大连大学生命科学与技术学院
- 作品数：865 被引量：2,957H指数：21
- 相关作者：王永奇于大永张立娟李倩迟雪梅更多>>
- 相关机构：大连工业大学生物工程学院中国科学院大连化学物理研究所大连理工大学生命科学与技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金辽宁省自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学理学更多>>
- 烟台黑猪SLA-2基因真核表达载体的构建及表达
- 2021年
- 为构建烟台黑猪SLA-2基因(SLA-2-YT)的真核表达载体SLA-2-YT/pCDH并将其在真核细胞中表达,根据SLA-2-YT编码区基因序列设计1对引物,以SLA-2-YT/pMD18-T全基因克隆表达载体为模板进行PCR扩增获得SLA-2-YT编码区基因片段,在上下游引物的5'端分别添加限制性内切酶Xba I和Not I的酶切位点,将目的基因经pMD 19-T Simple Vector TA克隆后与pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro真核表达载体连接,获得的重组质粒转化至大肠杆菌Stbl 3感受态细胞,对扩大培养的单克隆菌株抽提质粒,使用双酶切和测序验证插入序列。对真核表达载体构建正确的菌株抽提无内毒素质粒,通过慢病毒包装和感染将质粒转染至sT2细胞,通过Western Blotting检测sT2细胞中SLA-2-YT基因的表达情况。结果显示,成功构建了SLA-2-YT/pCDH重组真核表达载体。重组质粒进行慢病毒包装和感染sT2细胞,经嘌呤霉素筛选后,成功获得阳性细胞克隆。Western Blotting检测显示SLA-2-YT/pCDH在sT2细胞中得到了优势表达,其融合蛋白的分子量大小为45 kD,与理论设计值相符。该实验成功构建了SLA-2-YT编码区基因的真核表达载体,并证实了SLA-2-YT编码区基因能够在sT2细胞中优势表达,为下一步开展SLA-2-YT递呈CTL表位的研究提供了材料。
- 胡晓王宝宝窦少华姜南付常振金行高凤山
- 关键词：真核表达载体转染
- 人β_2-glycoprotein Ⅰ及其第Ⅴ结构域蛋白的原核表达、纯化和活性鉴定被引量：2
- 2011年
- 目的:旨在重组表达人源β2-GPI及其第V结构域基因,探讨后者在抗自身免疫性动脉粥样硬化实验中的干预作用。方法:以实验室保存的CTA727-1重组质粒为模板克隆β2-GPI及其第V结构域基因,构建pET32-β2-GPI和pET32-DV重组表达载体,分别转化至大肠杆菌Rosetta-gami。经IPTG诱导表达,镍离子亲和层析柱纯化重组蛋白,并采用Western blot、HPTLC和ELISA方法验证了重组蛋白的活性与功能。结果:β2-GPI及其第V结构域目的基因被分别克隆至原核表达载体pET-32a-c(+),诱导出具备CL和oxLig-1结合活性的β2-GPI及第V结构域融合蛋白,ELISA实验显示第V结构域融合蛋白可抑制oxLig-1/(r)β2-GPI/Antibody免疫复合物的形成。结论:成功构建了pET32-β2-GPI及pET32-DV表达载体,获得高水平表达且具备活性的β2-GPI和第V结构域重组蛋白,为研究治疗动脉粥样硬化等疾病的多肽药物奠定了基础。
- 王贺迟彦王仁军李文哲马艳华李敬达刘庆平
- 关键词：原核表达
- β-甘露聚糖酶生产菌株的筛选鉴定及发酵条件的研究被引量：5
- 2016年
- 以魔芋粉为唯一碳源,筛选产β-甘露聚糖酶的菌株细菌,命名为HY-01,采用单因素实验方法对其发酵条件进行研究。结果表明:发酵时间为24 h,温度为35℃,pH 7.0,装液量80 m L,转速180 r/min和接种量8%,酶活力达50.51 U/m L。
- 李晓艳张庆芳于爽迟乃玉
- 关键词：细菌Β-甘露聚糖酶
- 双氢青蒿素抑制肝癌细胞侵袭和转移的初步研究被引量：16
- 2020年
- 有关文献报道称,双氢青蒿素能够使磷酸化黏附激酶与基质金属蛋白酶-2的表达减少,抑制卵巢癌细胞的生长、迁移和侵袭;双氢青蒿素能够通过TGF-β/Smad信号通路,促进Treg细胞的生成,起到免疫抑制作用;双氢青蒿素还能够通过抑制VEGF受体KDR的表达,进而抑制肺癌细胞的生长。但双氢青蒿素在肝癌细胞方面的研究较少,为了初步探究双氢青蒿素对于肝癌细胞侵袭和转移的影响,选择肝癌细胞7402和高转移肝癌细胞MHCC97H,使用CCK-8法和结晶紫染色法检测双氢青蒿素对肝癌细胞7402和高转移肝癌细胞MHCC97H生长情况的影响。通过细胞划痕实验和Transwell小室间接反映双氢青蒿素对肝癌细胞7402和高转移肝癌细胞MHCC97H侵袭和转移的影响。Western blot法检测双氢青蒿素作用于细胞48 h,EGFR及其下游信号通路的蛋白表达水平。结果显示,双氢青蒿素在25μmol·L^-1时能够抑制肝癌细胞7402和高转移肝癌细胞MHCC97H的生长。与对照组相比,细胞克隆形成数量明显减少,细胞迁移和侵袭能力减弱。Western blot结果显示,与对照组相比,双氢青蒿素组可下调EGFR及其下游信号通路p-AKT,p-ERK,N-cadherin,Snail,Slug蛋白表达水平,上调E-cadherin蛋白表达水平,从而影响肝癌细胞7402和高转移肝癌细胞MHCC97H的迁移、侵袭和转移。
