公共文化服务平台

共 6 条记录，以下是 1-6

全选清除导出

排序方式：

SH3BP4基因对肝癌细胞迁移和增殖作用的实验研究被引量：1: 2018年; 目的:构建SH3结构域结合蛋白4(SH3-domain binding protein 4,SH3BP4)重组腺病毒载体及shSH3BP4慢病毒载体,初步探索SH3BP4对肝癌细胞迁移增殖能力的影响。方法:PCR扩增SH3BP4 cDNA序列并构建腺病毒重组质粒pAdEasySH3BP4,HEK293细胞包装重组腺病毒AdSH3BP4;构建SH3BP4基因短发夹型RNA干扰慢病毒载体,转染至HEK293T细胞,包装重组慢病毒shSH3BP4。采用Western blot检测SH3BP4在人正常肝脏细胞及肝癌细胞的内源性表达,将SH3BP4过表达实验部分设为3个组:Mock组、AdGFP组和AdSH3BP4组,Mock组为空白对照组,AdGFP组为感染腺病毒AdGFP的对照组,AdSH3BP4组为感染腺病毒AdSH3BP4的实验组;将SH3BP4敲低实验部分设为2个组:sh Control组和shSH3BP4组,sh Control组为感染慢病毒sh PLL3.7的对照组,shSH3BP4组为感染慢病毒shSH3BP4的实验组。通过Transwell和划痕实验检测SH3BP4过表达和敲低对肝癌细胞迁移能力的影响;MTS和直接克隆形成实验检测SH3BP4过表达和敲低对肝癌细胞的增殖能力的影响。结果:经限制性内切酶酶切及DNA测序验证,成功构建AdSH3BP4重组腺病毒载体和shSH3BP4慢病毒载体。Transwell结果表明,AdSH3BP4组(74.800±0.544)相较于空白对照组(219.467±2.640)与AdGFP组(210.533±8.498),迁移的细胞数明显减少(P=0.000);而shSH3BP4组(191.467±3.906))比sh Control组(91.733±2.763)细胞的迁移数目明显增加(P=0.000)。划痕实验结果表明,AdSH3BP4组的细胞修复率[(10.400±0.036)%]明显低于空白对照组[(37.500±0.063)%]与AdGFP组[(50.000±0.063)%](P=0.000);而shSH3BP4组[(55.00±0.05)%]明显高于sh Control组[(23.3±0.029)%](P=0.000)。MTS结果表明:AdSH3BP4组在96 h的吸光度值(0.921±0.053)与空白对照组(1.091±0.043)及AdGFP组(1.062±0.024)相比明显降低(P=0.005)。shSH3BP4组在96 h的吸光度值(1.497±0.020)与sh Control对照组(1.142±0.103)相比明显升高(P=0.004)。直接克隆形成实验结果表明,AdSH3BP4组的细胞克隆形成数(34.333±2.082); 郑亚秋潘琦梁利张桂冀向进夏杰汪凯丁克越唐霓; 关键词：肝细胞肝癌细胞迁移细胞增殖

