王晓
- 作品数：16 被引量：42H指数：3
- 供职机构：华侨大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金福建省自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学轻工技术与工程更多>>
- 治疗用质粒DNACTAB纯化工艺的优化被引量：2
- 2013年
- 目的优化治疗用质粒DNA十六烷基三甲基溴化铵(cetyltrimethylammonium bromide,CTAB)纯化工艺,为其规模化生产奠定基础。方法采用碱裂解法裂解含质粒pEGFP的大肠埃希菌(E.coli)DH5α菌种,在碱裂解液中加入不同终浓度的CTAB及不同终浓度的NaCl、KAc、LiCl、CaCl2、MgCl2溶液,确定CTAB纯化质粒DNA的最佳浓度,并分析盐对质粒DNA选择性释放的影响。分别采用BCA蛋白浓度测定试剂盒、内毒素检测试剂盒和Real time-PCR法检测纯化的质粒DNA中宿主蛋白含量、内毒素含量和细菌基因组DNA含量;通过A549细胞及动物转染试验检测纯化质粒DNA的体外和体内生物活性。结果 CTAB纯化质粒DNA的最佳浓度为0.004%;用NaCl、KAc或LiCl提取的质粒DNA中,RNA均未完全去除,而用CaCl2或MgCl2提取的质粒DNA中,RNA含量(RNA/nucleic acid)均小于1%,CaCl2最佳终浓度范围为0.4～0.5 mol/L,MgCl2最佳浓度范围为0.3～0.4 mol/L;使用0.4 mol/L MgCl2的CTAB法纯化的质粒pEGFP的杂蛋白质、细菌基因组DNA、内毒素和RNA含量均符合FDA对治疗用质粒DNA的要求;纯化的质粒pEGFP DNA回收率达80%以上,且体外生物活性显著高于市售试剂盒纯化的质粒(P<0.05),而体内生物活性与试剂盒纯化的质粒相当(P>0.05)。结论优化了CTAB法纯化质粒DNA的工艺,该方法操作简便,经济高效,纯化得到的质粒DNA各项指标均符合FDA质量标准,且转染基因表达效率较高,质量可靠,适用于质粒DNA的大规模纯化生产。
- 陈婷刘嘉王晓刁勇
- 关键词：十六烷基三甲基溴化铵质粒纯化基因治疗
- 麦冬多糖的结构研究进展被引量：5
- 2015年
- 麦冬是一种传统的中药材,具有多种药用功效。麦冬多糖作为麦冬的主要成分之一,具有抗心肌缺血、降血糖、耐缺氧能力、促进免疫功能等药理作用。麦冬多糖因麦冬产地不同,在一级结构上有差异。本文对各产地麦冬多糖结构研究进展进行综述,为麦冬多糖的进一步研究开发提供参考。
- 邱飞王晓刁勇
- 关键词：麦冬多糖分子量单糖组成
- 重组腺相关病毒基因药物三种滴度的比较与分析被引量：2
- 2021年
- 采用酶联免疫吸附测定(ELISA)、实时荧光定量聚合酶链反应(Q-PCR)和转导方法对重组腺相关病毒(rAAV)的衣壳滴度、基因组滴度、转导滴度进行定量,并比较衣壳滴度/基因组滴度(P/GC)和基因组滴度/转导滴度(GC/TU).实验结果表明:3批rAAV的平均衣壳滴度为3.65×10^(13)P·mL^(-1),平均基因组滴度为8.67×10^(11)GC·mL^(-1),平均转导滴度为9.85×10^(9)TU·mL^(-1),P/GC平均值为41.70,GC/TU平均值为88.20,P/GC和GC/TU平均值接近于AAV2标准品,说明文中方法的制备工艺成熟、稳定,制备的rAAV感染活性较高.
