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王斌: 作品数：28 被引量：124H指数：6; 供职机构：华南理工大学生物科学与工程学院更多>>; 发文基金：广东省自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目广东省科技攻关计划更多>>; 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程农业科学更多>>

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解淀粉芽孢杆菌ptsGHI基因的敲除及缺陷株生长特性被引量：2: 2012年; 在解淀粉芽孢杆菌磷酸转移酶系统中,葡萄糖主要是由ptsGHI操纵子编码的酶EI、HPr、EIIGlc转运入细胞.文中运用PCR技术,扩增出ptsG和ptsHI基因上下游的DNA片段,共约1kbp,用融合PCR连接上下游片段后,再连接到温敏型质粒pKS2上,然后电转化到解淀粉芽孢杆菌XH7中,最终构建了ptsG和ptsHI基因缺陷株.实验结果显示:在LB培养基中,ptsG及ptsHI基因缺陷株的生长状况与野生型菌株无明显差异;在含葡萄糖的LB培养基中,ptsG基因缺陷株的最高菌密度比野生型菌株提高了28%,且平稳期比野生型菌株要长,而ptsHI基因缺陷株的最高菌密度比野生型菌株降低了约32%,与其在LB中的生长状况基本一致;ptsG和ptsHI缺陷株及野生型菌株经鸟苷发酵实验后,ptsG基因缺陷株的鸟苷产量比野生型菌株提高了约24%,ptsHI基因缺陷株的鸟苷产量则比野生型菌株降低了约82%.以上结果表明:解淀粉芽孢杆菌ptsG基因缺陷株具有良好的生长能力和产物合成能力.; 杨慧林王坤廖瑜玲王斌林影潘力; 关键词：解淀粉芽孢杆菌基因敲除代谢工程

丝状真菌米曲霉基因组水平蛋白质与DNA相互作用的研究: 工业丝状真菌米曲霉的基因组中已预测有570 个转录因子编码基因，目前只有大约5％的转录因子通过传统的方法被鉴定，并且对米曲霉转录因子在基因组上结合位点的信息及其调控机制知之甚少。基于新一代高通量测序基础上的DNaseI-...; 王斌王超潘力

副溶血弧菌菌株229基因组测序及其致病因子的注释被引量：6: 2018年; 本文对从冰冻海鱼中分离到的副溶血弧菌菌株229进行基因组测序,并对注释的基因进行功能聚类分析,以分析其致病因子,为研究其致病机制提供基因组全局水平的数据支持。完成了副溶血弧菌菌株229的基因组测序及组装,所得基因组4.97 Mb,GC含量为43.90%。基因注释获得4940个蛋白质编码基因(CDS),其中1304个CDS具有GO功能注释。WEGO注释显示大量CDS对于副溶血弧菌入侵宿主及随后的代谢过程发挥重要作用。获得了与副溶血弧菌致病性相关的致病因子,包括溶血素(hemolysin)、Ⅲ型因子(TypeⅢsecretion system,TTSS),这些因子位于不同的染色体位点,形成独立的致病因子簇。副溶血弧菌菌株229基因组组装和功能注释为研究副溶血弧菌致病性的遗传学基础提供了有价值的数据。; 林毅英潘力吴清平王斌; 关键词：副溶血弧菌基因组测序致病因子功能注释

基因组功能注释分析米曲霉ZA189优势酿造性能的遗传基础: 2021年; 米曲霉ZA189是以米曲霉沪酿3.042为出发菌株经传统诱变获得的,具有中性蛋白酶、淀粉酶、谷氨酰胺酶活力高的特性。为深入研究米曲霉ZA189的遗传背景,评估其作为酱油酿造菌株的性能,本研究利用新一代纳米孔测序技术完成了米曲霉ZA189基因组的测序、组装和功能注释。获得的基因组全长36.89 Mb,包含16条Scaffold,测序深度达到132.05×。基因注释表明,米曲霉ZA189基因组包含263个tRNA基因和72个rRNA基因,这是米曲霉高效表达蛋白的遗传基础。KOG和KEGG注释表明米曲霉ZA189具有强大的能量合成、蛋白质合成及次级代谢产物合成能力,这是其在发酵工业广泛应用并产生多种风味功能物质的遗传基础。碳水化合物活性酶CAZy注释和蛋白酶注释表明,米曲霉ZA189基因组中包含多达330个糖苷水解酶(GH)和30个蛋白酶基因,这是米曲霉ZA189作为酱油酿造菌株降解大豆蛋白和碳水化合物的关键性能指标。通过本研究对酱油酿造菌株米曲霉ZA189的基因组有了更加深入的理解,通过对蛋白表达系统基因、次级代谢基因、碳水化合物活性酶及蛋白酶的功能注释,为指导其在酱油酿造中的应用提供了理论支持。; 侯莎吴昌正潘力王斌; 关键词：基因组蛋白酶

