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王欣: 作品数：10 被引量：21H指数：3; 供职机构：中国农业科学院上海兽医研究所更多>>; 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>; 相关领域：农业科学更多>>

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流行性乙型脑炎病毒GI型毒株SD12在C57BL/6小鼠体内的动态分布研究被引量：3: 2022年; 为了解流行性乙型脑炎病毒基因I型毒株SD12在感染C57BL/6小鼠体内的病毒分布,应用qRT-PCR方法检测该毒株在小鼠体内各组织的动态分布情况。结果显示腹腔感染组中2 dpi仅能在心脏和脾脏检测出病毒核酸,5~7 dpi能够在心脏、肝脏、脑部、盲肠和扁桃体检测到病毒核酸。血脑屏障受损的腹腔感染组中最早2 dpi在肠系膜淋巴结中检测到病毒核酸,3 dpi基本能在各组织中检测到病毒核酸,5~7 dpi在大脑中检测到大量病毒核酸。所有对照组没有检测到病毒阳性核酸。本研究表明基因I型流行性乙型脑炎病毒感染血脑屏障受损的C57BL/6小鼠后能迅速入侵各组织脏器,主要浸染肝脏、肺脏、肾脏、盲肠和大脑。拥有完整血脑屏障的小鼠对病毒具有一定抵抗能力,病毒在各组织中的含量相对比较低。; 王欣王欣张俊杰庞琳琳李蓓蓓李蓓蓓刘珂邵东华邱亚峰马志永钟登科李鹏; 关键词：流行性乙型脑炎病毒血脑屏障 QRT-PCR

副猪嗜血杆菌SYBR Green法荧光定量PCR检测方法的建立及应用: 副猪嗜血杆菌(Heamophilus parasuis HPS)是一种能够引起猪多发性浆膜炎、脑膜炎、关节炎等综合症状的条件性致病菌;现今有15种血清型,其中1、5、10、12、14强毒株;发病率一般10%-15%,严重...; 王欣魏建超李蓓蓓刘珂邵东华邱亚峰马志永; 文献传递

副猪嗜血杆菌血清13型分离鉴定及其培养特性研究被引量：3: 2019年; 上海市某猪场中分离出1株13型副猪嗜血杆菌,动物试验鉴定其为强毒株。为探索血清13型副猪嗜血杆菌的培养特性,以期提高其分离率并优化后续发酵条件,本研究对13型副猪嗜血杆菌生长所需要的血清和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)的浓度进行了筛选,测定了在最适培养条件下的生长曲线。结果表明,副猪嗜血杆菌在TSB培养基中的最适培养条件为5%新生牛血清,10μg/mL NAD;在最适培养条件下生长曲线显示,OD600值为0.2~0.6时为13型副猪嗜血杆菌的对数生长期,在培养14 h时活菌数达到最大值,而OD600值在22 h时达到最大,且在增值过程中产生大量的酸。; 庞琳琳赵秋华王欣张俊杰郭爽李蓓蓓刘珂邵东华邱亚峰马志永王建魏建超; 关键词：副猪嗜血杆菌 NAD

滑液支原体灭活疫苗体外诱导T淋巴细胞增殖及免疫保护研究被引量：6: 2015年; 滑液支原体感染是由滑液支原体(Mycoplasma synoviae,MS)引起的鸡和火鸡的一种急性或慢性传染病。为控制滑液支原体感染,本研究利用MS WVU1853株辅以Montanide ISA 206 VG佐剂制备了灭活疫苗,研究发现MS灭活疫苗在体外能够激活鸡骨髓来源的树突状细胞(dendritic cell,DCs),DCs能够摄取MS灭活疫苗抗原提呈给T淋巴细胞并刺激T细胞增殖,利用流式细胞术方法检测增殖的T淋巴细胞亚群,CD4+T细胞增殖比率高于CD8+T细胞。SPF鸡免疫高剂量(1010cfu·m L-1)MS灭活疫苗后IFN-γ表达量显著高于对照组(P<0.05),CD4+T细胞主要向Th1类细胞分化并分泌IFN-γ促进CTL细胞发挥杀伤作用,证明灭活MS疫苗能够有效激发免疫鸡群的细胞免疫反应。利用MS灭活疫苗免疫7日龄SPF鸡,单次免疫可以对MS攻毒产生完全保护,另外对疫苗安全性进行检验显示疫苗安全性良好,对鸡安全有效。; 陆凤谭磊王欣包世俊任峰张凡庆刘芳仇旭升宋翠萍孙英杰伏小平丁铲; 关键词：滑液支原体灭活疫苗细胞免疫免疫保护

