP1基因的重组减毒伤寒沙门菌,为口服CoxA16疫苗的研究打下了基础。
- 刘泽白冰珂高蓉蔡少平胡燕沈宏辉貌盼勇
- 关键词：柯萨奇病毒A16型
- HIV核心抗原p24原核系统的高效表达、纯化及活性鉴定被引量：2
- 2005年
- 目的 在原核表达系统中对HIVp2 4抗原基因进行克隆和高效表达、纯化并鉴定其活性。方法 利用PCR技术从HIV-1全基因质粒 (B2N)中扩增p2 4抗原基因 ,并克隆入T载体中。通过酶切消化后连接到表达载体pRSET上 ,用此连接产物转化大肠埃希菌BL2 1,经IPTG诱导 ,表达p2 4抗原。利用固定化金属离子 (Ni2 + )配体亲和层析技术从表达蛋白中纯化目的蛋白。并运用双酶切技术、SDS-PAGE电泳、WesternBlot(WB)及ELISA法分别对插入基因片段的正确性、表达产物的活性及特异性进行检测。结果 PCR产物约为 6 90bp ,与预期p2 4抗原全基因片段大小一致。重组质粒T-p2 4和pRSET-p2 4经BamHⅠ和HindⅢ双酶切 ,其插入的外源基因片段均为 6 90bp。将纯化前与纯化后的蛋白作SDS PAGE电泳 ,均可见一条约 2 4× 10 3的外源基因表达带 ,与计算的相对分子质量相符。经WB和ELISA试验 ,证明基因工程表达的p2 4抗原具有较高的特异性及活性。结论 成功构建了HIVp2 4表达载体pRSET-p2 4 ,并在原核细胞中高效表达 。
- 侯俊貌盼勇洪世雯胡燕杨健洋沈宏辉朱雷
- 关键词：HIV核心抗原纯化原核系统外源基因表达
- 甲胎蛋白异质体检测在肝病中意义的初步探索
- 目的:初步探讨甲胎蛋白异质体在肝病中的意义。方法:应用凝集素亲和层析离心柱化学发光法检测67例重型肝炎及50例原发性肝细胞癌血清 AFP、AFP-L3,计算 AFP-L3/AFP 比值并比较其在两组中的水平。结果:AFP...
- 游绍莉栾翔凌刘鸿凌胡燕貌盼勇辛绍杰
- 关键词：甲胎蛋白重型肝炎原发性肝细胞癌
- 文献传递
- SARS患者肝脾心肺组织中病毒的分离和鉴定被引量：3
- 2004年
- 目的;从SARS患者尸检肝、脾、心、肺组织中分离病毒并鉴定及评定中和抗体与SARS病程的关系. 方法:取各组织100g/L匀浆后的上清,接种非洲绿猴肾单层细胞,观察细胞病变;采用RT-RCR及序列分析等技术鉴定病毒并研究其生物学特性;将收集的SARS患者早期和恢复期血清做中和实验. 结果:分别从SARS患者尸检肝、脾、心、肺等组织中分离到致细胞病变的病毒,用各组织的病变细胞提取的RNA为模板分别扩增出部分S区和N区的DNA片段,经DNA序列分析表明所有S区和N区的核苷酸序列均与GenBank上的SARS冠状病毒该区域的序列完全一致,中和实验显示所做10份SARS患者双份血清均有中和抗体效价的4倍升高,轻症患者中和抗体产生时间明显早于重症患者. 结论:从SARS患者尸检肝、脾、心、肺组织中分离到的均为SARS冠状病毒,证实SARS冠状病毒可直接侵害患者的肝、脾、心、肺脏器.所有SARS患者均可产生中和抗体,中和抗体产生时间与疾病进程有一定关系.
