近些年来,食物过敏的发病率呈逐年上升趋势。核桃是引起食物过敏的主要食品之一。目的:本文旨在研究核桃中主要过敏原Jug r 1与致敏性相关的免疫学特征,确定其线性抗原表位。方法:首先对核桃过敏原Jug r 1进行消化稳定性和热稳定性的研究,然后利用人体血清学分析其特异性抗体的结合情况,结合生物信息学对其氨基酸一级序列的相关特征参数的分析,预测其可能存在线性抗原表位,同时合成覆盖其全部氨基酸序列的重叠肽库,利用圆点免疫法(dot-blot)筛选出可与过敏患者血清中Ig E特异性结合的肽段,从而确定出Jug r1的线性抗原表位。结果 :核桃中主要过敏原Jug r 1在模拟胃液中60 min时仍未被完全消化;在90℃水浴中加热60 min其条带仍然存在,且可以与核桃过敏患者血清中的Ig E特异性结合。通过生物信息学软件和血清筛选出可结合的抗原表位。结论:核桃中主要过敏原Jug r 1具有较强的免疫学特性,且其存在3个免疫显性的抗原表位。对深入研究其过敏原改造和过敏机理提供理论依据。
为确定影响Jug r 1线性表位致敏性的关键氨基酸,研究2种免疫信息学方法预测Jug r 1线性表位关键氨基酸的准确率和效率,以进一步认识核桃主要过敏原Jug r 1的B细胞线性表位。本研究通过2种免疫信息学的方法对Jugr1中3个线性表位上的关键氨基酸进行预测,采用丙氨酸扫描诱变法对关键氨基酸进行识别,采用固相合成技术合成Jug r 1系列突变多肽,以部分中国核桃过敏患者血清为探针,识别Jug r 1关键氨基酸。结果表明:表位1(4LVALLFVANAAA15)中的第4位亮氨酸、第7位亮氨酸、第8位亮氨酸和表位2(16FRTTITTMEIDEDID30)中的第20位异亮氨酸、第21位苏氨酸、第22位异亮氨酸以及表位3(125CGISSQRCEIRRSWF139)中的第127位异亮氨酸、第129位丝氨酸、第130位谷氨酰胺为关键氨基酸。使用两种免疫信息学结合预测的关键氨基酸准确率达到100%,但预测效率仅为11%。因此,使用2种免疫信息学结合的方式预测表位关键氨基酸可提高准确性,但会忽略一些关键氨基酸。免疫信息学结合丙氨酸扫描诱变法是识别表位关键氨基酸的重要研究思路。
