刘怡晟
- 作品数：27 被引量：123H指数：7
- 供职机构：上海交通大学医学院附属新华医院更多>>
- 发文基金：上海市科学技术委员会资助项目上海市教委科研基金上海市卫生局资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 大鼠UT-B重组腺病毒载体的构建及体外转染Caco-2细胞后基因表达
- 2013年
- 目的采用GatewayTM技术构建含大鼠尿素转运蛋白B(Urea transporter B,UT-B)和增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fuorescent protein,EGFP)的重组腺病毒载体,并以该载体体外转染Caco-2细胞,观察Caco-2细胞内UT-B的表达。方法分别以pMD18-UT-B和IRES2-EGFP质粒为模板,PCR扩增UT-B和IRES-EGFP序列,通过引物重叠区进行PCR拼接,并在UT-B-IRES-EGFP两端引入attB1、attB2重组臂序列。PCR产物经BP重组系统将UT-B-IRES-EGFP融合基因重组到入门载体pDONR221中,构建入门克隆。入门克隆与表达载体pAD/CMV/V5-DEST使用LR重组系统进行体外重组,构建表达克隆pAD-UT-B-IRES-EGFP,pAD-UT-B-IRES-EGFP转化DH-5α,筛选阳性克隆,PCR及测序验证。pAD-UT-BIRES-EGFP用Pac I酶切线性化后由Lipofectamine 2000介导转染293A细胞,包装病毒,收集病毒液并测定滴度。重组的腺病毒体外感染培养的Caco-2细胞,RT-PCR观察Caco-2细胞中UT-B mRNA的表达。结果成功构建了pAD-UT-B-IRES-EGFP载体,经PCR及测序验证,表达载体包含UT-B基因,且序列与GeneBank中收录的大鼠UT-B序列一致。重组的腺病毒感染Caco-2细胞后可检测到UT-B mRNA的表达。结论利用GatewayTM系统成功构建了包含UT-B和IRES-EGFP的腺病毒表达载体,为进一步研究其功能奠定了基础。
- 张征刘怡晟蒋更如陈凉潘曙明
- 关键词：腺病毒载体CACO-2细胞
- 精氨酸——重要的免疫营养剂被引量：13
- 2004年
- 精氨酸参与蛋白质合成 ,且是合成一氧化氮的惟一底物。精氨酸通过精氨酸酶和一氧化氮两条代谢途径参与体内的免疫调节 ,并作为一种免疫营养剂逐渐受到重视。精氨酸可以促进淋巴细胞增殖 ,促进CD3的表达 ,增强T细胞的免疫反应 ,但当体内诱导型一氧化氮合酶过度表达时 ,补充大量的精氨酸会对机体造成损害。因此 ,在复杂的免疫病理下 ,近来主张的免疫调节干预 (包含额外补充的高浓度精氨酸 )必须在细致的可以控制的条件下进行。
- 鲍倩玲刘怡晟张伟利
- 关键词：精氨酸精氨酸酶一氧化氮
- 肝细胞生长因子和丹参对大鼠急性肝损伤保护作用的实验研究被引量：1
- 1997年
- 本文报道肝细胞生长因子(HGF)、丹参和两药联用对CCl_4所致大鼠肝损伤有保护作用,表现为血清ALT、α-肿瘤坏死因子(TNF-α)、丙二醛(MDA)、肝组织匀浆MDA、肝组织钙含量和血清及肝匀浆超氧化物歧化酶(SOD)活力及光镜、电镜下肝组织病变均有明显改善,且联用优于单用。本文还对HGF、丹参合用所起协同作用的机理作一简短的讨论。
- 潘其声刘怡晟
- 关键词：肝细胞生长因子丹参肿瘤坏死因子丙二醛急性肝损伤
- 小儿全胃肠外营养的肝胆并发症被引量：18
- 2001年
- 全胃肠外营养（ＴＰＮ）相关性肝胆功能异常仍是ＴＰＮ治疗中重要的并发症。小儿主要表现为肝内胆汁淤积，长期ＴＰＮ可引起胆泥和胆石形成。其发病机制尚不清楚，一般认为其病因学是多因素的，如静脉营养过量及营养成分失平衡；某些营养素缺乏；缺乏肠道刺激及肠道营养、胃肠激素分泌减少；肠道细菌过度生长、细菌移位及可能的肝脏毒性因子等。其防治应注意给予病人平衡的营养，不要过量；给予营养素全面的溶液；如果可能应尽早经口或肠道进食。
- 刘怡晟蔡威吴圣楣
- 关键词：胃肠外营养脂肪肝胆汁郁积胆结石肝胆并发症
- 肝细胞生长因子对大鼠急性肝损伤保护作用的实验研究被引量：10
- 1997年
