王栋
- 作品数：4 被引量：15H指数：3
- 供职机构：新疆医科大学第一附属医院临床医学研究院更多>>
- 发文基金：新疆维吾尔自治区重大科技专项国家自然科学基金新疆维吾尔自治区自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- TGF-β1促进食管癌上皮间质转化的发生发展被引量：6
- 2015年
- 目的探讨转化生长因子(TGF-β1)在促进食管癌Eca109细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化中的作用。方法利用TGF-β1受体抑制剂和病毒转染TGF-β1干扰RNA(siRNA)处理Eca109细胞,分为3组:实验组(病毒稳定TGF-β1 siRNA转染Eca109细胞)、阴性对照组(转染无关序列Eca109细胞)、空白对照组(正常未经任何处理的Eca109细胞),采用荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测TGF-β1及上皮间质转化(EMT)相关指标E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、锌指转录因子(Snail)]在mRNA水平表达情况;EMT相关指标蛋白(Ecadherin、Vimentin)的表达;细胞增殖实验(MTT)、细胞划痕实验及Transwell法分别检测细胞增殖、迁移、侵袭的变化情况。结果通过TGF-β1受体抑制剂(0、0.1、1、10μm/m L)处理Eca109细胞后,在mRNA水平TGF-β1表达逐渐降低,E-cadherin表达逐渐升高,Vimentin、Snail表达逐渐降低(P<0.05);在蛋白水平,E-cadherin表达逐渐升高,Vimentin表达逐渐降低,细胞增殖和迁移能力也逐渐降低(P<0.05)。实验组与空白对照组和阴性对照组相比,在mRNA水平实验组TGF-β1表达降低(P<0.05);在蛋白水平,实验组E-cadherin表达增高,Vimentin表达降低;实验组细胞增殖、迁移和侵袭能力均降低(P<0.05)。结论在细胞水平,TGF-β1可促进食管癌细胞的增殖和上皮间质转化的进程。
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- 关键词：食管鳞癌RNA干扰(RNAI)
- 食管癌中ERK1/2的功能及其与EMT的相关性分析被引量：3
- 2015年
- 目的探讨细胞外信号调节激酶(Extracellular Signal-regulated Kinase,ERK1/2)信号通路在食管癌中的功能及其对上皮间质转化(Epithelial-Mesenchymal Transition,EMT)的调控作用。方法实验组使用ERK1/2磷酸化抑制剂U0126,抑制ERK1/2的磷酸化程度后,阴性对照组为正常培养的Eca109细胞,采用噻唑蓝实验、细胞划痕以及Transwell实验分别检测ERK1/2对食管癌细胞Eca109增殖、迁移和侵袭的影响,通过Western blot实验检测ERK1/2对EMT相关蛋白Vimentin表达的影响。结果 U0126作用后,食管癌细胞Eca109增殖受到抑制,迁移速度减慢,侵袭细胞数显著减少,同时Vimentin蛋白表达量显著降低。结论磷酸化的ERK1/2能够促进食管癌细胞的增殖、迁移和侵袭;磷酸化的ERK1/2能够调控Vimentin的表达,食管癌中ERK1/2可能参与了EMT过程,从而促进了食管癌细胞的侵袭和转移。
- 刘清刘涛郑树涛杨晨晨王栋戴芳卢晓梅
- 关键词：食管癌VIMENTIN
- MTDH靶向RNA干扰质粒构建及其对食管癌细胞EC9706的影响被引量：3
- 2015年
- 目的应用RNA干扰技术设计构建针对MTDH基因的干扰质粒,观察脂质体转染食管癌细胞EC9706的干扰效果,评价MTDH基因对细胞增殖及细胞周期的影响。方法设计针对MTDH基因的3对干扰序列,分别命名为MTDH-shRNA-1、MTDH-shRNA-2、MTDH-shRNA-3。另设计与MTDH基因无关序列的Control-shRNA,合成的单链DNA经变性、退火形成双链DNA与经过BamHI和HindⅢ双酶切后的pRNA-U6.1/Neo线性质粒连接。实验设立3组:阴性对照组(正常生长的EC9706细胞,不做任何处理)、Control-shRNA组(转染随机序列Control-shRNA)、MTDH-shRNA组(转染MTDH-shRNA),检测细胞增殖能力、细胞周期分布。结果将MTDH-shRNA-1、MTDH-shRNA-2、MTDH-shRNA-3及Control-shRNA转染EC9706细胞后,48h时倒置显微镜下观察可见绿色荧光细胞所占细胞的百分比>80%,干扰载体能有效表达,转染各组与阴性对照组比较,MTDH-shRNA-1、MTDH-shRNA-2、MTDH-shRNA-3组对MTDH mRNA的表达都有明显的下调,差异有统计学意义(P<0.05),尤其是shRNA-1组的MTDH mRNA的表达明显低于其它2组。选取MTDH-shRNA-1(MTDH-shRNA)进行细胞功能的试验。MTDH-shRNA组细胞增殖速度明显低于MTDH-Control组及阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.05),MTDH-shRNA组与阴性对照组及MTDH-Control组比较,G0/G1期所占比例增加,而S期细胞所占比例减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论成功构建MTDH干扰质粒,MTDHshRNA-1干扰效果最好,MTDH-shRNA抑制细胞增殖,使EC9706细胞的细胞周期阻滞在细胞分裂周期的S期。质粒的构建为今后MTDH在食管癌等肿瘤的研究方面奠定了基础。
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- 关键词：MTDHRNA干扰技术食管癌细胞
- MiR-106b对食管癌KYSE150细胞的生长及细胞上皮间质转化的影响被引量：3
- 2015年
- 目的研究微小RNA106b(miR-106b)对食管癌KYSE150细胞增殖、迁移、侵袭及上皮间质转化(Epithelial-Mesenchymal Transition,EMT)的影响,为临床治疗食管癌提供新的理论依据。方法用miR-106b慢病毒转染KYSE150细胞,实验分为3组:control组(未转染miR-106b的KYSE150细胞)、miR-NC组(转染随机序列)和miR-106b组(转染miR-106b的KYSE150的细胞)。采用实时荧光定量聚合酶联反应(qRT-PCR)和免疫印迹(Western Blot)检测miR-106b和EMT的相关标记物E-钙黏蛋白(E-Cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-Cadherin)的表达情况,四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测细胞的增殖能力,划痕实验检测细胞的迁移能力,Transwell方法检测细胞的侵袭能力。结果慢病毒稳定转染miR-106b后,食管癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力均增强(P<0.05);qRT-PCR与Western blot检测显示miR-106b组E-Cadherin表达较miR-NC组、control组明显降低(P<0.05);N-Cadherin表达明显升高(P<0.05)。结论 miR-106b能够促进食管癌细胞的增殖、迁移和侵袭,同时能促进上皮间质的转化。
- 戴芳刘涛郑树涛刘清王栋伊力亚尔.夏合丁卢晓梅
- 关键词：细胞增殖细胞迁移细胞侵袭上皮间质转化
