林宏楠
- 作品数：1 被引量：6H指数：1
- 供职机构：武汉工程大学化工与制药学院绿色化工过程省部共建教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：湖北省国际科技合作项目湖北省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 人乙醛脱氢酶2基因在毕赤酵母SMD1168中的表达研究被引量：6
- 2010年
- 目的得到一株产人乙醛脱氢酶2(acetaldehyde dehydrogenase-2,ALDH2)的重组毕赤酵母菌株,优化其发酵条件以满足生产和科研需求。方法将ALDH2基因整合到质粒pPIC9K,构建重组表达载体pPIC9K-ALDH2,将重组表达质粒pPIC9K-ALDH2经电转化到毕赤酵母SMD1168中,转化子经MD平板筛选后,用G418筛选多拷贝重组子,测序鉴定。通过改变诱导温度、pH、初始OD值、甲醇浓度等诱导条件,对SMD1168(pPIC9K-ALDH2)发酵的条件进行优化。结果ALDH2cDNA整合到毕赤酵母基因组中,得到SMD1168(pPIC9K-ALDH2);获得最佳的诱导表达优化条件:在28℃、pH=7.0、诱导初始OD600=12、每隔24h添加1.5%甲醇、转速为300r/min,发酵所产生的人ALDH2酶活可达到0.115U/ml,相对较高。结论以蛋白酶缺陷型毕赤酵母SMD1168为宿主,分泌表达质粒pPIC9K为载体,能够成功构建重组子SMD1168(pPIC9K-ALDH2)。
- 黄锟赵玉凤赵锦雷明科林宏楠王存文吴元欣
- 关键词：毕赤酵母醛脱氢酶乙醛基因