SpCas9蛋白的高效可溶表达及应用: 2023年; 规律间隔成簇短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)/CRISPR相关蛋白9(CRISPR-associated protein 9,Cas9)主要元件Cas9蛋白一般采用大肠杆菌表达,但在表达纯化过程中易出现形成包涵体形式的不溶解性蛋白,内毒素含量高、蛋白过大导致蛋白折叠不正确、产量低等问题。为实现化脓性链球菌(Streptococcus pyogenes)Cas9蛋白(SpCas9)在大肠杆菌中的高效可溶表达,进一步促进其应用及编辑技术的推广,本研究应用GB1促溶标签提高Cas9蛋白表达量及溶解度,同时通过使用多重启动子策略进一步提高了Cas9蛋白表达量。两种策略的组合使Cas9蛋白表达量提升了2.52倍。体外酶切分析显示融合GB1标签的Cas9蛋白功能活性不受影响。进一步组装RNP复合物转化黑曲霉宿主成功破坏了pyrG基因。; 廖清郑俊威王斌潘力

沪酿3.042米曲霉原生质体复合诱变及高活力蛋白酶菌株选育研究: 以沪酿3.042米曲霉的孢子原生质体为诱变对象,在溶菌酶2％+蜗牛酶2％+纤维素酶2％;酶解时间5h;酶解温度33℃的孢子原生质体最佳制备条件作用后,对其进行紫外线-氯化锂,NTG复合诱变,并利用酪蛋白平板初筛和固体发酵...; 胡杰潘力罗立新王斌卢锦桃; 关键词：米曲霉蛋白酶活力氯化锂; 文献传递

疏棉状嗜热丝孢菌耐热脂肪酶在无孢黑曲霉中的高效表达被引量：4: 2012年; 综合考虑密码子偏爱性、RNA稳定性以及自由能等因素,对疏棉状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanuginosus)耐热脂肪酶(tll)基因序列进行密码子优化并全基因合成。将合成的tll基因连接到克隆载体,然后亚克隆到表达载体pHGWPT-tll,采用根癌农杆菌介导转化无孢黑曲霉SH-2。经过三丁酸甘油酯平板、SDS-PAGE以及Western Blotting鉴定,成功表达了tll基因。发酵72h,转化子脂肪酶酶活最高达36U/mL。转化子经等离子诱变得到的突变株的脂肪酶比活力比出发菌株提高约37%。; 陈婧王斌李德明潘力; 关键词：黑曲霉

黄曲霉毒素对费氏弧菌发光的影响被引量：4: 2011年; 【目的】探讨黄曲霉毒素对一种发光细菌——费氏弧菌发光的抑制效应。【方法】黄曲霉毒素或产黄曲霉毒素的菌株培养液对费氏弧菌进行处理后,利用多功能酶标仪检测费氏弧菌的发光强度,研究黄曲霉毒素对费氏弧菌发光的影响。【结果】黄曲霉毒素浓度的对数值与费氏弧菌发光的抑制率呈线性关系,依据所得的回归方程可以快速准确地检测不同微生物产毒素的情况:6株不同来源的黄曲霉菌株均能够产毒素,以黄曲霉毒素含量表示的毒素量在14.94-46.45mg/L之间,1株米曲霉不产毒素。【结论】费氏弧菌发光强度的改变可以较准确地反映微生物产毒素的能力,尤其是微生物产黄曲霉毒素的能力,为在工农业生产中快速检测黄曲霉毒素提供了新的线索,有望发展成为一种检测黄曲霉毒素的新技术。; 李翔潘力王斌; 关键词：黄曲霉毒素光抑制生物毒素

RAPD分子标记在酱油生产菌系统发育分析中的应用: 本文以米曲霉沪酿3．042(AS3．951)、酱油曲霉AS3．495为参照,利用选定的9个随机引物对从商用酱油曲精中分离到的8株酱油生产菌进行RAPD分析。通过改进提取方法, 获得了质量较好的基因组DNA,分光光度法检验...; 王斌潘力郭勇; 文献传递

亮氨酸氨肽酶LapA在无孢黑曲霉中的重组表达优化及酶学性质: 2021年; 针对目前国产食品级亮氨酸氨肽酶的工业生产产量不高的现状,将米曲霉、黑曲霉和酱油曲霉的5个亮氨酸氨肽酶基因(lapA、lap1O、lap2、lap1S、lap1N)在低蛋白背景的无孢黑曲霉HL-1中进行重组表达,通过信号肽替换对其编码区进行改造,利用杂合启动子PnaII及营养缺陷标记pyrG构建表达载体,并基于规律间隔成簇短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)/Cas9工具设计亮氨酸氨肽酶的基因组定点整合策略,获得高活力的亮氨酸氨肽酶表达菌株,重组菌株LapA-C的亮氨酸氨肽酶活力达到11 701.2 U/mL,比未利用CRISPR工具的LapA-T重组表达菌株的酶活力(2 476.0 U/mL)提高了约3.7倍。此外,通过融合6×His标签实现了重组亮氨酸氨肽酶LapA的纯化,并对其进行了酶学性质研究:蛋白质大小约为35.0 kDa,重组亮氨酸氨肽酶LapA最适pH值为8.5,最适温度为65℃。综上所述,本研究基于CRISPR策略成功实现了亮氨酸氨肽酶在黑曲霉中的高效重组表达。; 林晓彤董良波郑俊威王斌潘力; 关键词：黑曲霉酶学性质

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