- 目的：研究肝细胞生长因子（ＨＧＦ）对大鼠急性肝损伤的保护作用。方法：ＣＣｌ４所致大鼠肝损伤作为观察对象。ＨＧＦ治疗组分别与损伤组、正常对照组作比较。结果：治疗组血清ＡＬＴ、α－肿瘤坏死因子（ＴＮＦ－α）、肝组织匀浆ＭＤＡ、肝组织钙含量和血清及肝组织匀浆超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活力均有明显改善。结论：肝细胞生长因子对肝脏有保护作用。
- 刘怡晟潘其声
- 关键词：肝细胞生长因子超氧化物歧化酶丙二醛肝损伤
- 厄贝沙坦对5/6肾切除及腹主动脉缩窄大鼠左心室肥厚及心肌尿素转运蛋白B表达的影响被引量：3
- 2016年
- 目的观察血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂厄贝沙坦对5/6肾切除及腹主动脉缩窄大鼠左心室肥厚及心肌尿素转运蛋白B(UT-B)表达的影响。方法 SD大鼠随机分为假手术组、5/6肾切除组(肾衰组)、腹主动脉缩窄组(心衰组)、肾衰+心衰组及相应的厄贝沙坦干预组,每组8只。分组处理后,测定各组大鼠血清肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、B型利钠肽(BNP);取大鼠心脏,测定左心室质量与全心质量的比值(LVW/HW)、全心质量与体质量的比值(HW/BW)、左心室质量与体质量的比值(LVW/BW);RT-PCR和Western blotting检测心肌UT-B表达。结果与假手术组比较,肾衰组、心衰组及肾衰+心衰组大鼠出现心肌肥厚,LVW/HW、HW/BW、LVW/BW增大,血清AngⅡ和BNP水平增高,心肌组织UT-B mRNA和UT-B蛋白表达上调;肾衰组和肾衰+心衰组SCr、BUN水平升高。与肾衰组、心衰组及肾衰+心衰组比较,相应的厄贝沙坦干预组大鼠的心肌肥厚明显减轻,LVW/HW、HW/BW、LVW/BW降低,血清AngⅡ和BNP下降,心肌UT-B mRNA和UT-B蛋白表达下调。与肾衰组和肾衰+心衰组比较,相应的厄贝沙坦干预组大鼠SCr、BUN水平降低。结论 5/6肾切除及腹主动脉缩窄均可引起大鼠心功能明显下降,出现左心室肥厚,同时心肌UT-B表达增加;厄贝沙坦在改善心、肾功能的同时抑制心肌UT-B表达,UT-B可能在肾功能不全合并心力衰竭的发生中具有重要作用。
- 刘怡晟陆玮黄海东刘爽蒋更如
- 关键词：厄贝沙坦5/6肾切除腹主动脉缩窄
- 丹参注射液对高糖诱导的大鼠腹膜间皮细胞的过氧化损伤及E钙黏素和α平滑肌肌动蛋白表达的影响被引量：2
- 2012年
- 目的研究丹参注射液对高糖作用下的大鼠腹膜间皮细胞过氧化损伤及E钙黏素和α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响。方法体外培养大鼠原代腹膜间皮细胞,第3代细胞经无血清培养基同步培养24 h后分为正常对照组、高糖诱导组(25 mg/mL葡萄糖)、甘露醇对照组(25 mg/mL甘露醇)和丹参干预组(15 mg/mL丹参注射液+25 mg/mL葡萄糖),测定各组细胞内丙二醛(MDA)和活性氧(ROS)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性;采用RT-PCR技术和Western blotting方法检测各组细胞内E钙黏素和α-SMA的mRNA和蛋白表达。结果与正常对照组比较,高糖诱导组细胞内ROS和MDA含量增高,而SOD活性降低,E钙黏素mRNA和蛋白的表达减少,α-SMA mRNA和蛋白的表达增加,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。与高糖诱导组比较,丹参干预组细胞内ROS和MDA含量减少,SOD活性增强,E钙黏素mRNA和蛋白的表达增加,而α-SMA mRNA和蛋白的表达减少,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论丹参注射液可明显减轻高糖诱导的腹膜间皮细胞的过氧化损伤,其对细胞内E钙黏素和α-SMA表达的调控作用可能与延缓腹膜纤维化作用有关。
- 刘怡晟朱淳蒋更如孙静姝刘秀英
- 关键词：丹参腹膜间皮细胞过氧化损伤Α平滑肌肌动蛋白
