王磊
- 作品数：7 被引量：28H指数：4
- 供职机构：宁夏医科大学检验学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金宁夏回族自治区自然科学基金教育部“新世纪优秀人才支持计划”更多>>
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- 同型半胱氨酸对肝细胞增殖及CyclinD1、ALT和AST表达的影响被引量：4
- 2014年
- 目的探讨同型半胱氨酸(Hcy)对肝细胞增殖及细胞周期素D1(CyclinD1)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)表达的影响。方法将HL-7702细胞体外常规培养,分别用0、50、100、200、500μmol/L Hcy刺激细胞,分别于刺激后6、12、24h采用MTT法检测肝细胞的增殖情况;采用荧光定量PCR(RT-qPCR)检测CyclinD1mRNA的表达;采用微板法检测各组细胞培养液中ALT和AST的变化。结果不同浓度Hcy刺激肝细胞不同时间后,细胞的增殖受到抑制,其中100、200、500μmol/L Hcy组与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),24h作用最明显;不同浓度Hcy刺激肝细胞24h后,CyclinD1mRNA的表达显著下降(P<0.01),细胞培养液中ALT和AST水平显著升高(P<0.01)。结论 Hcy可以抑制肝细胞增殖,并引起CyclinD1的mRNA表达下降,ALT和AST释放增多。
- 蔡欣杨晓玲杨程曹成建王磊田珏张焱姜怡邓
- 关键词：肝细胞细胞增殖同型半胱氨酸细胞周期素D1丙氨酸转氨酶天冬氨酸氨基转移酶
- 同型半胱氨酸引起平滑肌细胞LDLR启动子区DNA甲基化改变的位点分析被引量：5
- 2012年
- 目的探讨同型半胱氨酸(Hcy)引起平滑肌细胞低密度脂蛋白受体(LDLR)启动子区DNA甲基化改变的特点及机制。方法原代培养人脐静脉平滑肌细胞(VSMCs)并鉴定,用50、100、200、500μmol·L-1Hcy干预,巢式降落式甲基化特异性PCR(nMS-PCR)法检测LDLR甲基化改变,甲基敏感性限制性内切酶HpaII和BssHII分析LDLR DNA甲基接受能力。结果 50、100、200、500μmol·L-1Hcy组平滑肌细胞LDLR启动子区DNA去甲基化(P<0.05),经限制性内切酶HpaII消化后,LDLR启动子区C↓CGG序列被酶切,经限制性内切酶BssHII消化后,LDLR启动子区GC↓GCGC序列被酶切,与对照组比较,DNA甲基接受能力下降,其中HpaII引起的效果更明显。结论 Hcy可使平滑肌细胞LDLR启动子区DNA去甲基化的效应偏重于一般的CpG二核苷酸序列,CpG岛所受影响相对较小。
- 杨安宁王菊杨晓玲马长剑孙炜炜马胜超王磊徐华姜怡邓
- 关键词：同型半胱氨酸低密度脂蛋白受体DNA甲基化平滑肌细胞
- 高同型半胱氨酸血症经内质网途径影响ApoE-/-鼠肝细胞凋亡被引量：4
- 2014年
- 目的观察高同型半胱氨酸血症(HHcy)对ApoE-/-鼠肝细胞凋亡的影响并探讨其可能机制。方法 36只ApoE-/-小鼠随机分为3组,每组12只:①ApoE-/-对照组(ApoE-/-group):普通饮食饲养;②蛋氨酸饮食组(methionine diet group):普通饮食+1.7%蛋氨酸饲养;③干预组(treatment group):普通饮食+1.7%蛋氨酸+0.006%叶酸及0.0004%VitB12饲养。另取12只正常C57 BL/6J小鼠给予普通饮食,作为正常对照组(normal control group)。饲养20周后,ELISA测定血清同型半胱氨酸(Hcy)浓度和肝组织Caspase-12含量;全自动生化分析仪测定血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性;DAPI染色法观察肝组织细胞核形态;电镜观察肝脏组织细胞超微结构。结果与正常对照组和ApoE-/-对照组相比,蛋氨酸饮食组Hcy浓度分别增高2.4倍(P<0.01)和2.5倍(P<0.01);ALT活性分别增高2.0倍(P<0.05)和1.2倍(P<0.05);各组AST活性无明显差异;肝组织切片DAPI染色及电镜结果显示,蛋氨酸饮食组小鼠肝细胞出现凋亡的形态学改变,蛋氨酸饮食组小鼠肝细胞线粒体肿胀、浓缩,内质网大量增生,可见细胞凋亡前体及凋亡小体;Caspase-12活性检测显示蛋氨酸饮食组较正常对照组增高(P<0.05)。与蛋氨酸饮食组比较,干预组小鼠血清Hcy浓度降低,Caspase-12活性下降,肝细胞病理变化减轻,血清ALT活性明显降低。结论 HHcy可能通过影响ApoE-/-鼠内质网功能改变,引起肝细胞凋亡。