副猪嗜血杆菌在感染猪体内的分布及其在血液、鼻拭子中载量的变化被引量：1: 2021年; 为了解副猪嗜血杆菌感染猪后的组织分布和排毒情况,应用建立的SYBR Green Ⅱ荧光定量PCR检测方法,分析了副猪嗜血杆菌在猪各组织的分布及其在血液、鼻拭子中载量的变化情况。结果显示:高剂量感染组出现明显的临床症状,且平均体温高于其他各组1~2℃;对试验组各组猪内脏组织进行检测发现,副猪嗜血杆菌主要集中在气管、扁桃体、颌下淋巴结、肺等组织中,不同组织器官中的细菌载量也存在着一定的差异;血液中并未检测到副猪嗜血杆菌,但在感染的8~20 d高剂量组鼻拭子中副猪嗜血杆菌的载量显著高于其他组。本文研究了副猪嗜血杆菌感染仔猪后的临床症状和体外排毒情况,为以后副猪嗜血杆菌的防治及致病机理研究奠定一定理论基础。; 庞琳琳赵秋华王欣张俊杰郭爽李蓓蓓刘珂邵东华邱亚峰马志永袁万哲魏建超; 关键词：副猪嗜血杆菌

鸡传染性支气管炎病毒多表位核酸疫苗的构建及其免疫研究被引量：4: 2015年; 应用筛选出的鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)结构蛋白S1基因的T细胞抗原表位盒、Australia T株和M41株S1基因的B细胞抗原表位,定向克隆入真核表达载体p VAX1,构建成5个真核表达质粒:p VAX-S1T+M、p VAXS1B-M41、p VAX-S1B-T、p VAX-S1T+S1B-M41、p VAX-S1T+S1B-T。将每组提取制备的质粒溶液通过腿部肌肉多点注射免疫7日龄SPF雏鸡,28日龄时加强免疫1次,同时设立PBS组作为对照免疫组。分别在首免前及免疫后7、14、21 d以及二免后10 d翅静脉采血并分离血清,用间接ELISA方法检测抗体效价。二免后10 d用IBV病毒液攻毒测定保护率。ELISA抗体效价结果显示:二免后10 d各免疫组抗体水平达到最高,p VAX-S1B-T、p VAX-S1T+S1B-M41和p VAX-S1T+S1B-T组与PBS组相比差异均具有显著统计学意义(P<0.05),p VAX-S1、p VAX-S1T+M和p VAX-S1B-T组与PBS组相比差异具有极显著统计学意义(P<0.01)。攻毒结果表明,p VAX-S1、p VAX-S1B-T组的保护效率均为75%,高于PBS组(12.5%),表明表位抗原成分能够有效发挥保护效力,与S1全基因疫苗组保护率相当。本研究结果为研制安全有效的新型IBV疫苗提供了新的途径。; 刘芳谭磊陆凤范瑾刘开春王欣廖瑛仇旭升孙英杰宋翠萍王桂军丁铲; 关键词：传染性支气管炎病毒抗原表位核酸疫苗免疫研究

副猪嗜血杆菌荧光定量PCR的建立和临床应用被引量：2: 2021年; 为了检测血液、鼻拭子、组织等样本中副猪嗜血杆菌的含量,本研究根据GenBank副猪嗜血杆菌不同血清型的保守区设计引物,建立了SYBR GreenⅡ荧光定量PCR方法,并对其敏感性、特异性、重复性进行了分析。结果显示:所建立的SYBR GreenⅡ荧光定量PCR的组间差异性小于4%,组内差异性小于2.5%;溶解曲线峰值单一,特异性良好;其敏感性是普通PCR的100倍,且明显优于细菌分离方法。该方法可用于副猪嗜血杆菌感染早期的诊断和流行性调查。; 庞琳琳赵秋华王欣张俊杰郭爽李蓓蓓刘珂邵东华邱亚峰马志永袁万哲魏建超; 关键词：副猪嗜血杆菌荧光定量PCR