- 冯宝民韩鑫龙李雨桐袁立霞孙颖超唐玲
- 关键词：肝癌细胞EGFREMT
- 重组人C反应蛋白在甲醇酵母中的分泌表达及鉴定
- 2013年
- 目的构建重组人C反应蛋白(rhCRP)甲醇酵母分泌表达菌株,表达、纯化rhCRP并鉴定其免疫反应性。方法将人工设计合成的rhCRP基因克隆到甲醇酵母表达载体pPICZαA上,经SacⅠ线性化得到重组质粒pPICZαA/rhCRP后转化至甲醇酵母X-33中,利用甲醇诱导进行分泌表达,并用组氨酸标签进行亲和层析纯化rhCRP。采用SDS-PAGE、Western blotting检测表达、纯化的目的蛋白,通过间接酶联免疫吸附试验(ELISA)鉴定其免疫反应性和稳定性。结果成功构建人CRP的重组甲醇酵母表达载体pPICZαA/rhCRP,重组酵母菌株成功诱导分泌表达23×103的rhCRP;一步纯化即得纯度为90.42%的目的蛋白,间接ELISA法检测表明,纯化产物rhCRP具有特异的免疫反应性和一定的稳定性。结论利用甲醇酵母表达系统,成功获得了较高纯度的具有免疫反应性的rhCRP,为下一步制备抗人CRP抗体及自主研发人CRP检测试剂提供重要的实验基础。
- 李军明林衡张立超葛高顺胡学军
- 关键词：C反应蛋白质甲醇酵母分泌表达免疫反应性
- 海洋肌酐水解酶菌株的筛选鉴定及其酶学性质研究被引量：4
- 2017年
- 从渤海海泥中筛选出一株肌酐水解酶高产菌株S-09,经形态学、生理生化特征并结合16S rDNA系统发育分析,鉴定菌株为微小杆菌属(Exiguobacterium sp.)。对所产肌酐水解酶进行酶学性质研究表明,该酶的最适作用温度为30℃,热稳定性较差,最适作用pH值为7.5,碱性条件下,pH值稳定性较好;Co^(2+)、Mn^(2+)对酶的激活作用较强,Ag^+、Hg^(2+)对酶有显著的抑制作用。
- 石群张庆芳杨丽娜王晓辉窦少华迟乃玉
- 关键词：菌株筛选酶学性质
- 迷你蝴蝶兰花梗侧芽组织培养技术的研究被引量：4
- 2016年
- 筛选出迷你蝴蝶兰花梗侧芽组织培养过程中的最适增殖培养基和生根培养基。利用无菌操作技术,将蝴蝶兰花梗侧芽进行繁殖。通过本研究方法最终获得了蝴蝶兰组织培养过程中最适的增殖培养基和最适的生根培养基。最适增殖培养基为1/2MS+6-BA 8.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+琼脂8 g/L+蔗糖30 g/L+香蕉泥30 g/L+活性炭2 g/L;最适生根培养基为1/2MS+6-BA 4.0 mg/L+NAA 0.8 mg/L+琼脂8 g/L+蔗糖30 g/L+香蕉泥30 g/L+活性炭2 g/L。
- 侯义龙冷阳吕杰凯倪天泽钱文丹冯宁
- 关键词：继代
- 果树病毒不同检测方法灵敏性比较
- 苹果褪绿叶斑病毒（ACLSV）是感染仁果类和核果类果树的重要病毒。作者应用RT-PCR技术和PAS-ELISA技术成功地检测了该病毒,并对指示植物中感染该病毒的检测结果进行了报道。试验结果表明,RT-PCR技术的检测灵敏...
- 侯义龙张开春曹同吴雅琴李春敏
- 关键词：苹果褪绿叶斑病毒RT-PCRPAS-ELISA
- 文献传递
- 基因工程教学改革的探索与实践被引量：10
- 2011年
- 基因工程是生物工程专业的主干课程，是现代生物技术的核心。传统的基因工程教学方式已经不能够满足学生的学习需要，因此，为了培养学生创新精神和实践能力，提高学生的综合素质，我们充分运用现代化多媒体教学手段，开展了以构建理论和实践教学体系，优化课程教学内容，加强实践教学环节、加强网络课程建设，改进教学方法和考核方式等为内容的教学改革。既注重传授学生专业知识，曼注重传授学会“学习”的方法，以提高基因工程课堂教学质量，满足生物工程专业和21世纪人才培养要求。
- 逄越魏东
- 关键词：基因工程教学内容教学方法
- 芦荟(Aloe)水提物对冷藏肉的抗氧化作用
- 2009年
- 据报道芦荟具有抗氧化功能。本论文研究了两种芦荟水浸液对延长冷藏肉新鲜度的作用。结果显示:两种芦荟对食用肉均有不同程度的保护作用。冷藏肉的对照样和绿芦荟添加样的丙二醛含量均有上升,7日时均达到3.6μg/g肉样左右,之后有所下降。而木立芦荟添加肉样的丙二醛含量则稳定在1.6μg/g肉样以内;两种芦荟添加肉样的挥发性盐基氮含量始终低于对照肉样,其中木立芦荟更低。结果显示:芦荟水浸液可以通过抗氧化作用防止食用肉在贮藏中的劣化,而木立芦荟比绿芦荟效果更好。
- 朱永宁泉本胜利
- 关键词：抗氧化挥发性盐基氮
