刘琴芳
- 作品数：5 被引量：6H指数：2
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金国际科技合作与交流专项项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白与BCCIP蛋白相互作用的鉴定被引量：2
- 2013年
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)核衣壳(N)蛋白在病毒粒子组装和释放过程中发挥重要的作用。为筛选N蛋白与宿主细胞相互作用的蛋白,本研究分离健康猪肺泡巨噬细胞(PAM),构建了PAM的酵母cDNA文库,利用酵母双杂交方法筛选其中与PRRSV N蛋白相互作用的蛋白,结果获得3个阳性克隆。经测序并利用Blast方法比对GenBank数据库,筛选得到克隆插入的cDNA均与BCCIP(BRCA2 and CDKN1A interactingprotein)基因的1 bp～396 bp核酸序列一致。经酵母回返验证试验、GST-pulldown和免疫共沉淀试验验证了N蛋白与BCCIP之间的特异性相互作用,共定位试验显示N蛋白与BCCIP共定位于细胞核和细胞浆中。本研究鉴定了新的与PRRSV N蛋白相互作用的宿主蛋白BCCIP,BCCIP是否通过与N蛋白的相互作用参与PRRSV复制还有待深入研究。
- 尹曼曼郭东伟刘琴芳张枫张利杰李江南翁长江
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白相互作用
- 猪caspase-1 p20多克隆抗体制备及其在猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒感染中的初步应用被引量：4
- 2014年
- 为研究猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)在感染细胞中对半胱氨酸蛋白水解酶Ⅰ(caspase-1)的激活作用,本研究以PRRSV HuN4株感染猪肺泡巨噬细胞(PAM)的cDNA为模板,构建caspase-1 p20蛋白的重组表达质粒,以表达的重组蛋白p20为抗原制备了兔抗猪p20的多克隆抗体。利用制备的多抗对PRRSV HuN4株(0.1 MOI)感染的PAM进行western blot检测,结果表明在PRRSV感染PAM 24 h后胞内caspase-1被大量诱导表达,同时caspase-1被水解激活并释放出p20。该研究结果为进一步阐明PRRSV感染细胞后引起IL-1β升高的分子机制研究奠定了基础。
- 刘园园李江南刘琴芳张枫张利杰黄丽穆杨翁长江
- 关键词：猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒肺泡巨噬细胞
- PRRSV非结构蛋白Nsp4与sIGLL5相互作用抑制Ⅰ型干扰素产生及分子机制
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)为单股正链RNA病毒,基因组至少编码8种结构蛋白和13种非结构蛋白(non-st...
- 尹曼曼刘琴芳李江南黄丽翁长江
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP4IFN-Β
- 2株猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离及其基因测序
- 2012年
- 2006年，我国爆发了高致病性猪繁殖与呼吸综合征（HP—PRRSV），给养猪业造成了严重的经济损失，该HP-PRRSV在Nsp2区有30个氨基酸的不连续缺失。分子流行病学调查证实，目前我国流行的PRRSV毒株主要是HP—PRRSV毒株。2011年，从山东某猪场成功分离到2株PRRSV，分别命名为PRRSV-SDA2和PRRSV—SDA3；基因测序结果显示PRRSV-SDA2全长为15349bp，PRRSV-SDA3全长为15350bp。通过与涵盖欧洲型和北美型的24个毒株全基因比对，发现这2个毒株均属于北美型HP—PRRSV，与HuN4毒株的同源性最高，均高达99．5％，其NSP2蛋白的482和533～561位缺失了30个氨基酸。成功分离的SDA2和SDA32个HP—PRRSV及完成的基因测序，为构建HP—PRRSV毒株的感染性克隆奠定了基础。
- 张枫李江南尹曼曼郭东伟刘琴芳王朝翁长江熊涛
- 关键词：基因测序NSP2
- Akt1通过磷酸化泛素结合酶E2S增强胶质瘤放化疗抵抗的实验研究被引量：1
- 2018年
- 目的 探讨Akt1增强胶质瘤放、化疗抵抗的机制.方法 通过免疫荧光实验检测正常星形细胞和4种恶性胶质瘤细胞（U87、U251、SF767以及U373）中泛素结合酶E2S（UBE2S）的表达情况;通过Western blot实验检测PTEN基因突变型和野生型胶质瘤细胞中UBE2S的表达差异;构建激活型Akt1载体,分别与UBE2S野生型或T152位点突变型载体共表达,观察PTEN/Akt信号通路对UBE2S的作用,以及UBE2S过表达后对非同源末端连接复合物的影响;采用流式细胞仪检测稳定敲低UBE2S的U87胶质瘤细胞对放、化疗的敏感性.结果 与正常星形细胞相比,胶质瘤细胞高表达UBE2S蛋白;PTEN突变型的胶质瘤细胞UBE2S的表达较野生型更稳定.构建激活型Akt1磷酸化UBE2S的T152位点,可促进UBE2S的稳定表达.UBE2S与Ku70、Ku80相互作用能促进Ku70的表达（P =0.009）.免疫印迹结果显示,敲低UBE2S的表达后,Ku70、Ku80和DNA-PKcs的表达量显著降低（P〈0.001）.流式细胞检测结果显示,UBE2S敲低可增强胶质瘤对放、化疗的敏感性（P〈0.001）.结论 UBE2S在恶性胶质瘤中高表达;Akt1可磷酸化UBE2S的T152位点,从而增强UBE2S的稳定性;敲低UBE2S能降低非同源末端连接复合物介导的DNA修复效率,从而增强胶质瘤细胞对放、化疗的敏感性.
- 胡力沈红刘利谢春成王海洋刘琴芳翁长江林志国
- 关键词：神经胶质瘤化放疗