DC-SIGN真核表达载体的构建及其稳定转染HeLa细胞系的建立被引量：2: 2015年; 为研究新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)与树突状细胞特异性粘附分子-3-结合非整合素分子(dendritic cell specific intercellular adhesion molecule-3-grabbing non-integrin,DC-SIGN)的相互作用对NDV感染树突状细胞(dendritic cell,DC)的影响,本研究拟构建能够稳定表达DC-SIGN蛋白的细胞系,为研究DC-SIGN蛋白与病毒蛋白互作提供基础。以小鼠DCs提取的c DNA为模板,通过PCR方法获得DC-SIGN基因,连入真核表达载体,并命名为pcDNA-DCSIGN,利用LipofectamineTM 2000转染HeLa细胞,G418进行药物压力筛选,经RT-PCR和Western blot鉴定,获得了一株可以高效表达DC-SIGN蛋白的HeLa细胞,且经过多次传代后仍然可以稳定表达DC-SIGN,说明该细胞系构建成功。; 王欣谭磊陆凤徐乐乐仇旭升宋翠萍孙英杰廖瑛茅翔詹媛王琰周恩民丁铲; 关键词：新城疫病毒树突状细胞

一株流产猪胎来源的GI JEV的分离、鉴定与分子特征: 2022年; 2015年从上海市奉贤区某猪场采集疑似感染乙脑的猪病样品,通过RT-PCR方法对病料进行检测,检测阳性样本采用BHK-21细胞进行病毒分离,利用间接免疫荧光(IFA)技术对分离株进行鉴定。结果显示,从流产胎儿的脑组织中成功分离到一株JEV,命名为SD12。SD12株感染BHK-21细胞,48 h均发生病变,病毒滴度为1.25×10^(6) PFU。分别采用脑内(IC)和腹腔内(IP)感染小鼠测得脑内感染半数致死量(LD_(50))为2.5 PFU,经腹腔感染的LD_(50)为10^(2.7) PFU,表明该分离毒株SD12具有强的神经毒力和神经侵袭力。对SD12株的全基因进行克隆测序和进化分析,结果显示,该分离株基因全长10965 bp,属于基因I型JEV,与基因Ⅲ型经典弱毒疫苗株SA14-14-2株基因核苷酸同源性为88.6%,氨基酸同源性为97.4%,其中E基因同源性87.5%,氨基酸同源性为97.2%。本研究为猪乙型脑炎的防控与疫苗研发奠定了基础。; 郭爽王欣王欣张俊杰李宗杰李蓓蓓李蓓蓓刘珂邵东华邱亚峰马志永; 关键词：进化分析

江苏某地鸭群中乙型脑炎病毒及其抗体检测: 2022年; 乙型脑炎病毒(JEV)属于黄病毒科黄病毒属,是一种重要的人畜共患病原体。JEV于1924年在日本首次被发现,至今已成为东南亚国家人类健康的主要威胁之一。JEV主要通过蚊媒传播,禽类是JEV的主要扩增宿主之一。本研究为了调查JEV在鸭群的流行情况,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)对江苏省某地部分鸭群进行JEV的血清抗体检测,同时对疑似病例进行了JEV的PCR检测。结果显示,在被检测的20份产蛋种鸭血清样本中JEV抗体阳性率为75%(15/20);PCR检测结果显示,在所检测的19份病死雏鸭样本中,有1份为JEV阳性,2份为JEV弱阳性,20份产蛋种鸭抗凝血样本均为阴性。该项研究结果表明了该地鸭群中存在JEV感染,对当地养殖业构成潜在的威胁,同时提醒需要加强JEV在鸭群中的监测并采取有效的防控措施。; 狄荻王欣李晨曦李宗杰李蓓蓓刘珂邵东华邱亚峰魏建超马志永; 关键词：乙型脑炎病毒血清学检测 PCR鉴定

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