- 王晓黄晓平黎玲刁勇
- 关键词：重组腺相关病毒基因治疗
- 重组人kallistatin蛋白在毕赤酵母中高效表达及药效学分析
- 黄晓平王晓许瑞安刁勇
- 重组人kallistatin蛋白在毕赤酵母中的高效表达及生物活性分析被引量：10
- 2010年
- 为了研究kallistatin(Kal)的生物活性,本实验构建了可分泌表达Kal的毕赤酵母菌株。首先通过PCR方法从pAAV-Kal中扩增出KalcDNA,并克隆至酵母表达载体pPIC9,得到甲醇酵母分泌型表达载体pPIC9-Kal,然后将载体线性化并电击转化毕赤酵母GS115(his4),通过MD平板筛选出阳性表达菌株。阳性表达菌株在BMMY培养基(pH7.0)中29℃培养,经2%甲醇诱导表达96h,摇瓶表达量可达14mg/L。表达上清经PhenylSuperose、Heparin SepharoseFF分离纯化,目的蛋白纯度达到98%,分子量为58kDa。生物活性实验显示,所得到的Kal蛋白具有较好的抗氧化活性,过氧化物酶活性达到(163±4)U/(mg·min),可有效降低H2O2对LX-2细胞的氧化损伤。另外,重组产生的Kal还能抑制HUVEC细胞的增殖。本研究首次成功地利用毕赤酵母表达系统分泌表达了有生物活性的Kal,为继续开展其抗肿瘤活性奠定了基础。
- 黄晓平王晓董浩赵小峰李招发王启钊许瑞安刁勇
- 关键词：KALLISTATIN毕赤酵母活性
- 综合性化学实验N-(邻羟基苯基)烯胺酮的合成与表征被引量：2
- 2020年
- 基于化学研究的热点和课题组的研究内容,设计了综合性化学实验N-(邻羟基苯基)烯胺酮的合成与表征方法,对科研成果转化到本科教学中进行了初步探索。该综合性实验涉及多个学科的知识点和实验操作,实用性和可操作性强,不仅能够丰富教学内容,更利于对学生进行理论知识和实验技能的综合训练,激发学生对科研的兴趣,培养学生的创新能力。
- 张红张红吴雅清
- 关键词：烯胺酮本科教学
- 黄酮类化合物的抗癌机制被引量：14
- 2009年
- 黄酮类化合物是许多天然药物的活性成分,由于黄酮类化合物具有显著的抗癌作用而受到越来越多的重视。本文从黄酮抗癌的分子机理,就细胞凋亡通路,细胞周期,口服生物利用度等方面的研究进行了综述。
- 王晓吴龙火黄晓平庄贞静刁勇许瑞安
- 关键词：黄酮抗癌分子机理
- 基于轨道站点的城市土地集约使用模式研究
- 随着城市化的发展,城市规模不断扩张,城市建设用地不断蚕食着生态环境用地。与此同时城市内部交通运输压力也在不断增加。城市轨道交通具有运量大、速度快、污染小、可靠性强、相对占地面积小的特点。因此大量城市,尤其是特大城市通过发...
- 王晓
- 文献传递
- 重组人VEGF165蛋白在毕赤酵母中高效表达与多克隆抗体的制备被引量：1
- 2014年
- 构建pPIC9K-VEGF165分泌型载体,线性化后电击转化至GS115(his4)中,经最小葡萄糖培养基(MD平板)筛选出阳性表达菌株并进行聚合酶链式反应(PCR)验证.菌株发酵上清液经Sephadex G-25,Heparin Sepharose FF和Sephacryl S-100层析介质分离纯化,目的蛋白纯度达到95%,相对分子质量约为24ku.结果表明:重组人VEGF165蛋白能诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖,提高HUVEC细胞的活性;重组人VEGF165蛋白免疫小鼠,制备多克隆抗体,间接酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测抗体效价达1:51 200.
- 王晓黄晓平周宇刁勇
- 关键词：多克隆抗体毕赤酵母
- 氧化应激促进重组腺相关病毒2型体外转导分析被引量：2
- 2022年
- 为揭示氧化应激在重组腺相关病毒2型(rAAV2)转导中的作用,以过氧化氢(H_(2)O_(2))和铁过载(Fe-NTA)氧化应激为模型,在293T,LO-2,Hela,A549细胞中,从转基因表达量、阳性细胞数、基因组数和病毒衣壳分布等方面研究氧化应激对rAAV2转导的影响.实验结果表明:H_(2)O_(2)和Fe-NTA能促进rAAV2转导,转基因表达量、阳性细胞数、基因组数与对照组相比的差异具有显著的统计学意义;细胞转导12 h后,氧化应激组核周围衣壳分布数目显著比对照组多,氧化应激能够促使rAAV2长时间聚集在细胞核周围;当氧化应激产生的活性氧(ROS)被N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)消除,则氧化应激促rAAV2转导作用消失,说明氧化应激通过ROS发挥促进rAAV2转导作用.
- 王晓黄晓平黎玲刘嘉刁勇
- 关键词：活性氧转导氧化应激