PCK1影响肝癌细胞迁移能力的研究被引量：2: 2018年; 目的:构建编码磷酸烯醇丙酮酸羧化激酶(phosphoenolpyruvate carboxykinase,PEPCK)的基因PCK1重组腺病毒和基因敲除2种细胞模型,并初步观察PCK1过表达和敲除后对肝癌细胞迁移能力的影响。方法:PCK1 c DNA克隆到p AdTrackTO4载体,构建重组腺病毒质粒,在HEK293细胞中包装、扩增成高滴度重组腺病毒AdPCK1;利用CRISPR/Cas9系统在PLC/PRF/5肝癌细胞系中筛选出PCK1基因敲除的稳定细胞株。首先,在过表达模型将Huh7细胞设为2组:AdGFP组和AdPCK1组,AdGFP组为感染腺病毒AdGFP的对照组,AdPCK1组为感染腺病毒AdPCK1的实验组。在敲除模型设Parental组和KO组,Parental组是PLC/PRF/5细胞作为对照组,KO组是PCK1基因敲除稳定细胞株作为实验组。Western blot技术检测2种模型蛋白表达量,采用划痕实验观察细胞迁移能力,进一步经q RT-PCR检测影响肝癌细胞的迁移关键分子。结果:重组腺病毒AdPCK1构建成功,经Western blot鉴定PCK1在Huh7细胞中的表达。向导RNA(single guide RNA,sg RNA)寡核苷酸双链成功插入酶切后的Lenti CRISPR-V2质粒载体中且测序正确;经Western blot鉴定PCK1敲除的细胞株筛选成功。划痕结果显示,PCK1过表达模型在48 h的细胞迁移率为(66.300±0.383)%,与AdGFP组[(42.900±3.833)%]相比明显增加(t=10.540,P=0.000);PCK1敲除KO组在48 h的细胞迁移率为(59.40±5.68)%,与亲本细胞组[(79.00±5.20)%]相比明显减少(t=4.420,P=0.012)。q RT-PCR结果显示,PCK1过表达后,相较于对照组AdGFP,Cdh1相对表达量为2.733±0.501(t=5.989,P=0.004),相对表达增高;PCK1敲除后,相较于亲本细胞组,Cdh1相对表达量为0.664±0.017(t=34.290,P=0.000),相对表达减少。结论:PCK1过表达后可明显抑制肝癌细胞的迁移能力,而敲除后促进其迁移,证实PCK1可能作为抑癌基因参与肝癌的发生和发展。; 向进庹琳高庆祝杨翼梁利夏杰唐霓汪凯; 关键词：重组腺病毒肝癌迁移

基于CRISPR/Cas9系统构建ARID2基因敲除模型并探索其对肝癌细胞增殖和迁移能力的影响被引量：2: 2017年; 目的:通过成簇的规律间隔的短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/Cas9,CRISPR/Cas9)系统在SK-Hep1肝癌细胞系中构建AT富集作用域2(AT-rich interaction domain 2,ARID2)基因敲除模型,并初步观察ARID2敲除对肝癌细胞增殖和迁移能力的影响。方法:设计并合成靶向ARID2的向导RNA(single guide RNA,sg RNA)寡核苷酸序列,长度为20 bp,构建到CRISPR表达载体上,转染HEK293T细胞包装慢病毒并筛选稳定细胞株,采用克隆形成、Transwell和划痕实验分别检测细胞增殖和迁移能力。结果:目的 sg RNA寡核苷酸双链成功插入酶切后的Lenti CRISPER-V2质粒载体中且测序正确;经Western blot鉴定ARID2敲除的细胞株筛选成功;ARID2基因敲除后,与亲本细胞系相比,其蛋白表达缺失;克隆形成实验结果示ARID2敲除细胞株(1#6)培养至10 d时克隆形成数为(125.600±5.131)个,亲本细胞株克隆形成数为(69.000±5.567)个(t=12.962,P=0.000);ARID2敲除细胞株(2#1)培养至8 d时克隆形成数为(94.000±8.737)个,亲本细胞株克隆形成数为(67.000±5.292)个(t=4.635,P=0.010),差异有统计学意义。Transwell结果示ARID2敲除细胞株(1#6)在24 h的迁移细胞数为(180.000±5.542)个,亲本细胞组的迁移细胞数为(90.400±5.031)个(t=20.731,P=0.000);ARID2敲除细胞株(2#1)在24 h的迁移细胞数为(138.600±5.749)个,亲本细胞组的迁移细胞数为(78.400±5.703)个(t=12.891,P=0.000),差异有统计学意义。划痕实验结果示ARID2敲除细胞株(1#6)16 h划痕愈合度为(88.000±0.011)%,亲本细胞组划痕愈合度为(52.500±0.047)%(t=12.490,P=0.000);ARID2敲除细胞株(2#1)16 h划痕愈合度为(71.900±0.020)%,亲本细胞组划痕愈合度为(55.200±0.024)%(t=9.190,P=0.001),差异有统计学意义。结论:ARID2敲除可明显促进肝癌细胞的增殖和迁移能力,证实ARID2作为抑癌基因参与肝癌的发生和进程。ARID2敲除细胞模型为肝癌的深入研究提供新的手段。; 高庆祝汪凯梁利张韵致郑亚秋唐霓; 关键词：增殖迁移

