李杨
- 作品数：15 被引量：77H指数：6
- 供职机构：浙江大学生物系统工程与食品科学学院更多>>
- 发文基金：浙江省重大科技专项基金浙江省重点科技创新团队项目浙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程生物学化学工程更多>>
- 巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)高效异源表达脂肪酶研究进展被引量：2
- 2015年
- 脂肪酶作为一种常见的工业用酶,广泛应用于食品、化妆品等与生活密切相关的工业领域,但较高的生产成本和使用成本,在一定程度上限制了其进一步应用。通过巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)异源表达系统重组表达脂肪酶,成为解决限制脂肪酶发展的方法之一。本文介绍了脂肪酶在P.pastoris表达系统中的异源表达及其优化策略,并对毕赤酵母表面展示异源脂肪酶的技术及应用进行了归纳。
- 李杨蔡海莺赵敏洁李阳冯凤琴
- 关键词：脂肪酶
- 疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶基因在毕赤酵母工程菌中的遗传稳定性被引量：1
- 2019年
- 【背景】重组工程菌的传代稳定性是保证外源蛋白高效稳定表达的前提,是决定工业化生产能力的关键因素之一。【目的】对异源的疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶基因在毕赤酵母重组工程菌中的遗传稳定性进行研究。【方法】将工程菌连续传代15次,取第1、5、10、15代作为受检代次,结合重组菌的菌落及菌体形态、水解酶活、目的基因片段、外源基因拷贝数等指标综合评价其遗传稳定性。【结果】传代过程中重组菌的菌落和菌体形态、目的蛋白分子量、目的基因序列均保持一致。目的基因的整合拷贝数经5次传代后发生一定损失,但随后稳定为7左右,而脂肪酶的相对酶活则提高至90%以上。【结论】适量的整合拷贝数更有利于该脂肪酶基因在毕赤酵母重组菌中的表达,经综合评价此工程菌的遗传稳定性良好,应用于工业化大规模生产是可行的。
- 钱忠英李杨蔡海莺冯凤琴
- 关键词：毕赤酵母脂肪酶重组菌
- 植物乳杆菌协同单甘油月桂酸酯促进小鼠增重并改善血脂水平和炎症反应
- 2020年
- 低剂量单甘油月桂酸酯(GML)的使用能引起血脂异常和低度炎症。为解决GML这一潜在的健康风险问题,研究了植物乳杆菌ZJUFT34(T34)对GML诱导的增重小鼠的血脂、胰岛素和细胞因子等方面的调节作用。以雄性C57BL/6小鼠为研究对象,分别饲喂基础饲料和含150 mg/kg GML的基础饲料,待GML诱导小鼠产生显著性增重后,灌胃T34处理3周,眼球采血后测定血清血脂水平、空腹葡萄糖和胰岛素水平以及细胞因子水平。结果表明:T34的使用,能维持GML引起的显著性增重,终体重比对照组增加了2.48 g(约9.3%),同时显著升高了高密度脂蛋白胆固醇/低密度脂蛋白胆固醇(HDL-C/LDL-C)的水平,改善了胰岛素抵抗,降低了促炎细胞因子白介素-6(IL-6)水平,并上调了抗炎细胞因子转化生长因子-β(TGF-β)的水平。T34和GML的配合使用,既能发挥GML促进生长的有利作用,又可以减轻GML的潜在危害,使增重小鼠维持健康状态。
- 李杨张希张希李阳
- 关键词：植物乳杆菌脂质调节
- 毕赤酵母重组菌高密度发酵产疏绵状嗜热丝孢菌脂肪酶被引量：5
