朱莲莲
- 作品数：4 被引量：8H指数：2
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- 乐至黑山羊肾溶菌酶基因克隆及原核表达被引量：2
- 2013年
- 本研究对乐至黑山羊肾溶菌酶(LZLyK)基因进行了克隆、表达,并对其活性进行了测定。采用比较基因组技术,成功克隆了LZLyK基因,其cDNA长444 bp,编码147个氨基酸。同源性分析结果表明,氨基酸同源性与绵羊溶菌酶2(M32498.1)最高,达96.9%。构建原核表达质粒pET-LZLyK,转化大肠杆菌BL21(DE3)并诱导表达。SDS-PAGE分析结果表明,重组蛋白LZLyK得到正确表达,分子质量约为16、30 ku。采用比浊法测定了LZLyK蛋白的活性,其活性为15 U/mL,表明LZLyK蛋白具有一定抗菌活性。运用实时荧光定量PCR发现在乐至黑山羊肝脏、肾脏、气管和皱胃中均有肾溶菌酶基因的表达,在胃中表达量较高。
- 胡宇飞江明锋张鹏罗樊朱莲莲王永
- 关键词：乐至黑山羊克隆原核表达
- 溶菌酶的分离纯化与活性测定方法的研究进展被引量：2
- 2012年
- 溶菌酶是能够溶解细菌细胞壁的天然碱性蛋白质的总称。弗雷明首次在人的眼泪中发现溶菌酶,在近90年的发展历程中,它的结构、性质和功能被逐个认清。1936年,莫尔首先对溶菌酶进行了分离、纯化。随后在研究者的不断努力下,溶菌酶的分离、纯化和活性测定方法得到不断完善。文章综述了溶菌酶的分离、纯化和活性检测方法,以期对本领域的研究者提供该方面的概貌。
- 朱莲莲江明锋王永
- 关键词：溶菌酶纯化活性
- 藏绵羊胃溶菌酶基因的克隆、定量分析及其蛋白性质和结构的预测被引量：1
- 2013年
- 本实验旨在研究藏绵羊溶菌酶组织基因组成、分布情况和蛋白质结构。通过RT-PCR方法克隆测序得到藏绵羊溶菌酶基因核苷酸序列,并对氨基酸的组成和功能活性位点如53-谷氨酸和71-天冬氨酸等进行统计;运用生物信息学软件对藏绵羊溶菌酶的等电点、信号肽序列等性质进行分析,并构建系统进化树;运用荧光定量PCR方法对藏绵羊的瘤胃、瓣胃、皱胃、肾脏、气管和肝脏分别进行检测溶菌酶基因的部分组织分布情况及其mRNA的表达水平。结果表明:此绵羊溶菌酶基因核苷酸序列为447 bp,编码148个氨基酸残基;其mRNA的表达水平在藏绵羊的瘤胃和瓣胃相对较高,与其他4种组织比较差异显著(P<0.05);皱胃与肾脏也有显著性差异(P<0.05)。
- 朱莲莲江明锋张鹏骆美蓉李建波任洪辉王永
- 关键词：溶菌酶克隆MRNA表达藏绵羊
- 藏绵羊溶菌酶1基因的克隆、原核表达及生物信息学分析被引量：4
- 2015年
- 试验旨在研究藏绵羊溶菌酶(lysozyme,LZM)1基因在瘤胃、瓣胃、皱胃、气管、肝脏和肾脏各组织中的表达情况、进化关系及抑菌活性。采用RT-PCR技术克隆藏绵羊LZM1基因,定量PCR检测LZM1基因在瘤胃、瓣胃、皱胃、气管、肝脏和肾脏中的表达情况,并将该基因的氨基酸序列与普通牛胃LZM等氨基酸序列进行比对,根据邻位连接法构建系统进化树;将该基因插入pET-32a质粒后构建得到pET-32a-LZM1重组质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞并诱导表达,SDS-PAGE法鉴定表达产物;采用比浊法测定LZM1蛋白的活性;采用琼脂糖平板扩散法研究异源表达蛋白的抑菌活性。结果表明,从藏绵羊瘤胃、瓣胃、皱胃、气管、肝脏和肾脏各组织中成功克隆藏绵羊LZM1基因,其在瘤胃、瓣胃、皱胃、气管、肝脏和肾脏中均有表达,在皱胃中表达量最高;其氨基酸序列与普通牛胃LZM(GenBank登录号:NM_001080339.1)序列的同源性最高(96%);重组蛋白LZM1分子质量约为35ku;其比活力约为400U/mL;该重组LZM1对金黄色葡萄球具有良好的抑菌活性。
- 江伟华朱莲莲刘益丽林忠荔江明锋
- 关键词：藏绵羊溶菌酶克隆原核表达