- 朱雷胡燕沈宏辉戚扬赵景民辛绍杰赵敏程云赵根田貌盼勇
- 关键词：SARS患者中和抗体肺组织肝脾SARS冠状病毒DNA片段
- SARS患者咽拭标本中新分离呼肠病毒部分基因组序列分析被引量：6
- 2006年
- 目的 研究SARS患者中多病原感染状况，测定并分析新分离呼肠病毒基因组序列，从病毒的分子生物学角度研究其分类学位置。方法 SARS患者咽拭子标本经处理后接种Hep-2细胞，提取分离到的病毒RNA，以随机引物逆转录PCR扩增，PCR产物经克隆、测序，将其核苷酸序列及推断的氨基酸序列与GenBank（数据库中基因进行比较分析并建立系统进化树。结果 从4份SARS患者咽拭子标本中分离到3株呼肠病毒，部分基因片段测序结果显示为同一病毒，其病毒基因与呼肠病毒1、2、3型有较高的同源性，尤其是与呼肠病毒1、3型，相应片段的核苷酸序列同源性达82％～92％，推断相应氨基酸序列同源性高达94％～99％，而与其他病毒不存在有意义的同源性；系统进化树分析显示新分离呼肠病毒属于呼肠病毒科呼肠病毒属，且可能为哺乳动物呼肠病毒中的新血清型。结论 SARS患者咽拭子标本中存在呼肠病毒，新分离呼肠病毒核苷酸和氨基酸序列与呼肠病毒1、3型同源性最高，由于尚未得到决定病毒血清型的S1片段基因序列，故该病毒的确切分型有待进一步确定，与SARS患者病情的关系有待进一步研究。
- 沈宏辉孙颖周育森朱虹胡燕何君徐东平辛绍杰端青貌盼勇
- 关键词：严重急性呼吸综合征基因组
- 包涵体蛋白3种纯化方法的比较被引量：9
- 2016年
- 目的比较3种纯化方法对表达的肠道病毒71型(EV71)VP1区包涵体蛋白的纯化效果。方法分别用差速离心法、固定化金属离子亲和层析(IMAC)及不同浓度饱和硫酸氨沉淀法3种包涵体蛋白纯化法对原核表达EV71 VP1包涵体蛋白进行纯化,蛋白垂直(SDS-PAGE)电泳检测蛋白纯化效果。结果差速离心法可以进行大批量表达蛋白纯化,纯化效果较好,但存在蛋白损失较多,且纯化蛋白不能反复冻融的问题。IMAC柱纯化获得的蛋白纯度较高,且蛋白性状稳定,但仍存在纯化蛋白量较少的问题。饱和硫酸氨沉淀纯化法无法获得纯度较高的包涵体蛋白。结论差速离心法可用于大批量蛋白纯化,纯化蛋白应避免反复冻融,可小量分装冻存后备用。IMAC柱纯化可获得纯度较高且性状相对稳定的纯化蛋白,其在相应抗体检测方法学的建立及疫苗制备方面均有广泛用途。饱和硫酸氨法只适用于表达蛋白的初步浓缩纯化。
- 柴燕涛姜棋予谢国明胡燕邬顺全杨锐创貌盼勇侯俊
- 关键词：包涵体蛋白蛋白纯化
- 检测HIV-1/2型抗体的双抗原夹心方法的建立及其试剂盒的研制
- 2001年
- 侯俊何红霞貌盼勇洪世雯胡燕沈宏辉杨松涛
- 关键词：抗体试剂盒
- 3种EV71VP1包涵体蛋白纯化方法的比较研究
- 目的：比较分析3 种纯化方法对基因工程表达EV71 VP1 包涵体蛋白的纯化效果,为相应诊断方法的建立提供原料。方法：分别采用差速离心、IMAC 柱及硫酸氨沉淀等3 种方法对原核表达EV71 VP1 包涵体蛋白进行纯化,...
- 柴燕涛谢国明胡燕姜棋予杨锐创邬顺全王志杰侯俊貌盼勇
- 关键词：包涵体蛋白纯化SDS-PAGE电泳
- 构建永生化人肝细胞系人端粒酶反转录酶真核表达质粒
- 2006年
- 目的:构建人端粒酶反转录酶真核表达质粒,为人端粒酶反转录酶稳定转染细胞提供简单、快速的检测方法。方法:实验于2005-06/2006-03在解放军第三○二医院病毒研究室完成。①聚合酶链反应扩增人端粒酶反转录酶基因和绿色荧光蛋白基因。②利用基因重组技术构建真核表达质粒VR1012-GFP-hTERT和pEGFP-C1-hTERT,筛选阳性克隆进行双酶切、聚合酶链反应和序列测定。③转染HepG2细胞,荧光显微镜下观察人端粒酶反转录酶基因和绿色荧光蛋白的表达情况。结果:①聚合酶链反应扩增目的基因:电泳显示人端粒酶反转录酶基因的聚合酶链反应产物在3.5kb处有特异性目的条带,绿色荧光蛋白基因的聚合酶链反应产物在750bp处显示特异性目的条带。②质粒VR1012-GFP-hTERT和pEGFP-C1-hTERT的构建和鉴定结果:双酶切、聚合酶链反应鉴定和测序结果与预期完全相符。③转染HepG2细胞结果:荧光显微镜下观察人端粒酶反转录酶和绿色荧光蛋白的融合蛋白主要分布在细胞核内。结论:①初步验证所构建的真核表达质粒VR1012-GFP-hTERT和pEGFP-C1-hTERT的正确性。两种质粒可使转染细胞同时表达人端粒酶反转录酶和绿色荧光蛋白的融合蛋白,通过观察绿色荧光蛋白的表达对转染效率和结果进行及时、快捷的观察。②重组真核表达质粒VR1012-GFP-hTERT和pEGFP-C1-hTERT的构建成功,为人端粒酶反转录酶转染细胞提供简洁、快速、实时的检测方法,并为建立永生化人肝细胞系奠定基础。
- 赵擎孙颖胡燕侯俊游绍莉赵军辛绍杰貌盼勇
- 关键词：发光蛋白质类质粒