- 丹参对大鼠实验性肝损伤保护作用机理的探讨被引量：4
- 1998年
- 本文对75只大鼠随机分为三组,即CCl_4损伤组、丹参组、正常对照组,分别按时测定其血清ALT、TNF-α、丙二醛(MDA);肝组织匀浆MDA、肝组织钙含量和血清及肝匀浆SOD活力,并观察光镜、电镜下肝组织变化,现报道如下。
- 刘怡晟潘其声
- 关键词：肝损伤丹参中药
- 精氨酸防治全胃肠外营养所致肠屏障功能损伤的实验研究被引量：5
- 2007年
- 目的研究精氨酸对全胃肠外营养(TPN)所致肠屏障功能损伤的防治作用。方法24只幼兔,随机分为3组。正常对照组右侧颈静脉结扎后自由饮食,其余两组经右颈静脉插入硅胶管,标准TPN组输注标准TPN液[175kcal/(kg·d),200ml/(kg·d)],精氨酸强化TPN组输注精氨酸占总热卡2%的等氮等热卡的TPN液。7d后分别取血浆及回肠标本观察肠黏膜形态学改变、肠菌移位率、血浆和回肠组织二胺氧化酶(diamine oxidase,DAO)活性、血浆D!乳酸含量。结果肠黏膜在标准TPN组变薄、萎缩(P<0.01),而精氨酸强化TPN组肠黏膜的萎缩较标准TPN组减轻(P<0.05);精氨酸强化TPN组肠菌移位率较标准TPN组显著降低(P<0.05),与正常对照组差异无统计学意义(P>0.05);精氨酸强化TPN组血浆和回肠组织DAO活性较标准TPN组升高(P<0.05),与正常对照组差异无统计学意义(P>0.05);精氨酸强化TPN组血浆D!乳酸含量较标准TPN组降低(P<0.01),较正常对照组仍偏高(P<0.05)。结论精氨酸对维持肠黏膜形态和功能的完整性具有重要作用,添加适量外源性的精氨酸具有改善TPN所致小肠黏膜损伤的作用。
- 鲍倩玲刘怡晟张伟利
- 关键词：精氨酸全胃肠外营养肠屏障功能二胺氧化酶D-乳酸
- NKCC1在慢性肾脏病大鼠主动脉纤维化中的作用研究
- 2020年
- 该文探讨了Na-K-2Cl协同转运蛋白1(Na-K-2Cl cotransporter 1,NKCC1)在慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)大鼠主动脉纤维化中的作用。采用5/6肾切除方法建立CKD大鼠模型,尾套法测定大鼠血压,脲酶法测定血清尿素氮(blood urea nitrogen,BUN),肌氨酸氧化酶法测定血清肌酐(serum creatinine,Scr);利用苏木素–伊红(hematoxylin and eosin,HE)染色观察组织形态,Masson染色观察组织纤维化情况;利用Real-time PCR、Western blot和免疫组织化学染色法检测大鼠肾脏和主动脉组织中NKCC1的表达;体外培养大鼠主动脉内皮细胞(endothelial cell,EC),通过免疫荧光实验观察细胞中Ⅰ型胶原(Collagen-Ⅰ,Col-Ⅰ)、Ⅲ型胶原(Collagen-Ⅲ,Col-Ⅲ)的表达,利用Western blot检测α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMA)、血小板–内皮细胞黏附分子(CD31)、钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)的表达。结果显示,CKD大鼠的平均收缩压(systolic blood pressure,SBP)较术前和假手术组(sham)均明显升高(P<0.05),BUN和Scr显著高于sham组(P<0.05);CKD大鼠肾脏和主动脉组织损伤严重且纤维化明显,NKCC1的表达较sham组明显增加;醛固酮(aldosterone)使EC中NKCC1、Col-Ⅰ和Col-Ⅲ增多,间质细胞标志物α-SMA和vimentin上调,内皮细胞标志物CD31和E-cadherin下调,在此基础上用布美他尼(bumetanide)使NKCC1、Col-Ⅰ和Col-Ⅲ减少,α-SMA和vimentin表达下降,CD31和E-cadherin升高。该研究表明,NKCC1可能通过增强内皮–间质转化(endothelial-to-mesenchymal transition,EndoMT)促进CKD主动脉纤维化。
- 刘爽刘怡晟应思琦潘林蓉蒋更如
- 关键词：慢性肾脏病纤维化主动脉
