杨凤武
- 作品数：4 被引量：8H指数：2
- 供职机构：第三军医大学西南医院更多>>
- 发文基金：重庆市卫生局科研项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 体外三维培养的结肠癌细胞整合素αⅤ β3表达变化及其与化疗敏感性的关系被引量：3
- 2008年
- 目的:用三维培养方法在体外模拟体内实体瘤生长情况,探讨结肠癌细胞群集耐药与细胞黏附分子整合素αⅤ(integrin αⅤ)和整合素β3(integrin β3)过度表达的关系。方法:运用三维培养法获得人结肠癌细胞HT29多细胞球体(multicellular spheroids,MCS)模型,采用RT-PCR法及免疫荧光法比较单层细胞(monolayer cells,MC)及MCS细胞中基质间黏附分子integrin αⅤ和integrin β3 mRNA及蛋白表达水平变化,用FCM法检测5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)作用48h后细胞的生存率和凋亡率。结果:HT29 MCS与HT29 MC经比较,integrin αⅤ和integrin β3 mRNA及蛋白表达水平均明显增高(P<0.01),对5-FU的药物敏感性显著下降(P<0.05),5-FU诱导的细胞凋亡率显著下降(0.346±0.035vs0.235±0.024),差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:细胞黏附分子integrin αⅤ和integrin β3表达水平增高可能增加结肠癌细胞群集的耐药性。
- 郑晨宏梁后杰周琪杨凤武彭秋平边志衡
- 关键词：细胞培养技术整合素ΑV整合素Β3
- ILKmRNA在结肠癌细胞株中的表达及其稳定表达的RNA干扰载体构建被引量：3
- 2007年
- [目的]检测结肠癌细胞株中ILK的mRNA水平,并构建针对ILK基因的特异性RNA干扰(RNAi)表达载体。[方法]通过RT-PCR检测ILK基因在三种结肠癌细胞株(SW480、LO-VO及HT29)mRNA的表达;根据GenBank提供的ILK基因mRNA序列,设计具有小发夹结构的两条DNA序列,化学合成后经退火形成双链DNA片段,连接到经HindⅢ/BglⅡ酶切线性化的pSUPER-neo-EGFP/H1(pSNE/H1)质粒上,形成重组载体pSNE-ILK,转化大肠杆菌DH5α,提取质粒经HindⅢ/EcoRⅠ双酶切鉴定和测序鉴定,稳定转染结肠癌细胞HT29。[结果]①RT-PCR检测,ILK基因在三种结肠癌细胞株中均有表达,ILK/β-actin电泳条带强度比:SW480为0.63,HT29为0.65,LO-VO为0.33。②成功构建了针对ILK基因的特异性RNA干扰载体pSNE-ILK和对照的无关基因载体pSNE-Control,并稳定转染结肠癌细胞株HT-29。[结论]成功构建了针对ILK基因的特异性RNAi载体,并稳定转染HT29细胞,能有效抑制ILK基因,为下一步探讨ILK基因在结肠癌进程中的作用和结肠癌的基因治疗奠定了基础。
- 杨凤武梁后杰
- 关键词：RNA干扰整合素连接激酶
- RNAi沉默整合素连接激酶基因表达对结肠癌细胞HT-29增殖的影响被引量：2
- 2007年
- 目的:利用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术,阻断结肠癌细胞系HT-29中整合素连接激酶(integrin-linked kinase,ILK)基因的表达,研究ILK基因沉默后对HT-29细胞系增殖产生的影响。方法:构建针对ILK基因的真核表达质粒pSUPER-neo-EGFP-ILK(pSNE-ILK),在脂质体介导下稳定转染人结肠癌细胞系HT-29细胞(HT-29/pSNE-ILK组),同时以无关质粒pSUPER-neo-EGFP-C(pSNE-C)转染HT-29细胞(HT-29/pSNE-C组)和未转染细胞(HT-29组)作为对照,分别应用RT-PCR技术及蛋白印迹法检测ILK mRNA及蛋白表达水平,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖状况。结果:稳定转染后,HT-29/pSNE-ILK组ILK mRNA及蛋白表达水平分别为0.16±0.11和0.24±0.07,HT-29/pSNE-C组分别为0.53±0.10和0.56±0.08,HT-29组分别为0.64±0.11和0.77±0.02,前组ILK mRNA及蛋白表达水平分别与后两组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);稳定转染pSNE-ILK质粒后HT-29细胞中ILK mRNA及蛋白表达抑制率分别为69.8%和57.1%。MTT比色法检测显示,HT-29/pSNE-ILK组细胞增殖率明显下降(P<0.05)。结论:RNA干扰技术能有效抑制靶基因ILK的表达,进而可抑制结肠癌细胞系HT-29的增殖。
- 杨凤武梁后杰
- 关键词：结肠癌细胞整合素连接激酶RNA干扰稳定转染
- 整合素连接激酶在结肠癌细胞群集耐药中的作用
- 背景与目的：
肿瘤耐药是导致化疗效果不佳的主要原因，群集耐药现象已经在许多肿瘤细胞的耐药实验中得到证实，但群集耐药的机制尚不十分明确。ILK作为连接细胞与细胞外基质的关键因子，被认为是体内多种信号传导通路的关键...
- 杨凤武
- 关键词：结肠癌细胞凋亡
- 文献传递
