张晓艳
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 供职机构：军事医学科学院放射与辐射医学研究所更多>>
- 发文基金：中国博士后科学基金国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 过表达MEG3慢病毒载体构建及其对骨髓瘤细胞系XG-7凋亡的影响被引量：1
- 2016年
- 目的：构建过表达母系表达印记基因MEG3（materally expressed gene 3,MEG3）全长的慢病毒载体,观察其对骨髓瘤细胞凋亡的影响。方法：以包含MEG3全长的包装质粒pcDNA3.0-MEG3为模板,设计针对MEG3全长的引物（寡核苷酸片段）,经PCR扩增后获得MEG3全长,并将其亚克隆入线性化的慢病毒表达载体pCDH-EF1-copGFP中,经双酶切、PCR及测序等方法鉴定。利用脂质体转染试剂将鉴定正确的pCDH-EF1-MEG3-copGFP重组质粒转染HEK-293T细胞,进一步通过荧光显微镜和流式细胞术检测GFP表达效率,real-time PCR检测MEG3mRNA表达水平。通过三质粒共转染及PEG纯化的方法获得慢病毒,以优化感染滴度感染骨髓瘤细胞系,通过流式细胞术检测过表达MEG3对细胞凋亡的影响。结果：经酶切、PCR及测序等方法证实成功构建pCDH-EF1-MEG3-copGFP过表达载体;通过流式细胞术测定制备的慢病毒滴度为1.86×10^8pfu/ml;流式细胞术检测和realtime PCR方法证实MEG3在293T细胞和骨髓瘤细胞中表达明显上调;流式细胞术检测证实过表达MEG3可诱导骨髓瘤细胞凋亡。结论：成功构建并制备过表达MEG3的慢病毒过表达载体pCDH-EF1-MEG3-copGFP,该载体能高效过表达MEG3并诱导骨髓瘤细胞凋亡,进一步证实了MEG3具有抑癌功能,为进一步研究MEG3调控骨髓瘤细胞生物学特性及机制奠定了基础。
- 张怡堃王华肖凤君张晓艳刘佩林时全星殷召雷琰王立生
- 关键词：慢病毒载体
- IL-21通过SENP1调控NK细胞生物学特性
- 2017年
- 目的探讨IL-21对小泛素相关修饰蛋白特异性蛋白酶1(SENP1)表达的影响及其对NK细胞生物学特性的调控作用。方法以NK92细胞系为模型,采用慢病毒介导的Senp1基因干涉策略,抑制NK92细胞SENP1的表达。实时荧光定量PCR和Western印迹检测SENP1表达水平;利用CCK-8细胞增殖检测试剂盒测定细胞增殖活性;AnnexinⅤ-APC/PI标记检测细胞凋亡。将K562细胞与NK92细胞共培养,荧光素酶报告基因方法检测NK92细胞的杀伤活性。结果 IL-21处理上调NK92细胞SENP1的表达;慢病毒介导Senp1-shRNA转染显著降低NK92细胞内Senp1 mRNA和蛋白表达水平。Senp1干涉组NK92细胞增殖能力较对照组明显降低。同时,干涉Senp1能促进NK92细胞凋亡,但对NK92细胞杀伤K562活性无显著影响。结论 IL-21上调NK92细胞SENP1的表达;干涉Senp1能抑制NK92细胞增殖,促进细胞凋亡,同时影响穿孔素表达和对肿瘤细胞的杀伤活性。
- 李宇翔徐芹芹孙慧燕魏静张晓艳贾庆华肖凤君王立生
