刘珂
- 作品数：104 被引量：145H指数：6
- 供职机构：中国农业科学院上海兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学化学工程更多>>
- 猪瘟病毒E2亚单位蛋白与集落刺激因子的融合表达及其免疫效果分析
- 优化了工程菌BL21-E2 A/D-GM-CSF(含有783 bp的E2 A/D-GM-CSF融合基因)的原核表达条件，结果表明诱导的最佳时间和诱导剂IPTG的最佳用量分别为4 h和0.8 mmol/L。在此基础上，大量...
- 倪莅文刘珂夏叶罗丽双刘晓东桂红兵庞然周斌陈溥言
- 关键词：猪瘟病毒E2基因集落刺激因子免疫增强弱毒疫苗
- 文献传递
- 裂谷热病毒Gn蛋白主要抗原区的表达、纯化及抗原性分析被引量：2
- 2015年
- 目的通过原核表达系统制备裂谷热病毒Gn片段主要抗原区蛋白,获取纯化蛋白,并分析抗原性。方法将合成的裂谷热Gn基因用PCR的方法扩增具有保护性抗原表位的两段Gn1和Gn2,并将其定向插入原核表达质粒pColdⅠ中,构建重组表达质粒pColdⅠ-Gn1和pColdⅠ-Gn2,并将重组质粒转化到BL21(DE3)感受态中,以IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析表达蛋白和表达量,并利用His-tag Ni柱进行亲和层析纯化,Western-blot鉴定表达蛋白。结果所构建的质粒pColdⅠ-Gn1和pColdⅠ-Gn2序列正确,SDS-PAGE检测到目的蛋白,Western-blot显示截断的Gn蛋白具有很好反应原性。结论成功纯化了裂谷热病毒Gn主要抗原区的表达蛋白。
- 夏鹏魏建超陆莹梅武专昌李蓓蓓刘珂邵东华邱亚峰钟登科温贵兰马志永
- 关键词：原核表达蛋白纯化
- 我国18个省份猪源肠球菌耐药调查及分析被引量：7
- 2021年
- 为研究我国猪源肠球菌的耐药情况,本研究采集18个省市猪养殖场的粪便样品836份进行了肠球菌的分离鉴定,并通过琼脂稀释法测定11种抗菌药物的最小抑菌浓度。结果显示:从836份样品中共分离出225株肠球菌,其中屎肠球菌106株,粪肠球菌56株,小肠肠球菌34株,鹑鸡肠球菌17株,铅黄肠球菌7株,坚忍肠球菌4株,Enterococcus thailandicus 1株。所有的肠球菌对被检抗菌药物耐药程度由高到低依次是四环素(98.2%)、阿米卡星(94.7%)、多西环素(89.3%)、米诺环素(88.9%)、氟苯尼考(88.4%)、红霉素(86.2%)、环丙沙星(63.1%)、氨苄西林(33.8%)、氯霉素(29.8%),未检测到万古霉素和利奈唑胺耐药菌株。除氨苄西林、万古霉素、利奈唑胺外,粪肠球菌对其余8种被检抗菌药物耐药率均高于屎肠球菌。小肠肠球菌对阿米卡星、红霉素、四环素、多西环素、米诺环素5种抗菌药物的耐药率高于屎肠球菌。肠球菌的多重耐药情况集中在6耐、7耐和8耐,占肠球菌总数的72.9%。本研究表明我国猪源肠球菌对常见抗菌药物耐药率较高,应引起更多关注。
- 姚晓慧仝慧娴王舒丰魏建超刘珂邵东华邱亚峰马志永李蓓蓓夏利宁
- 关键词：肠球菌耐药性多药耐药
- 猪血清淀粉样蛋白3(SAA3)分子SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用
- 本实验利用SYBR GreenⅠ荧光定量技术建立一种绝对定量检测猪血清淀粉样蛋白3(SAA3)的方法。根据GenBank中登录号为NM01044552.1的猪血清淀粉样蛋白3(SAA3)的全长基因序列,设计特异性引物,扩...
- 郇贝丽刘珂马改妮魏建超邵东华李蓓蓓邱亚峰石元元马志永
- 非洲猪瘟病毒B602L蛋白在杆状病毒表达系统中的表达及多抗制备被引量：1
- 2022年
- pB602L蛋白是非洲猪瘟病毒(ASFV)的非结构蛋白之一。本研究利用杆状病毒表达系统表达了ASFV pB602L蛋白并制备了该蛋白的鼠源多克隆抗体。将B602L基因克隆入杆状病毒载体pFastbac dual中构建pFast dual-B602L重组质粒,将重组质粒pFast dual-B602L转化至DH10Bac感受态中,经过3次蓝白斑筛选,得到杆状病毒重组质粒Bacmid-B602L。将重组质粒转染草地贪夜蛾卵巢细胞系(sf9)细胞,获得重组杆状病毒rBac-B602L,细胞出现病变后,在sf9中传3代。通过间接免疫荧光(IFA)和Western blot试验鉴定pB602L蛋白的表达及其反应原性。然后使用纯化的pB602L蛋白作为免疫原制备鼠源抗pB602L蛋白多克隆抗体,经过4次免疫后,采取血清以获得抗pB602L蛋白的多克隆抗体,为后续应用ASFV B602L蛋白检测做准备。结果:在重组杆状病毒表达系统中成功表达pB602L蛋白,可被His抗体检测,并可被ASFV阳性血清特异性识别,制备的多克隆抗体具有较高的特异性。本研究表明杆状病毒系统表达的pB602L蛋白具有良好的抗原性,为后续开展非洲猪瘟亚单位疫苗研究和检测奠定基础。
