刘立斌
- 作品数：13 被引量：20H指数：3
- 供职机构：四川大学华西医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 成肌细胞的临床应用现状及前景被引量：9
- 2007年
- 目的介绍成肌细胞在临床常见疾病细胞治疗和基因治疗中的研究现状、前景和存在的问题。方法查阅国内外近15年来对Duchenne型肌营养不良、帕金森病、脊髓疾病、永久性面瘫、心血管系统疾病、骨、关节及肌肉损伤、血液系统疾病以及垂体性侏儒等的细胞治疗及基因治疗文献,并进行综合分析。结果成肌细胞移植是治疗多种常见疾病较为理想的方法,在医学领域中的应用取得了一定进展,但也存在免疫排斥及成肌细胞移植最佳载体的选择等问题。结论利用成肌细胞为载体携带外源基因,治疗临床常见疾病是目前研究的重点和热点,存在的主要问题是移植免疫、成肌细胞融合率以及目标蛋白的表达。成肌细胞来源和取材容易,易于在体外培养,便于回输给宿主,这些优点利于其在临床诸多领域的中应用。
- 刘立斌周红雨
- 关键词：成肌细胞基因治疗神经系统疾病心血管系统疾病血液系统疾病
- 成肌细胞移植治疗假肥大型肌营养不良症的实验研究被引量：1
- 2009年
- 目的研究成肌细胞移植治疗假肥大型肌营养不良症(duchenne muscular dystrophy,DMD)的效果,探讨基因治疗DMD的方法及可行性。方法用多步酶消化法与差速贴壁法培养C57/BL10小鼠成肌细胞,倒置相差显微镜观察细胞形态。取第4代细胞用5-BrdU标记。将24只DMD模型鼠——mdx小鼠(4～6周龄,雄性,体重13.8～24.6g)随机分为两组(n=12),A组经尾静脉分2次(间隔2周)注射1×106个/mL标记后成肌细胞,B组同法注射1mLDMEM/F12培养基为对照。术后4周采用一次性游泳力竭实验检测小鼠运动能力,处死后取材行HE染色及5-BrdU、结蛋白、抗肌萎缩蛋白(dystrophin,Dys)免疫组织化学染色观察,并行图像分析。结果原代成肌细胞培养5～7d后即可传代,可获得稳定传代及足量的细胞。A组小鼠一次性游泳力竭时间为(60.72±5.76)min,B组为(47.77±5.40)min,两组比较差异有统计学意义(P<0.01)。术后4周HE染色示A组可见变成圆形且透明染色的肌细胞,肌纤维细胞核中心移位(centrally nucleated fibers,CNF)比例为67%;B组肌纤维粗细不等,可见肥大、萎缩、变性和肌纤维坏死等改变,CNF比例>80%。免疫组织化学染色示,A组5-BrdU、结蛋白、Dys表达均呈阳性,B组少见表达或呈阴性表达。图像分析结果显示,A、B组结蛋白积分吸光度(IA)值分别为489.70±451.83和71.15±61.14,阳性面积占视野总面积的比值分别为0.3143±0.1973和0.1028±0.0628(P<0.05);DysIA值分别为5424.64±2658.01和902.12±593.51(P>0.05),阳性面积占视野总面积的比值分别为0.3237±0.1177和0.0352±0.0329(P<0.05)。结论成肌细胞移植治疗小鼠DMD有一定的治疗作用。
- 刘立斌周红雨
- 关键词：成肌细胞假肥大型肌营养不良症基因治疗
- 单核细胞趋化蛋白1体外趋化经成肌诱导分化后的小鼠BMSCs实验研究被引量：3
- 2010年
- 目的为提高BMSCs的静脉移植效率,研究单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemoattractant protein1,MCP-1)对经成肌诱导分化后的小鼠BMSCs的体外趋化迁移作用。方法以差速贴壁法与密度梯度离心法相结合分离培养C57/BL10小鼠BMSCs,并采用ALP Gomori改良钙钴法染色行成骨诱导鉴定。取第3代BMSCs以5氮杂胞苷(5-azacytidine,5-Aza)为诱导剂进行成肌细胞诱导分化。以不同浓度(25、50、100、200、400ng/mL)的MCP-1对经成肌诱导分化后的小鼠BMSCs进行体外趋化迁移,计数迁移细胞数,以单纯L-DMEM培养基为对照;应用流式细胞仪检测经成肌诱导分化后的小鼠BMSCs的C-C趋化因子受体(chemokine receptor2,CKR-2)的表达。结果第3代细胞能诱导分化为成骨细胞,提示所用细胞为BMSCs。