顺铂通过ROS促进乙型肝炎病毒复制的实验研究: 2020年; 目的:探索顺铂(cisplatin)促进乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)复制的分子机制。方法:采用不同浓度的顺铂处理稳定表达HBV的Hep AD38细胞,台盼蓝染色检测细胞活力,筛选出顺铂最适浓度,分别采用Real-time PCR和Southern blot检测HBV DNA水平,Western blot检测HBsAg和HBcAg蛋白表达。在顺铂诱导组加或者不加氧化应激抑制剂N-乙酰-L-半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC),采用CellROX Orange Reagent染料在激光共聚焦显微镜下检测细胞内ROS水平,并且检测HBV DNA水平、HBsAg及HBcAg的蛋白水平。结果:台盼蓝染色筛选出顺铂的最适浓度为6μmol/L。Real-time PCR实验结果显示,PBS组,0.5、2.0、6.0μmol/L顺铂处理后HBV DNA拷贝数/细胞分别为515.152±18.924、1 215.758±49.001(P=0.000)、1 678.182±117.223(P=0.000)、2 110.606±143.640(P=0.000);Southern blot结果与Real-time PCR结果一致,顺铂以剂量依赖方式增加HBV DNA水平。Western blot结果表明,与PBS组相比,6.0μmol/L顺铂组HBsAg、HBcAg蛋白相对表达量分别为3.102±0.099(P=0.000)、4.001±0.200(P=0.000);顺铂可以促进HBV复制和病毒蛋白的表达。进一步采用NAC与顺铂联合处理HepAD38细胞,Real-time PCR实验结果表明,顺铂组、顺铂+NAC组HBV DNA拷贝数/细胞分别为2 180.444±82.573(P=0.000)、1 041.778±50.918(P=0.000),2组差异具有统计学意义。Western blot实验结果表明,顺铂组HBsAg、HBcAg蛋白相对表达量分别为3.139±0.061(P=0.000)、3.812±0.109(P=0.000),顺铂+NAC组HBsAg、HBcAg蛋白相对表达量分别为2.101±0.088(P=0.000)、1.613±0.073(P=0.000),2组之间HBsAg、HBcAg蛋白差异均具有统计学意义。结论:顺铂通过增强细胞内ROS水平,促进HBV复制,而NAC可以部分抑制顺铂刺激的HBV复制作用。; 陈雪梅胡杰潘娥梁利汪凯黄爱龙唐霓; 关键词：顺铂乙型肝炎病毒病毒复制活性氧 N-乙酰-L-半胱氨酸

基于CRISPR-Cas9系统构建GSTZ1基因敲除模型并探索其对肝癌细胞增殖和迁移能力的影响被引量：1: 2020年; 目的:通过CRISPR/Cas9系统在HepG2肝癌细胞系中构建人谷胱甘肽S-转移酶ζ1(glutathione S-transferase zeta,GSTZ1基因敲除模型并探索GSTZ1敲除对肝癌细胞增殖和迁移能力的影响。方法:设计并合成长度20 bp的靶向GSTZ1的sgRNA寡核苷酸序列,退火后克隆到LentiCRISPR-V2载体上,与慢病毒包装质粒共转染HEK293T细胞,包装慢病毒并感染HepG2细胞,用合适浓度的嘌呤霉素筛选阳性细胞株,有限稀释法获得单克隆细胞。所有实验均分成3组:parental组、KO1组和KO2组,采用MTS实验、克隆形成实验和划痕实验分别检测细胞增殖和迁移能力。结果:Western blot和DNA测序鉴定GSTZ1敲除的单克隆细胞构建成功;MTS检测不同时间点下各组HepG2细胞的增殖能力变化情况。结果显示,48 h时,KO1组[(24.758±1.508)%]相比亲本组[(20.185±0.720)%],增殖能力明显增强,差异有统计学意义(P=0.002)。72 h时,相比亲本组[(23.903±0.840)%],KO1组[(28.634±1.848)%]增殖能力明显增强(P=0.014)。96 h和120 h时,KO1组相比亲本对照组,其增殖能力也明显增强(P<0.05)。在KO2细胞中观察到同样现象,说明敲除GSTZ1后能够促进Hep G2细胞的增殖能力。克隆形成实验表明,GSTZ1敲除细胞株(KO1和KO2)克隆形成数(73.330±1.528、82.330±4.163)相比亲本细胞克隆形成数(42.330±2.517)增多,差异有统计学意义(P=0.000,P=0.000),提示GSTZ1基因敲除可以明显促进肝癌细胞的增殖能力。划痕实验结果显示,GSTZ1敲除细胞株KO1和KO2在48 h的迁移相对比分别为0.327±0.041、0.371±0.013,与亲本细胞(0.184±0.045)相比明显增加(P=0.003,P=0.001),提示GSTZ1基因敲除可明显促进肝癌细胞的迁移能力。结论:GSTZ1缺失明显促进肝癌细胞的增殖和迁移能力,提示GSTZ1可能作为抑癌基因调控肝癌的发生和进程。; 雷冲王秋杰李晶晶杨帆梁利汪凯唐霓; 关键词：HEPG2细胞肝癌细胞迁移细胞增殖