- 杨扬张妍张俊杰管志欣李昱昊孙卿李宗杰李蓓蓓刘珂邵东华邱亚峰马志永魏建超
- 关键词：非洲猪瘟病毒杆状病毒表达系统免疫原性
- 猪瘟病毒Core蛋白的原核表达和抗体制备及应用被引量：2
- 2015年
- 根据猪瘟病毒衣壳蛋白(Core)基因序列设计一对特异性引物,RT-PCR从猪瘟兔化弱毒中扩增出完整的Core基因,经酶切和序列测定后,克隆到携带His标签的原核表达载体p ColdⅠ中,成功构建了重组质粒p Cold-Core,并转化到大肠杆菌Rosseta 2(R2)中;利用IPTG诱导表达目的蛋白并鉴定表达效果。结果表明:经终浓度为0.1 mmol/L IPTG诱导24 h后,Core基因在R2中获得分泌性可溶表达,表达量占菌体蛋白的32.6%,SDS-PAGE显示目的蛋白相对分子质量为20 ku。Western blot结果显示Core蛋白可以分别与His单抗和猪瘟病毒阳性抗血清发生特异性反应,均出现单一反应带。将目的蛋白切胶后免疫Balb/c小鼠,制备特异性抗血清,Western blot结果显示该抗血清与衣壳蛋白反应后有明显的特异性条带,经激光共聚焦鉴定抗血清能够与胞浆中的猪瘟病毒粒子发生反应。结果表明,Core基因表达成功,制备的抗血清具有生物学功能。本研究为深入探讨Core蛋白在猪瘟病毒致病机制上的作用奠定了基础。
- 景娇张小敏何丹妮刘珂周斌陈溥言
- 关键词：猪瘟病毒原核表达抗血清
- 整合猪瘟病毒囊膜糖蛋白假型鼠白血病病毒微量中和试验的建立和初步应用被引量：1
- 2011年
- 将构建的真核表达载体pcDNA-E0、pcDNA-E2和pcDNA-E012分别与MuLV假型病毒构建体系的2种骨架载体pHIT60和pHIT111经磷酸钙瞬时共转染293T细胞,48h后收集假病毒上清,超速离心后用抗CSFV多抗通过Western blot分析发现只有E012蛋白能够在假病毒颗粒表面表达,说明E012能够整合到假型病毒粒子表面。将此假病毒(MuLV-E012)感染SK6、PK-15、ST、BHK21、Vero、COS7、293T和CEF等8种细胞,48h后检测发现只有在SK6、PK-15和ST等猪源细胞中标记基因LacZ能有效表达,表明所构建的假病毒具有感染性,只能感染猪源细胞,进一步证实了猪瘟病毒对猪的单一嗜性,并且感染性与NH4Cl浓度存在极显著的线性负相关性,结果表明猪瘟病毒进入宿主细胞的过程有pH依赖性。将假病毒MuLV-E012代替强毒Shimen株与标准阴性、阳性血清和倍比稀释的待检血清混合后感染PK-15细胞,建立了微量中和试验,与全病毒微量中和试验进行了比较,结果表明所建立的方法能够代替强毒进行血清中和试验,检测临床血清的猪瘟病毒抗体中和效价。
- 周斌刘珂魏建超陈溥言
- 关键词：猪瘟病毒囊膜糖蛋白鼠白血病病毒假病毒感染性微量中和试验
- 新猪源干扰素刺激基因LOC100623143对日本乙型脑炎的抗病毒作用研究
- 干扰素是一种具有广谱抗病毒、抗肿瘤、促进细胞生长分化和免疫调节等多种生物活性的蛋白质。在对干扰素的研究中发现,干扰素并不直接作用于病毒,而是诱导机体细胞产生众多的效应分子,通过这些效应分子发挥抗病毒作用,这些效应分子被称...
- 王婧霞顾金燕刘珂马志永
- 关键词：日本乙型脑炎病毒
- 文献传递
- 一种重组抗病毒蛋白及其制备方法和应用
- 本发明公开了一种重组抗病毒蛋白、一种编码该重组抗病毒蛋白的核酸、一种包含该核酸的重组表达载体、一种包含该重组表达载体的转化体、一种制备该重组抗病毒蛋白的方法和该重组抗病毒蛋白在制备抗猪繁殖与呼吸综合征病毒的药物中的应用。...
- 马志永刘珂侯凤香邵东华魏建超李蓓蓓邱亚峰史子学缪德年马改妮郇贝丽王飞飞
- 文献传递
- 猪链球菌2型、7型及9型小鼠感染模型的初步建立
- 2023年
- 本实验为了研究猪链球菌2型(SS2)、猪链球菌7型(SS7)及猪链球菌9型(SS9)菌株对BALB/c小鼠的致病性,探究BALB/c小鼠作为猪链球菌动物感染模型的可行性以及作为后续实验的依据的可靠性。本研究通过腹腔注射猪链球菌感染BALB/c小鼠,对死亡小鼠进行无菌解剖分离菌株并培养,对培养的菌株进行革兰氏染色法和PCR鉴定;同时利用荧光定量的方法检测各个脏器细菌的载量和组织切片HE染色观察脏器的病理变化。实验结果显示:攻毒的小鼠出现典型的临床症状并死亡,经过实验验证后确定小鼠是由于感染猪链球菌而致病、致死;测定SS2、SS7及SS9的LD_(50)分别为3.7×10^(7)、4.1×10^(7)、7.9×10^(7) CFU/mL。因此BALB/c小鼠对猪链球菌易感,可以作为实验室研究猪链球菌良好的实验动物。
- 闫祖杰潘如意张俊杰马晓春魏建超李蓓蓓刘珂邱亚峰马志永刘聚祥
- 关键词：猪链球菌BALB/C小鼠动物模型荧光定量
