杨滨
- 作品数:3 被引量:2H指数:1
- 供职机构:第四军医大学更多>>
- 发文基金:国家自然科学基金更多>>
- 相关领域:医药卫生生物学更多>>
- 天然溶瘤新城疫病毒Italien株HN基因真核表达载体的构建和表达被引量:1
- 2007年
- 目的构建天然溶瘤型新城疫病毒(NDV)Italien株血凝素-神经氨酸酶(HN)基因的真核表达载体并进行产物表达。方法采用RT-PCR法从病毒RNA中克隆HNcDNA,并构建HN的真核表达载体pcDNA3.1-HN,脂质体法转染CHO-K1,G418筛选稳定表达克隆。用Westernblot、免疫荧光法检测HN蛋白的表达。结果经限制性酶切鉴定及DNA测序分析,证实真核表达载体pcDNA3.1-HN构建正确。Westernblot和免疫荧光分析表明HN基因在CHO-K1中成功表达。结论天然溶瘤型NDVItalien株的HNcDNA被成功克隆,所构建的真核表达载体pcDNA3.1-HN可以在CHO-K1细胞中稳定表达。
- 张华边惠洁尉丁李亚琳杨滨陈志南
- 关键词:新城疫病毒转染基因表达
- 基于表面重塑方法的抗体HAb18可变区人源化设计被引量:1
- 2007年
- 在分析抗体空间结构特点和残基间相互作用基础上,利用计算机辅助的分子设计和表面残基替换法进行鼠源抗体人源化设计。在抗体同源模建的基础上,利用序列分析和结构分析确定鼠源抗体可变区中外露的非人样差异残基,参考分子内、间氢键相互作用,最终选定将要突变的残基位点。使用这种方法对一株抗人肝癌细胞的单克隆抗体HAb18进行了人源化改造设计,并将候选位点分为三类,以便于在实验中依次突变,寻找降低鼠源抗体免疫原性和保持其生物功能之间适宜的平衡点。结果表明表面重塑方法可以有效地减少抗体人源化设计中CDR空间构象的变化,维持抗体生物活性,为试验提供有力的理论依据。
- 杨滨杨向民陈志南
- 关键词:HAB18
- 一株抗JEV单抗可变区的计算机建模及其与JEVE蛋白的分子对接
- 2015年
- 目的利用计算机建模获得单克隆抗体2F2可变区三维结构,再与日本脑炎病毒(JEV)E蛋白进行模拟分子对接,了解JEV E蛋白上与2F2作用的关键氨基酸位点,为阐明2F2的中和作用机制奠定基础。方法利用BLASTP软件在蛋白质数据库(PDB)中搜索2F2同源蛋白。以同源蛋白为模板,用Modeller软件对2F2可变区主链、侧链进行建模,组装出完整的2F2可变区三维结构模型并进行一系列分子动力学优化,得到能量最低的单抗可变区三维结构。最后利用Discovery Studio软件模拟2F2可变区与JEV E蛋白的分子对接。结果获得2F2可变区三维结构模型。模拟分子对接结果显示JEV E蛋白上与2F2可变区相互接触、作用的氨基酸位点有9个,即Ⅰ区的13位谷氨酸、16位丝氨酸、37位天冬氨酸和300位苏氨酸,Ⅲ区的336位赖氨酸、347位天冬氨酸、354位亮氨酸、387位精氨酸和388位甘氨酸残基。其中Ⅰ区13位谷氨酸、16位丝氨酸和37位天冬氨酸可能是中和表位必需的氨基酸。Ⅲ区的387位精氨酸和388位甘氨酸位于优势中和抗原表位区域,336位赖氨酸与已报道的337位中和表位非常接近。结论通过计算机建模确定JEV E蛋白上有9个与单克隆抗体2F2作用的主要氨基酸位点,为利用E蛋白突变体阐明2F2单抗的中和机制提供了依据。
- 寇甜甜杨滨王媛丁天兵
- 关键词:日本脑炎病毒E蛋白可变区计算机建模分子对接