- 2018年
- 疏绵状嗜热丝孢菌脂肪酶TLL是一种热稳定、具有位置专一性等良好属性和应用前景的脂肪酶,已成功在多种宿主中实现重组表达。本研究构建含前导肽的TLL脂肪酶毕赤酵母重组工程菌,在摇瓶水平对该重组工程菌的培养和诱导条件进行优化,通过单因素试验,得到的最佳发酵条件:1.5%(体积分数)甲醇,pH 7.0,质量分数0.5%玉米油和0.1%阿拉伯胶,该条件下摇瓶发酵最高酶活为2 265.3 U/mL。以甲醇为唯一碳源进行高密度发酵,202 h后菌体OD600值达到最高282,对应发酵上清液的最高酶活为22 561.4 U/mL。参考摇瓶优化结果,采用辅助碳源与甲醇共诱导高密度发酵,培养和诱导208 h后,最终菌体OD600值达到362,对应发酵上清液的最高酶活为24 522.6 U/mL,较以甲醇为唯一碳源的对应值分别提高了28.37%和10.87%。另外,最高酶活较摇瓶水平发酵的最高酶活2 265.3 U/mL提高10.83倍,表明高密度发酵和共诱导是大幅提高酵母表达重组TLL蛋白的重要手段。
- 蔡海莺Dumba Trish张婷来佳赵敏洁李杨于林凯张辉冯凤琴
- 关键词：高密度发酵毕赤酵母
- 疏绵状嗜热丝孢菌脂肪酶在毕赤酵母中的高效表达和性质鉴定被引量：1
- 2018年
- 通过密码子优化改造编码sn-1,3位置专一性疏绵状嗜热丝孢菌脂肪酶(TLL)基因,同时通过重叠PCR技术合成该基因,并将其克隆到巴斯德毕赤酵母的表达载体p PIC9K中。结果表明,TLL脂肪酶被高效胞外表达,在摇瓶中发酵168 h得到的发酵液的上清脂肪酶表达量达到0.1 mg/m L,对应的p NPP水解酶活达到312.72U/m L。与对应的原始编码基因重组菌酶活(179.42 U/m L)相比,密码子优化后酶活提高74.29%,表明密码子优化策略成功提高了TLL在巴斯德毕赤酵母中的重组表达。比较毕赤酵母来源的重组TLL与商业化的米曲霉酶学性质发现它们具有相似的最适p H和温度耐受范围。另外,它们在有机溶剂耐受性、表面活性剂和金属离子效应以及位置选择性方面均较为相似,表明毕赤酵母来源的重组TLL同样具有商业化应用的潜力。
- 蔡海莺张婷Dumba Trish赵敏洁李杨童志超毛建卫张辉冯凤琴
- 关键词：密码子优化毕赤酵母
- 微生物脂肪酶资源挖掘研究进展被引量：13
- 2018年
- 脂肪酶广泛分布于动物、植物和微生物中,工业化脂肪酶主要来源于微生物。脂肪酶制剂的进一步工业化应用受限于生产成本和脂肪酶的温度和pH值耐受性、活性、专一性和溶剂耐受性等酶学性质,虽然微生物脂肪酶基因和蛋白相关资源信息已经非常丰富,但适合食品、药品和能源等工业应用的脂肪酶制剂品种依然较少,研究者仍然在为新型和理想的脂肪酶制剂资源的挖掘而努力。本文重点综述了微生物脂肪酶资源挖掘的主要研究方法,主要包括通过环境筛选和宏基因组筛选挖掘新的具有优良特性的脂肪酶;脂肪酶微生物生产菌株的改良、脂肪酶基因在重组工程菌株中的重组表达和优化、蛋白质工程方法对脂肪酶蛋白进行改造、脂肪酶固定化和催化工艺的改良等。
- 蔡海莺王珍珍张婷张婷李杨赵敏洁李杨
- 关键词：微生物脂肪酶资源挖掘蛋白质工程
- 米黑根毛霉脂肪酶基因的酵母重组表达和Kex2位点改造被引量：1
- 2019年
