高晶
- 作品数：8 被引量：18H指数：3
- 供职机构：黑龙江八一农垦大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：“十二五”国家科技计划农村领域国家自然科学基金中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程更多>>
- 牛坏死杆菌溶血素基因克隆、表达和抗原性分析被引量：4
- 2015年
- 为了研制新型有效安全的牛坏死杆菌病亚单位疫苗和诊断试剂，试验利用PCR扩增技术获得了牛坏死杆菌H05菌株hly基因的全长及5个相互重叠的截短片段的核苷酸序列，并利用原核表达载体pET-32a对hly基因的5个截短片段进行了表达和抗原性分析。结果表明：hly-2、hly-3和hly-4片段获得了成功表达，且hly-2（aa278～567）、hly-3（aa566～888）和hly-4（aa887～1163）重组蛋白能够与牛坏死杆菌多克隆抗体反应。说明hly-2、hly-3和hly-4可以用于研制新型牛坏死杆菌病亚单位疫苗和诊断试剂。
- 孙东波吕思文高晶郭东华王建发武瑞王洪斌
- 关键词：腐蹄病坏死杆菌溶血素原核表达抗原性
- 猪干扰素α-1基因的原核表达与多克隆抗体制备被引量：3
- 2014年
- [目的]利用大肠杆菌原核表达系统对猪干扰素α-1(Po IFNα-1)基因进行表达,制备Po IFNα-1重组蛋白多克隆抗体。[方法]根据Gen Bank发表的Po IFNα-1核苷酸序列,合成密码子优化的Po IFNα-1基因,构建Po IFNα-1基因的p ET-28a原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)宿主菌后,利用IPTG进行诱导表达。表达的Po IFNα-1重组蛋白纯化后,免疫昆明系小鼠,制备多克隆抗体。采用Western blot技术检测Po IFNα-1重组蛋白的多克隆抗体与天然Po IFNα-1的反应性。[结果]合成的Po IFNα-1基因在大肠杆菌BL21(DE3)宿主菌中成功表达,针对Po IFNα-1重组蛋白的多克隆抗体能够识别天然的猪干扰素α-1。[结论]合成的Po IFNα-1基因在大肠杆菌中获得了成功表达,为后续研究奠定了基础。
- 刘娜李春秋高晶耿雨菲王欣宇苏明俊魏姗王志慧王建发武瑞孙东波
- 关键词：原核表达抗体制备
- 猪轮状病毒(G9型)TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立被引量：2
- 2015年
- 为建立灵敏、特异的G9型猪轮状病毒(Po RV)Taq Man的荧光定量RT-PCR检测方法,本研究根据Gen Bank中登录的G9型Po RV NMTL株的VP7基因保守区域设计一条特异性引物和探针。以104TCID50的病毒液所提取的总RNA进行10倍系列稀释作为标准品,通过对反应条件进行优化,建立了检测G9型Po RV的Taq Man荧光定量RT-PCR检测方法。结果显示,该方法的相关系数R2=0.991,对其它常见的Po RV(G5)、猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻、猪繁殖与呼吸综合征和猪圆环病毒2型等猪病病原检测均为阴性,具有良好的特异性;该方法最低可以检测到的病毒滴度为10-3TCID50,比普通RT-PCR方法灵敏度高约1 000倍;组内和组间变异系数均小于0.87%,稳定性高,重复性好。对疑似感染Po RV的45份临床病料样品进行检测,结果表明,该方法阳性率(64.4%)高于普通RT-PCR(44.4%),两者总符合率为80%。本研究建立的方法为Po RV的流行病学调查和早期诊断奠定基础。
- 王宇飞时洪艳朱向东陈建飞袁婧张鑫石达刘建波王潇博高晶冯力
- 关键词：轮状病毒VP7基因
- 猪整合素β3多克隆抗体制备与鉴定
- 2016年
- 为了制备猪整合素β3多克隆抗体,试验利用大肠杆菌原核表达系统,对密码子优化的猪整合素β3基因主要抗原区进行原核表达,表达的重组蛋白纯化后,免疫Balb/c雌性小鼠,采血后分离血清,进一步通过ELISA和Western-blot对制备的猪整合素β3多克隆抗体进行鉴定。结果表明:猪整合素β3基因主要抗原区获得了成功表达,表达蛋白分子质量为102 ku左右,以纯化重组蛋白作为免疫原制备的多克隆抗体效价为1∶12 800,且能识别天然猪整合素β3。
