曹栋
- 作品数：3 被引量：16H指数：2
- 供职机构：北京大学更多>>
- 发文基金：国家质检总局科技计划项目国家公益性行业科研专项国家质检公益性行业科研专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 创伤弧菌鞭毛蛋白单克隆抗体的制备及在食品检测中的应用被引量：2
- 2013年
- 目的制备创伤弧菌鞭毛蛋白单克隆抗体（mAb）并建立双抗夹心ELISA。方法采用差速离心法提取创伤弧菌ATCC1．1758菌株的鞭毛蛋白，并以此为抗原免疫BALB／c小鼠，抗血清效价达到1：32000时，取脾细胞与生长良好的对数期Sp2／0骨髓瘤细胞进行融合。采用杂交瘤技术和ELISA制备并筛选分泌mAb的杂交瘤细胞株，有限稀释法对阳性孔克隆化培养。制备腹水，纯化以得到抗体。结果获得5株持续、稳定分泌抗创伤弧菌鞭毛蛋白mAb的杂交瘤细胞株，命名为VVN0．1～VVN0．5，抗体效价高达1：（2×10^6）。SDS—PAGE结果显示，提取出的鞭毛蛋白相对分子质量（丝）为44000并且纯度较高。采用VVN0．5抗体建立了创伤弧菌双抗夹心ELISA，该方法的检测灵敏度达到10^3CFU／mL菌液，通过采用12株创伤弧菌和130株非创伤弧菌进行特异性实验，12株创伤弧菌呈阳性反应，130株非创伤弧菌呈阴性反应，结果表明VVN0．5抗体具有良好的特异性。在基质添加试验中，通过增菌，最低检出限为2CFU／25g样品。结论成功制备了创伤弧菌鞭毛蛋白单克隆抗体，并将其应用于双抗夹心ELISA，该方法的检测灵敏度达到1×10^3CFU／mL菌液，与所测试的非目标菌没有交叉反应。
- 曾静程晋霞张蕾张琳张海予魏海燕刘雪松曹栋
- 关键词：创伤弧菌鞭毛蛋白单克隆抗体
- 霍乱弧菌鞭毛蛋白单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA的建立被引量：6
- 2013年
- 目的制备霍乱弧菌鞭毛蛋白单克隆抗体（mAb）、建立双抗体夹心ELISA并初步应用于食品检测。方法采用差速离心法提取霍乱弧菌Vc75菌株的鞭毛蛋白，并以此为抗原免疫BALB／c小鼠，抗血清效价达到1：32000时，取脾细胞与生长良好的对数期Sp2／0骨髓瘤细胞进行融合。多次克隆化培养后获得杂交瘤细胞株并制备腹水，纯化后得到抗体。结果获得6株持续、稳定分泌抗霍乱孤菌鞭毛蛋白mAb的杂交瘤细胞株，命名为VcNo．1～VcNo．6，抗体效价高达1：2×10^6。SDS-PAGE结果显示，提取出的鞭毛蛋白相对分子质量（肘，）为44000并且纯度较高。采用VcNo．6抗体建立了霍乱弧菌双抗体夹心ELISA，该方法的检测灵敏度达到10^3CFU／mL菌液，通过采用100株霍乱弧菌和101株非霍乱弧菌进行特异性实验，100株霍乱弧菌呈阳性反应，101株非霍乱弧菌呈阴性反应，结果表明VcNo．6抗体具有良好的特异性。在基质添加试验中，最低检出限为1CFU／g样品。结论成功制备了霍乱弧菌鞭毛蛋白mAb，并将其应用于双抗体夹心ELISA，该方法的检测灵敏度达到10^3CFU／mL菌液，与所测试的非霍乱弧菌没有交叉反应。
- 程晋霞曾静张蕾张琳张海予刘雪松曹栋
- 关键词：霍乱弧菌鞭毛蛋白单克隆抗体双抗体夹心ELISA
- 副溶血性弧菌鞭毛蛋白单克隆抗体的制备及其活性分析被引量：9
- 2013年
- 目的制备副溶血性弧菌鞭毛蛋白单克隆抗体(mAb)并建立双抗夹心ELISA。方法采用差速离心法提取副溶血性弧菌ATCC 17802菌株的鞭毛蛋白,并以此为抗原免疫BALB/c小鼠,抗血清效价达到1∶32 000时,取脾细胞与生长良好的对数期Sp2/0骨髓瘤细胞进行融合。多次克隆化培养后获得杂交瘤细胞株并制备腹水,纯化后得到抗体。结果获得6株持续、稳定分泌抗副溶血性弧菌鞭毛蛋白mAb的杂交瘤细胞株,命名为VpNo.1～VpNo.6,抗体效价高达1∶2×106。对抗体进行了Ig类和亚类检测以及Western blot法鉴定,其Ig亚类依次为IgG1、IgG1、IgM、IgG1、IgG2a和IgM。SDS-PAGE结果显示,提取出的鞭毛蛋白相对分子质量(Mr)为42 000并且纯度较高。采用VpNo.6抗体建立了副溶血性弧菌双抗夹心ELISA,该方法的检测灵敏度达到103CFU/mL菌液,通过采用134株副溶血性弧菌和74株非副溶血性弧菌进行特异性实验,结果表明134株副溶血性弧菌呈阳性反应,74株非副溶血性弧菌呈阴性反应,VpNo.6抗体具有非常好的特异性。在基质添加试验中,最低检出限为21 CFU/g样品。结论成功制备了副溶血性弧菌鞭毛蛋白mAb,并将其应用于双抗夹心ELISA,该方法的检测灵敏度达到1×103CFU/mL菌液,与所测试的非副溶血性弧菌没有交叉反应。
- 张蕾张西萌张海予魏海燕马丹刘雪松曹栋曾静
- 关键词：副溶血性弧菌鞭毛蛋白单克隆抗体
