张弘
- 作品数：3 被引量：16H指数：2
- 供职机构：浙江中医药大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家质检总局科技计划项目浙江省重大科技专项基金浙江出入境检验检疫局科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 单管多重荧光定量RT-PCR方法鉴别新甲型H1N1及甲型和乙型流行性感冒病毒被引量：6
- 2012年
- 目的建立和评价鉴别新甲型H1N1、甲型和乙型流行性感冒（简称流感）病毒的单管多重荧光定量RT-PCR方法。方法2010年10月至2011年4月，采集流感样患者咽拭子样本213份。分别选用新甲型H1N1流感病毒HA基因、甲型流感病毒M基因和乙型流感病毒NP基因中的152、128和107bp片段作为荧光定量PCR检测的靶片段，设计特异性引物和不同发光基团标记的TaqMan探针，采用体外转录构建标准品，绘制标准曲线，评价检测方法的重复性、特异度和灵敏度，并对213份流感样患者咽拭子样本进行检测及测序验证。结果3种病毒对应的标准曲线分别为：新甲型H1N1流感病毒：Y=-3．461gX＋46．985；甲型流感病毒：Y=-3．491gX＋37．709；乙型流感病毒：Y=-3．51lgX＋38．889，Y为Ct值，lgX为病毒RNA拷贝数的对数值。质粒标准曲线的方差系数为0．998，灵敏度达到每个反应10^2拷贝／μl，特异度强。213份样本中检出新甲型H1N1流感病毒核酸39份（18．3％），甲型流感病毒核酸阳性63份（29．6％），乙型流感病毒核酸阳性23份（10．8％），阳性样品经过测序验证。结论为鉴别新甲型H1N1、甲型和乙型流感病毒建立的单管多重荧光定量RT-PCR方法快速、特异且灵敏。
- 张弘何永强张严峻王真李榛
- 关键词：流感病毒A型流感病毒B型
- 进境狐狸中病原菌的分离鉴定及其致病性研究被引量：1
- 2010年
- 〔目的〕为了查明进境狐狸的死亡原因,严防外来人畜共患病原微生物传入,确保人类和动物安全,为同群进境狐狸和公共卫生安全评价、有效监管和风险预警提供依据。〔方法〕对进境的死亡狐狸进行解剖和组织病理学检查,通过血琼脂培养、革兰氏染色镜检、链激酶试验、杆菌肽敏感试验、CAMP试验和触酶试验,开展细菌分离、生化鉴定和致病性研究。〔结果〕从死亡狐狸中检出停乳链球菌和马链球菌,并证明分离的停乳链球菌对小鼠有致病性,M.L.D为3.32×107活菌数,LD50为9.55×107活菌数。〔结论〕停乳链球菌对动物及免疫力低下的人群具有一定的致病性,该菌对公共卫生安全的影响应引起重视,同时提示在进出境动物贸易中应加强疫病检疫,关注运输途中温湿度、通风性和栖息环境条件以及条件性致病菌的危害。
- 何永强张弘王华雄黎昊雁李可张晓峰程洁方莹
- 关键词：狐狸停乳链球菌
- 家蚕微孢子虫荧光定量PCR检测方法及诊断试剂盒被引量：9
- 2011年
- 基于为蚕种生产与流通贸易提供快速、灵敏、准确检测家蚕微孢子虫的方法,以家蚕微孢子虫小亚单位核糖体RNA基因66 bp片段作为靶标,设计特异性引物和TaqMan探针,用构建的重组质粒制备标准品进行荧光定量PCR扩增,通过优化PCR反应体系,测定线性范围,评价方法的特异性、灵敏度和重复性,成功构建了家蚕微孢子虫的荧光定量PCR检测方法,并研制出诊断试剂盒。该方法的检测线性范围为1×108～1×102拷贝/mL的7个线性梯度,检测家蚕微孢子虫的敏感度达1×102拷贝/mL,特异性高,3次重复性检测应用试验的批内变异系数为3.6%～7.2%,批间变异系数为5.2%～7.8%。结果表明,建立的家蚕微孢子虫荧光定量PCR检测方法具有准确、灵敏、快速、特异性强的特点。
- 何永强吴姗鲁兴萌张弘邱海洪帅江冰王素华张晓峰徐国群李光才董强
- 关键词：家蚕微孢子虫荧光定量PCR诊断试剂盒