- 高晶王志慧郭东华李春秋苏明俊王欣宇赵喜文王恩雨魏姗刘秋瑾孙东波
- 关键词：整合素Β3原核表达重组蛋白多克隆抗体病毒受体病毒感染
- 奶牛腐蹄病坏死杆菌分离鉴定及白细胞毒素基因lktA1序列分析被引量：3
- 2015年
- 为分离纯化奶牛腐蹄病坏死杆菌,分析其与其他菌株的亲缘关系,本研究利用坏死杆菌白细胞毒素特异性引物,对奶牛腐蹄病病牛蹄部拭子样品进行了PCR检测,利用厌氧培养基对PCR检测阳性样品进行了坏死杆菌的分离培养,以分离的坏死杆菌基因组DNA为模板,对白细胞毒素基因进行了克隆和序列分析。结果显示,9份奶牛腐蹄病病牛蹄部拭子样品PCR检测结果均为阳性,对其中一份样品中的坏死杆菌进行分离培养,获得了纯培养物,命名为bFR13-1。坏死杆菌bFR13-1菌株白细胞毒素基因测序结果显示,与GenBank已发表的H05、A25和B35菌株的白细胞毒素基因在核苷酸水平的同源性分别为98.40%、98.35%和90.79%,推导氨基酸的同源性分别为97.7%、97.6%和89.0%。进化树分析结果显示,坏死杆菌bFR13-1菌株白细胞毒素与H05菌株的同源性最高,bFR13-1菌株与H05菌株和A25菌株呈较近亲缘关系。结果表明,不同坏死杆菌分离株的白细胞毒素呈现一定的变异性,这种变化是否与坏死杆菌致病性相关,值得深入研究。
- 高晶李春秋姚爽张立春王欣宇王志慧赵喜文魏姗王恩雨孙东波武瑞郭东华
- 关键词：奶牛腐蹄病坏死杆菌
- 猪整合素αv多克隆抗体制备与应用被引量：3
- 2017年
- 利用大肠杆菌原核表达系统对猪整合素αv基因片段进行表达,纯化目的蛋白免疫小鼠,制备猪整合素αv多克隆抗体,并对其进行鉴定及初步应用。对基因序列进行预测分析后,截取胞外区抗原性较好的基因片段,针对大肠杆菌稀有密码子优化后合成该基因序列,克隆至pGEX-6p-1原核表达载体上,诱导表达并纯化重组蛋白,对重组蛋白进行Western blot鉴定后免疫小鼠,制备多克隆抗体。利用间接ELISIA方法检测抗体效价,利用Western blot技术检测猪整合素αv多克隆抗体与天然整合素αv蛋白的反应原性。获得了分子质量为83 ku的重组蛋白,以纯化的重组蛋白作为免疫原制备的多克隆抗体效价大于1∶6 400,且能识别天然整合素αv蛋白。研究成功制备了猪整合素αv多克隆抗体,为后续相关研究提供基础。
- 王恩雨高晶郭东华李春秋孙东波
- 关键词：整合素ΑV多克隆抗体重组蛋白病毒受体
- 不同程度跛行奶牛血浆中E_2、GnRH、FSH和PGF2a的检测与分析被引量：1
- 2015年
- 为研究跛行对产后奶牛主要生殖激素的影响,实验采用5分制跛行评价标准,在黑龙江地区某规模化牧场,对产后40 d泌乳牛（未使用任何生殖激素类药物）进行跛行评分,然后对跛行评分为1~5分奶牛血浆样品中的促性腺激素释放激素（Gn RH）、促卵泡生长激素（FSH）、雌二醇（E2）和前列腺素（PGF2a）含量进行测定,分析不同跛行评分奶牛血浆样品中4种激素的变化。共获得49头泌乳奶牛作为研究对象,其中1分为8头,2分为19头,3分为14头,4分为4头,5分为4头。研究结果显示,与健康奶牛相比,随着跛行评分的增加,E2、Gn RH、FSH和PGF2a的含量均呈现不同程度的减少趋势。研究结果提示,跛行能影响奶牛产后主要的生殖激素分泌。
- 谷城蒋庆余王欣宇高晶李春秋魏姗王志慧王建发曲永利武瑞孙东波
- 关键词：跛行激素产后
- 黑龙江东部某牛场泌乳牛跛行调查及其与产奶量、胎次和干物质采食量的关系研究被引量：3
- 2015年
- 为了调查泌乳奶牛跛行与产奶量、胎次和干物质采食量(DMI)的关系,研究采用5分制跛行评价标准,对黑龙江东部某牛场376头泌乳奶牛进行跛行评价,同时记录每头实验泌乳奶牛的平均日产奶量(kg·d-1)、胎次和DMI。跛行评分结果显示,1分泌乳奶牛头数为42(11.17%),2分泌乳奶牛头数为83(22.07%),3分泌乳奶牛头数为187(49.73%),4分泌乳奶牛头数为50(13.30%),5分泌乳奶牛头数为14(3.72%)。进一步统计分析结果显示,产奶量、DMI与跛行评分呈负相关,胎次与跛行评分呈正相关;跛行严重影响泌乳奶牛的产奶量,1分与4分泌乳奶牛相比,日产奶量相差约7 kg。研究通过跛行评分调查,明确了该牛场泌乳奶牛跛行情况,以及跛行评分与产奶量、胎次、DMI的关系,为奶牛跛行的防治及其对奶牛生产的影响提供了基础。
- 祝东彬高晶蒋庆余谷城苏明俊管森发王建发曲永利武瑞孙东波
- 关键词：跛行产奶量胎次DMI
