李照令
- 作品数：6 被引量：26H指数：2
- 供职机构：中国科学院沈阳应用生态研究所更多>>
- 发文基金：辽宁省自然科学基金国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：生物学农业科学环境科学与工程更多>>
- 一种改进的亚硫酸盐测序方法
- 本发明涉及生物DNA甲基化技术，具体地说是一种改进的亚硫酸盐测序方法。将基因组DNA经酶切纯化，纯化后加入亚硫酸盐修饰液进行解链与修饰；修饰后纯化回收测序，即实现基因组DNA的测序；所述亚硫酸盐修饰液为500-550ul...
- 马珊珊赵晓辉孙晓霞刘宛孙梨宗李照令巩宗强贾春云
- 文献传递
- 改进亚硫酸盐测序技术研究拟南芥DNA甲基化水平被引量：1
- 2013年
- DNA胞嘧啶甲基化是一种重要的表观遗传修饰形式,在细胞增殖、分化、发育、基因组印迹、基因表达调控等过程中起着重要作用。随着对DNA甲基化研究的深入,各种DNA甲基化检测方法被开发出来满足不同类型的研究需求。通过实验建立的一种改进亚硫酸盐测序技术,将拟南芥基因组DNA经酶切纯化后,用亚硫酸盐修饰液修饰,将PCR产物克隆到pEASY-T1载体上,每个样品随机挑取15个阳性克隆,测序分析,研究拟南芥错配修复基因MutL-homologue 1(MLH1)启动子区域的甲基化水平。结果表明:与传统亚硫酸盐测序法相比,改进方法有利于DNA完全修饰,既减少了修饰时间,又提高了PCR目的片段的特异性、稳定性和重复性;MLH1基因启动子区域甲基化比率为27.3%,而不是45.6%,避免了非甲基化位点的错认。为植物DNA甲基化分析提供了一种更为理想的研究手段。
- 马珊珊孙晓霞李照令贾春云刘宛台培东赵晓辉李培军
- 关键词：DNA甲基化MLH1
- 运用MSAP研究镉胁迫对拟南芥幼苗基因甲基化的影响被引量：18
- 2014年
- DNA甲基化是表观遗传学的重要组成部分,并在环境胁迫响应中起重要作用。运用甲基化敏感扩增多态性(Methylation sensitive amplification polymorphism,MSAP)技术研究0、0.5、1.5、5.0 mg·L-1Cd2+处理对拟南芥幼苗全基因组DNA甲基化水平的影响,结果表明:(1)不同浓度镉处理19 d后,叶片数、地上部鲜重无明显变化,但根长受到显著抑制;(2)选取10对引物扩增DNA酶切产物,所得三个镉处理造成的拟南芥基因组MSAP%均高于对照(35%);(3)随着镉处理的增大,拟南芥基因组甲基化(M)型条带依次减少,去甲基化(D)型条带逐渐增加,并且条带亮度也有所变化;(4)将特异性条带克隆测序后发现,mRNA、假设蛋白、表达蛋白、用于编码假定蛋白的mRNA序列V型质子ATP酶亚组、叶绿体中光合体系II CP47基因、叶绿体DNA、rRNA重复单元、核糖体蛋白等多种序列均存在甲基化修饰现象。这些特异序列可为我们寻找镉胁迫的生物标记物及胁迫响应的机理研究提供一定的依据。
- 李照令王鹤潼陈瑞娟贾春云贾春云李晓军台培东李培军
- 关键词：拟南芥镉胁迫MSAP
- 一种改进的亚硫酸盐测序方法
- 本发明涉及生物DNA甲基化技术，具体地说是一种改进的亚硫酸盐测序方法。将基因组DNA经酶切纯化，纯化后加入亚硫酸盐修饰液进行解链与修饰；修饰后纯化回收测序，即实现基因组DNA的测序；所述亚硫酸盐修饰液为500-550ul...
- 马珊珊赵晓辉孙晓霞刘宛孙梨宗李照令巩宗强贾春云
- 文献传递
- Cu胁迫对拟南芥幼苗错配修复基因表达的影响被引量：2
- 2013年
- 采用半定量反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,以18SrRNA为内参基因,研究了Cu胁迫对拟南芥(Arabidopsis thaliana)幼苗错配修复相关基因(MLH1、MSH2、MSH3、MSH6、MSH7)表达的影响,并结合幼苗的形态和生理指标,选取Cu胁迫敏感的生物标记物。结果表明,Cu处理10d后,对拟南芥种子发芽率、地上部鲜重及叶绿素含量的影响不大;根的长度明显受到抑制;拟南芥幼苗地上部可溶性蛋白质含量随着Cu浓度增加明显降低;5个错配修复相关基因的表达均受到不同程度的抑制,Cu浓度与拟南芥幼苗上述指标之间存在明显的剂量-效应关系。以上结果表明,地上部可溶性蛋白含量变化与上述错配修复相关基因表达量的改变趋势一致,且均对Cu胁迫较敏感,可以作为检测Cu污染对植物遗传毒性效应的生物标记物。
- 孙晓霞宋有涛李照令刘宛台培东李培军
- 关键词：生物标记物错配修复基因半定量RT-PCR
- 镉、铜胁迫下拟南芥基因组DNA甲基化的MSAP分析被引量：6
- 2013年
- [目的]研究不同浓度Cd、Cu胁迫下拟南芥幼苗基因组DNA的甲基化水平和状态变化。[方法]以0、0.5和5.0 mg/L Cd2+、0.5和5.0 mg/L Cu2+处理21 d的拟南芥为材料,提取基因组DNA,进行甲基化敏感扩增多态性(methylation sensitive amplification polymor-phism,MSAP)分析。[结果]0、0.5 mg/L Cd2+、5.0 mg/L Cd2+、0.5 mg/L Cu2+和5.0 mg/L Cu2+处理组DNA的MSAP比率分别为30.2%、34.7%、41.0%、33.9%、39.2%。0.5 mg/L Cd2+、5.0 mg/L Cd2+、0.5 mg/L Cu2+、5.0 mg/L Cu2+处理组的DNA甲基化多态性比例分别为2.6%、13.2%、2.4%、11.2%。[结论]Cd、Cu胁迫下拟南芥基因组DNA甲基化水平的增加及DNA甲基化多态性的提高与Cd、Cu处理浓度呈显著正相关,且Cd对DNA甲基化水平和多态性改变的作用大于Cu。
- 赵晓辉徐正进刘宛王鹤潼李照令马珊珊孙晓霞
- 关键词：拟南芥DNA甲基化镉胁迫铜胁迫MSAP
