吴宁华
- 作品数：5 被引量：5H指数：2
- 供职机构：中国医学科学院中国协和医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金卫生部科技专项基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 白细胞介素2受体α基因负调控元件相关结合蛋白的筛选与克隆
- 2002年
- 陆瑜李宏帆莫志成吴宁华沈珝琲
- 关键词：克隆
- 维生素D_3、9-顺式维甲酸及其相应核受体对hsp90β基因表达的调控
- 2000年
- 目的 研究维生素 D3(VD3)、9-顺式维甲酸 (9- cis- RA)及其相应核受体对 hsp90 β基因表达的调控作用。方法 采用 DEAE- Dextran方法将人 hsp90 β基因调控片段 (- 10 39bp/ +15 31bp)介导的荧光素酶 (L uc)报告基因质粒 β1.11转染 Jurkat细胞 ,并用 VD3和 9- cis- RA分别或同时刺激细胞 ,或将质粒 β1.11及野生型维生素D3受体 (VDR)或 /和维甲酸 X受体 α(RXRα)真核表达质粒共转染 Jurkat细胞 ,检测细胞裂解液中荧光素酶活性 ;用 Western印迹分析方法检测经 VDR真核表达质粒转染或用 VD3和 9- cis- RA刺激的 Jurkat细胞中内源性Hsp90β蛋白的改变 ;通过电泳迁移率变更分析 (EMSA)实验 ,检测 VDR和 RXR能否与含有 hsp90β基因第一内含子中维生素 D3应答元件 (i VDRE)的双链寡核苷酸片段发生特异结合。结果 VD3和 9- cis- RA可分别低水平诱导hsp90β基因表达 ,而两种配体同时加入有协同作用。 VDR或 RXRα分别转染只能较弱地抑制 hsp90β基因表达 ,二者共转染能增强其抑制作用。 EMSA实验证实 ,VDR和 RXR都可特异结合于 i VDRE上。结论 VD3和 9- cis- RA这两条信号途径共同参与 hsp90β基因的启动子活性调节。
- 张洪美吴宁华沈珝琲
- 关键词：维生素D39-顺式维甲酸基因表达
- 丝裂原活化蛋白激酶信号途径在热休克蛋白90基因表达中的作用被引量：3
- 2000年
- 目的 研究丝裂原活化蛋白激酶 - (MAPK)信号传导途径对 Jurkat细胞中热休克蛋白 90基因(hsp90 )表达的影响。方法 用 Western免疫印迹 -增强型化学发光系统 (ECL)检测热休克前后 Jurkat细胞胞外信号调节激酶 (ERK)、p38激酶及 c- Jun N-末端蛋白激酶 (JNK)的底物 c- Jun的磷酸化程度 ;分别用 JNK1的显性负突变质粒 DN- JNK1、p38c DNA反义表达质粒 anti- p38及 ERK激酶的特异性抑制剂 PD980 5 9瞬时转染或处理Jurkat细胞 ,再行 RT- PCR检测 hsp90 α和 hsp90 β基因的表达水平。分别以转染空载体 (p CDNA3)及未经任何处理的 Jurkat细胞作为相应对照组。结果 45℃热休克 15 min后 ,Jurkat细胞中 JNK1和 p38激酶的磷酸化程度与热休克前相比明显增强 ,ERK的磷酸化较热休克前有所增强。转染 DN- JNK1的细胞中 hsp90 α和 hsp90 β基因的组成性和热诱导表达均较转染空载体的对照组降低 ,尤其对 hsp90 α基因的热诱导表达的影响更为明显 (仅为对照组的6 8% ) ;转染 anti- p38后 ,hsp90 α基因的组成性表达和 hsp90 β基因热诱导表达分别比转染空载体的对照组增加2 6 %和 2 2 % ;经 PD980 5 9处理的 Jurkat细胞中 ,hsp90 α基因的组成性表达比未处理的细胞增加 46 % ,但 PD980 5 9处理对 hsp90 α和
- 李江伟吴宁华沈珝琲
- 关键词：信号途径热休克蛋白90
- 人热休克因子原核表达及表达产物的研究
- 1996年
- 利用ＤＮＡ重组技术构建了人ｈｓｐ反式作用因子ＨＳＦ１和ＨＳＦ２的原核表达质粒ｐＥＴ－１１Ｂ／ＨＳＦ１和ｐＥＴ－１１Ｂ／ＨＳＦ２。经ＩＰＴＧ诱导，二者在ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐＬｙｓＳ菌株中得到有效表达。利用ｈｓｐ９０β第一内含子ＨＳＥ和合成ＨＳＥ作为探针，对比分析两种表达产物与其特异性顺式作用元件间的结合能力，结果显示，原核表达的ＨＳＦ具有ＨＳＥ结合活性，ＨＳＦ１对ＨＳＥ的亲和力及结合在ＨＳＥ上的分子数明显高于ＨＳＦ２，这种差异可能是两种ＨＳＦ具有不同转录活化功能的分子基础。
- 王艳林刘巨洪莽锐程小款吴宁华
- 关键词：热休克因子基因表达
- 热休克蛋白90β基因上游片段的转录调控活性研究被引量：2
- 1995年
- 以人工合成的一对寡聚核苷酸为引物和人外周血淋巴细胞λＧＥＭ－１１基因文库为模板，通过ＰＣＲ扩增并克隆了人ＨＳＰ９０β基因上游－１１０２／＋６８ｂｐ片段。将该片段删切后克隆在报告基因──萤火虫荧光素酶基因５＇上游，转染Ｊｕｒｋａｔ细胞后测定不同刺激条件下细胞裂解液中的荧光酶活性并同时测定荧光酶ｍＲＮＡ水平。结果表明，ＨＳＰ９０β基因上游片段在正常生理状态下通过启动子介导较高水平的基础转录；热休克时该片段起负调控作用，主要的负调控区位于－５５４／－１７１ｂｐ之间，删除５＇远端上游序列后报告基因对丝裂原的反应性降低。
- 刘巨洪吴宁华沈珝琲
- 关键词：HSP90基因基因转录调控
