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长效GLP-1-IgG2σ Fc融合蛋白的真核表达与生物活性鉴定被引量：2: 2016年; 目的:在真核细胞中融合表达胰高血糖素样肽1(GLP-1),纯化后探究产物的生物学活性。方法:通过预留酶切位点将合成的GLP-1-Ig G2σFc融合蛋白表达序列连入表达载体质粒,用电转方法将线性化质粒稳定转染CHO-K1细胞,通过亚克隆筛选出蛋白高表达细胞株;收集高表达细胞株培养上清并初步纯化,采用口服葡萄糖耐量试验(OGTT)探究GLP-1融合蛋白降低血糖的生物学活性。结果:经过一轮亚克隆,筛选得到的细胞株的GLP-1融合蛋白产量达1 g/L,OGTT实验结果表明GLP-1融合蛋白具有降血糖生物活性。结论:GLP-1变体和Ig G2σ的Fc段连接是一种可行的融合蛋白形式,融合蛋白具有GLP-1受体激动剂的降糖作用,并且细胞株的筛选方式和初步纯化方法也具有可行性,为后续的体内、外活性研究和纯化方法确定提供了基础。; 杨懿万德友刘蕴慧冯红茹杨利高新宋海峰; 关键词：胰高血糖素样肽1 融合蛋白真核表达口服葡萄糖耐量试验

人源抗BLyS单链抗体的筛选及其构建与表达被引量：2: 2015年; 目的:从人源单链抗体库中筛选抗B细胞刺激因子(BLy S)的单链抗体基因、构建表达载体并实现单链抗体的表达。方法:以哺乳动物细胞展示型人源Sc Fv抗体库为起始文库,通过流式细胞术进行分选,获得荧光强度最强、比例为0.1%的阳性细胞。从候选细胞中提取质粒并转化至DH5α中进行扩增,得到质粒转染293T细胞作为下一轮筛选所需的抗体库。经过依次降低抗原浓度进行了3轮分选得到2个候选的Sc Fv序列。经序列分析,选择其中一种单链抗体基因,利用基因工程技术构建分泌型表达质粒,转染293E细胞并通过镍亲和层析纯化获得B-10 Sc Fv抗体蛋白并通过Fortie Bio Octet QK进行亲和力分析。结果:经过3轮筛选获得了全新的抗BLy S Sc Fv抗体序列,成功构建并表达了anti-Bly S Sc Fv抗体蛋白,该单链抗体与的BLy S亲和常数为3.08 nmol·L-1。结论:从哺乳动物细胞展示型人源Sc Fv抗体库中成功获得了可结合BLy S的全新单链抗体基因序列,该单链抗体与BLy S具有较高的亲和力,这为后续的活性研究以及产品开发奠定了基础。; 钱尼良张晶高柳村万德有冯红茹刘蕴慧杨懿高新宋海峰; 关键词：B细胞 B细胞刺激因子单链抗体

GLP-1受体激动剂的临床研究进展被引量：7: 2015年; 当前研究已经显示2型糖尿病同肥胖症具有并发趋势,临床上也公认将控制患者体重列入到2型糖尿病治疗指南中。目前在已经过验证的治疗方案中,只有胰高血糖素样肽受体激动剂(glucagon-like peptide-1 receptor agonists,GLP-1 RAs)可以实现对患者的体重和血糖水平同时调控。GLP-1作为GLP-1受体激动剂研究的基础,具有血糖依赖性的促进胰岛素分泌作用。其可以通过抑制食欲和减缓胃排空来达到减轻体重的作用。天然的GLP-1由于受到二肽基肽酶(dipeptide peptidase,DPP-Ⅳ)的降解作用,半衰期仅为2 min。为了延长GLP-1 RAs的体内半衰期,多种改造策略被应用于新型GLP-1受体激动剂的研究开发,目前此类GLP-1受体激动剂已部分进入临床评估阶段,给药频率将从每周1次延长到每月1次。本文将对近年来已进入临床试验研究的GLP-1受体激动剂进行综述。; 杨懿高新宋海峰; 关键词：2型糖尿病 GLP-1受体激动剂半衰期体重

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杨懿