- 王磊田珏曹成建杨程蔡欣周龙霞杨晓玲姜怡邓
- 关键词：高同型半胱氨酸血症内质网肝细胞
- 动脉粥样硬化患者基质金属蛋白酶组织抑制剂1基因DNA高甲基化的研究被引量：7
- 2013年
- 目的:探讨动脉粥样硬化(AS)患者基质金属蛋白酶组织抑制剂1(TIMP-1)基因DNA启动子区甲基化修饰的改变。方法:选择经颈部多普勒超声确诊AS患者40例以及正常者作为对照组40例,采用ELISA法测定血浆TIMP-1蛋白水平,荧光定量PCR检测外周血TIMP-1的mRNA表达,巢氏降落式甲基化特异性PCR(ntMSP)测定外周血TIMP-1基因DNA启动子区的甲基化程度。结果:AS组血浆TIMP-1含量明显降低,外周血TIMP-1的mRNA表达也显著低于对照组(P<0.05),TIMP-1基因启动子区DNA甲基化程度显著高于对照组(P<0.05)。结论:AS患者TIMP-1含量降低,其机制可能与TIMP-1基因启动子区高甲基化有关。
- 杨程田珏蔡欣王磊曹成建杨晓玲陈久凯蒲雅洁姜怡邓
- 关键词：DNA甲基化动脉粥样硬化
- ABCA1、ACAT1 DNA甲基化在Hcy致THP-1单核源性泡沫细胞胆固醇流出中作用研究被引量：9
- 2014年
- 目的探讨ABCA1、ACAT1 DNA甲基化在同型半胱氨酸(Hcy)致THP-1单核源性泡沫细胞胆固醇流出中的作用。方法复制泡沫细胞模型,用50、100、200、500μmol·L-1Hcy和100μmol·L-1Hcy+叶酸+维生素B12(100+F+V)干预,并设对照组(0μmol·L-1Hcy)。油红O染色观察泡沫细胞形成,巢式降落式甲基化特异性PCR(nMS-PCR)检测ABCA1、ACAT1 DNA甲基化水平,并分析两者比值变化;ELISA-like法检测DNA甲基转移酶(DNMTs)活性;化学比色法分析细胞内胆固醇含量。结果成功复制了泡沫细胞模型;给予不同浓度Hcy刺激后,ABCA1 DNA甲基化改变呈上升趋势,ACAT1 DNA甲基化改变呈下降趋势,给予100+F+V干预后可逆转上述变化,其中ABCA1 DNA甲基化改变更明显;同时,不同浓度Hcy可使泡沫细胞内DNMTs活性和胆固醇含量增加。结论 ABCA1和ACAT1 DNA甲基化的改变参与了Hcy致THP-1单核源性泡沫细胞胆固醇流出,DNMTs可能起关键调控作用。
- 杨安宁王磊周龙霞赵丽王艳华蔡欣曹成建杨程陈久凯马文斌姜怡邓
- 关键词：酰基辅酶ADNA甲基化胆固醇流出
- OX40/OX40L共刺激信号在血管平滑肌细胞增殖中的作用被引量：1
- 2014年
- 目的观察OX40/OX40L对血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响。方法原代培养人脐静脉血管平滑肌细胞,设计OX40L小分子干扰片段,转染VSMCs。实验分3组院OX40LRNA干扰组(SiOX40L)、NC组和空白对照组( Con)。将SiOX40L和NC用脂质体2000转染入VSMCs,提取细胞的总RNA,逆转录成cDNA,用real-timePCR的方法检测VSMCs中OX40L和OX40的mRNA表达,用免疫组织化学方法检测VSMCs中的OX40L的蛋白表达,并用MTT法检测OX40L对VSMCs增殖的影响。结果 SiOX40L组OX40L和OX40的mRNA表达显著减少,且该组血管平滑肌细胞增殖明显增强。结论 OX40/OX40L系统可能参与了VSMCs的增殖。
- 杨晓玲曹成建杨安宁马胜超王磊王艳华徐华姜怡邓
- 关键词：OX40LOX40血管平滑肌细胞
- DNMT3B mRNA3′非编码区报告基因载体的构建与功能验证
- 2014年
- 目的构建用于鉴定microRNA(miRNA)靶基因的报告基因系统并进行功能验证,为研究动脉粥样硬化的发生发展机制奠定良好基础。方法在pGL3-control载体的荧光素酶基因下游克隆位点插入DNA甲基转移酶3B(DNMT3B)3′非编码区序列,经酶切、测序验证是否插入及正确性。生物信息学分析DNMT3B与miRNA-125b的靶向关系,并用miRNA-125b过表达载体与所构建载体共转染人血管平滑肌细胞,双荧光素酶报告基因系统检测荧光素酶活性。结果成功构建了DNMT3B3′非编码区报告基因载体,经酶切和测序鉴定正确;共转染细胞24h后,双荧光素酶报告基因系统检测荧光素酶活性,结果显示与空载体对照组相比,构建载体组荧光素酶活性下降了54.8%(P<0.01)。结论成功构建了DNMT3BmRNA 3′非编码区报告基因载体,且提示miRNA-125b靶向调控了DNMT3B。
- 曹成建杨晓玲王磊杨程蔡欣徐华王洁姜怡邓
- 关键词：DNA甲基转移酶3B微RNAS表遗传学