顺铂通过CREB1诱导乙肝病毒再激活的实验研究被引量：2: 2018年; 目的:探索顺铂诱导乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)再激活的机制。方法:将稳定表达HBV的肝癌细胞系HepAD38分为2组,即磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline,PBS)对照组及顺铂(Cisplatin)处理组,分别检测cAMP应答元件结合蛋白质-1(cAMP responsive element binding protein 1,CREB1)、乙肝病毒蛋白表达(HBsAg、HBcAg)及病毒复制水平(HBV DNA、HBV mRNA);同样在成功构建稳定敲低CREB1(shCREB1)的HepAD38细胞中,同正常表达HBV的肝癌细胞系HepAD38进行对照,检测经顺铂处理后的HBV复制水平(HBV DNA、HBV m RNA)及蛋白表达水平(HBsAg、HBcAg)。结果:稳定表达HBV的肝癌细胞系HepAD38中,Western blot检测显示,与PBS对照组相比,Cisplatin处理组中CREB1相对表达量为1.355±0.049(P=0.010);HBsAg蛋白相对表达量为1.679±0.060(P=0.003);HBcAg蛋白相对表达量为1.488±0.047(P=0.005)。qRTPCR结果显示经顺铂处理后,HBV DNA绝对表达量为249.600±54.400(P=0.006);HBV m RNA相对表达量为3.084±0.256(P=0.000);以上结果表明在HepAD38细胞中乙肝病毒蛋白表达水平以及病毒复制水平较PBS对照组明显上调,均具有统计学差异;与此同时,选择转入shCREB1质粒的HepAD38细胞,即shCREB1细胞,以及转入对照质粒且能正常表达CREB1的HepAD38细胞,即shControl细胞,2种细胞组内均设置PBS对照组和Cisplatin处理组,分别检测乙肝病毒蛋白表达以及病毒复制水平。qRT-PCR结果显示,HBV DNA在shControl细胞的Cisplatin处理组相对表达量为518.300±3.458;而在shCREB1细胞的Cisplatin处理组相对表达量为265.300±3.125 (P=0.000);HBV m RNA在shControl细胞的Cisplatin处理组相对表达量为2.713±0.318;而在shCREB1细胞的Cisplatin处理组相对表达量为1.263±0.056(P=0.000)。Western blot分析显示shControl细胞的Cisplatin处理组中的HBsAg、HBcAg相对表达量分别为1.254±0.001、2.238±0.041;而在shCREB1细胞的Cisplatin处理组中的HBsAg、HBcAg相对表达量分别为1.121±0.036(P=0.021)、; 潘娥陈雪梅高庆祝魏杰胡杰梁利汪凯黄爱龙唐霓; 关键词：乙肝病毒顺铂

全选清除导出

共1页<1>

梁利

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户反馈

梁利

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户登录

用户反馈