经成肌诱导分化后的BMSCs可形成肌小管结构。MCP-1浓度为25、50、100、200、400ng/mL时,迁移至Millicell小室聚碳酸酯膜外层的细胞数分别为(35.0667±6.5842)、(43.2000±6.4608)、(44.4667±4.8235)、(45.6000±8.6503)、(50.7333±7.5825)个,与对照组(28.3333±8.9176)个比较差异均有统计学意义(P<0.05),25、50、400ng/mL组间两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。流式细胞仪检测显示,加入一抗和二抗的待测样本CKR-2表达率为48.0%,与空白对照(0.6%)和仅加入二抗的阴性对照(17.0%)比较差异均有统计学意义(P<0.001)。结论 MCP-1对经成肌诱导分化后的小鼠BMSCs有趋化迁移作用,MCP-1/CKR-2通路参与了小鼠BMSCs的迁移。
- 刘举周红雨刘立斌罗丽连志云李慧英
- 关键词：BMSCS单核细胞趋化蛋白1小鼠
- 成肌细胞与骨髓间充质干细胞移植治疗进行性肌营养不良的实验研究
- 目的：研究成肌细胞及骨髓间充质干细胞体外培养、扩增、诱导分化;利用成肌细胞及骨髓间充质干细胞经尾静脉注射移植治疗DMD模型鼠mdx小鼠;观察移植后的细胞在宿主体内的生长及融合情况;探讨基因治疗DMD的方法及可行性。
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- 刘立斌
- 关键词：成肌细胞间充质干细胞肌营养不良细胞移植
- 文献传递
- PU-579单核细胞趋化蛋白-1体外趋化经诱导分化后的小鼠骨髓间充质干细胞的实验研究
- 刘举周红雨刘立斌罗丽连志云李惠英
- 基因修饰成肌细胞移植治疗Duchenne型肌营养不良模型鼠的实验研究
- 目的研究成肌细胞携带micro-dystrophin基因移植后,在mdx鼠肌肉内的表达及对mdx鼠肌肉病变的修复和运动耐力的改善。方法C57/BL10小鼠成肌细胞的原代和传代培养及转染,将转染48小时后的成肌细胞、未转染...
- 李惠英周红雨连志云刘立斌罗丽张伶君刘举赵代弟
- 文献传递
- MICRO-DYSTROPHIN基因修饰骨髓间充质干细胞的实验研究
- 目的研究骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)体外培养、扩增及诱导分化;利用携带mi- cro-dystrophin基因的pSL139质粒转染MSCs进行基因修饰,观察micro-dy...
- 连志云周红雨李惠英刘立斌罗丽张伶君刘举赵代弟
- 文献传递
- 多发性硬化患者的临床特点分析被引量：4
- 2008年
- [目的]通过分析总结我院267例多发性硬化(MS)的临床资料,探寻MS的临床表现特点。[方法]从临床表现和影像学等方面对病例进行描述性分析。[结果]267例MS病例中,男110例,女157例;发病年龄5到70岁,平均40岁,小于15岁的早发型病例占4.5%;23.9%病例病前有诱发因素;77.5%病例呈急性或亚急性起病;首发症状以肢体无力、感觉障碍和视力减退最常见。本组头颅MRI以侧脑室周围、半卵圆中心、脑干等处多见。[结论]MS起病年龄与欧美相当,以急性或亚急性起病;病变多累及视神经;临床类型和病程与神经功能缺失程度相关。
- 连志云刘立斌周红雨
- 关键词：炎性脱髓鞘多发性硬化
- Micro-dystrophin基因转染C57/BL10小鼠成肌细胞的实验研究
- 目的研究micro-dystrophin基因在体外培养成肌细胞中的表达。方法pSL139质粒的转化、扩增和鉴定;C57/BL10小鼠成肌细胞的原代和传代培养,鉴定;脂质体法介导质粒pSL139转染P3代成肌细胞;转染48...
- 李惠英周红雨连志云刘立斌罗丽张伶君刘举赵代弟
- 文献传递
- MICRO-DYSTROPHIN基因修饰骨髓间充质干细胞治疗进行性肌营养不良的实验研究
- 目的基因修饰后的MSCs肌肉局部注射治疗进行性肌营养不良模型动物mdx小鼠,观察移植后mdx小鼠肌肉病理改变和细胞膜dystrophin蛋白表达情况;探讨基因治疗DMD的方法及可行性。方法用脂质体法介导pSL139质粒转...
- 连志云周红雨李惠英刘立斌罗丽张伶君刘举赵代弟
- 文献传递