- 米黑根毛霉脂肪酶(RML)具有较高的合成活性、热稳定性、溶剂耐受性以及sn-1,3位置专一性等一系列适合工业化推广的特点。本研究通过密码子优化改造RML编码基因,并将其克隆、转化到毕赤酵母GS115菌株,经诱导发酵156 h,酶活达到3.77 U/mL。为了进一步改善RML脂肪酶的重组表达,通过定点突变的方式去掉潜在的Kex2酶切位点,结果显示:RML突变体表达量均显著低于野生型的RML脂肪酶,表明"-Arg196-Arg197-"序列并不影响RML的重组表达。通过对RML蛋白结构分析,Kex2酶切位点的肽键被包埋在蛋白内部,这表明该位点区域的折叠在进入分泌途径时已基本完成。本研究对异源蛋白的酵母重组表达具有一定参考价值。
- 蔡海莺沈灵智赵敏洁赵敏洁李杨毛建卫
- 关键词：毕赤酵母密码子优化
- 脂肪酶的酵母细胞表面展示及其应用被引量：1
- 2017年
- 脂肪酶是一类在工业上应用广泛的酶制剂。传统的脂肪酶生产过程操作复杂,投资较大,使得脂肪酶的价格一直居高不下。脂肪酶的表面展示技术直接将脂肪酶固定在宿主细胞表面,其优点是:1)省去复杂的分离纯化和固定化过程,降低生产成本;2)表面展示技术为脂肪酶的蛋白工程研究提供新的高通量筛选途径;3)部分研究表明展示的脂肪酶作为全细胞催化剂比传统的自由酶以及固定化的脂肪酶具有更高的酶学活性和更好的温度稳定性、有机溶剂耐受性等优良特性,应用前景良好。根据宿主不同,研究较多的脂肪酶表面展示系统可分为噬菌体、细菌和酵母3类。凭借成熟的基因工程操作技术和对真核蛋白良好的加工修饰能力,酵母细胞在脂肪酶表面展示上的应用越来越多。本文将简要介绍脂肪酶酵母表面展示系统的组成,影响因素及其在高通量筛选、全细胞催化剂和蛋白共展示技术等方面的应用前景。
- 赵敏洁蔡海莺李杨来佳张辉冯凤琴
- 关键词：脂肪酶酵母细胞高通量筛选
- 蒸笼垫中产高温脂肪酶菌株的筛选和脂肪酸谱分析被引量：4
- 2017年
- 脂肪酶的应用受限于其酶学性质。高温稳定性的脂肪酶因在食品、油脂加工和生物能源等领域的广泛应用而备受青睐。本研究综合富含油脂的自然环境对脂肪酶生产菌株的富集作用以及高温湿热环境对酶的定向选择,从中国传统食品蒸饺的蒸笼屉中筛选产脂肪酶微生物。通过气相色谱和MIS标准软件系统对分离的细菌进行脂肪酸谱分析,辅以形态、生理和产酶等特征,对产脂肪酶微生物进行菌种鉴定。分离筛选到67株可培养微生物,罗丹明橄榄油琼脂平板初筛结果表明,其中21株为产胞外脂肪酶微生物,包括丝状真菌7株,多为曲霉属;酵母6株,细菌8株。细菌菌种分类鉴定结果表明,8株细菌分别隶属于不动杆菌属、假单胞菌属、芽孢杆菌属和葡萄球菌属4个属的5个种。本研究结果表明,中国传统食品蒸饺的蒸笼中具有丰富的生物安全性的微生物资源,为挖掘新型的耐热脂肪酶资源提供了基础。
- 蔡海莺赵敏洁李杨来佳张辉冯凤琴
- 关键词：脂肪酶微生物菌种鉴定
- 高脂膳食与肠道微生态相关性研究进展被引量：8
- 2018年
- 近年来,随着人们的生活习惯向高脂膳食转变,高脂膳食诱发的食源性肥胖、心血管疾病、糖尿病等相关慢性代谢疾病已经成为困扰全球的公共卫生问题。越来越多的研究表明,肠道微生态和高脂膳食诱发的代谢紊乱关系密切。受膳食、遗传背景和生活方式等因素的影响,肠道微生态的组成存在着很大的个体差异。膳食不仅仅为宿主提供营养物质,也是肠道微生物营养的来源,能影响肠道微生态的组成和功能。宿主的能量代谢、肠道通透性的保持以及一些炎症反应和免疫反应均与肠道微生态的改变相关。本文综述了高脂膳食、肠道微生态和宿主健康之间的相互影响及其可能的作用机理。虽然目前的研究结果还无法证实肠道微生态与高脂膳食诱发的相关慢性代谢疾病是否存在因果关系,但肠道微生态与宿主健康之间的相互影响为肥胖及其相关代谢疾病的防治提供了新思路。
- 赵敏洁蔡海莺蒋增良蒋增良李杨张辉
- 关键词：高脂膳食肠道微生态肥胖胰岛素抵抗代谢综合征
