张海予
- 作品数：16 被引量：71H指数：5
- 供职机构：北京农学院食品科学与工程学院更多>>
- 发文基金：国家质检总局科技计划项目国家质检公益性行业科研专项公益性行业科研专项更多>>
- 相关领域：医药卫生轻工技术与工程农业科学理学更多>>
- 海产品中霍乱弧菌免疫磁分离和环介导等温扩增快速检测方法的建立被引量：5
- 2015年
- 目的:采用纳米免疫磁珠分离霍乱弧菌,建立霍乱弧菌环介导等温扩增检测方法,以缩短检测时间。方法:采用本实验室制备的霍乱弧菌单克隆抗体制备纳米免疫磁珠,特异性吸附霍乱弧菌,结合环介导等温扩增技术,建立霍乱弧菌快速检测方法。结果:霍乱弧菌纳米免疫磁珠在菌体浓度103CFU/m L水平,对霍乱弧菌的捕获率最高达70%。免疫磁分离结合环介导等温扩增技术,在纯培养、无需增菌的情况下,检测灵敏度达到4.8×102CFU/m L菌液。通过测试102株霍乱弧菌和101株非目标菌,该检测方法均具有良好的特异性。在食品基质添加试验中,其检测限为1 CFU/25g样品,增菌时间缩短到8 h。结论:霍乱弧菌免疫纳米磁珠结合环介导等温扩增技术缩短了增菌时间。目标菌纯培养、无需增菌条件下,检测灵敏度达到4.8×102CFU/m L增菌液。人工添加样品,8 h增菌条件下,检测低限达到1 CFU/25 g样品。
- 程晋霞曾静张西萌张蕾刘莉张海予
- 关键词：霍乱弧菌环介导等温扩增
- 大肠埃希氏菌在熟肉制品中生长预测模型的建立被引量：1
- 2017年
- 【目的】建立大肠埃希氏菌在熟肉制品中的生长预测模型。【方法】分别将大肠埃希氏菌接种到熟猪肉的不同部位(猪肌肉组织和脂肪组织),以及接种到经不同盐质量分数加工过的熟肉中,测定大肠埃希氏菌菌落数,用Origin 8.0统计软件对数据进行模型拟合。【结果】两个温度下大肠埃希氏菌在熟猪瘦肉和脂肪上的生长用Gompertz方程拟合要比线性方程拟合的好,而Logistic方程则能较好的描述不同盐质量分数时大肠埃希氏菌在熟肉上的生长。模型拟合的标准差和相关系数相对较好,表明建立的Gompertz方程、线性方程和Logistic方程的模型均有效。【结论】Gompertz方程和Logistic方程能够很好预测大肠埃希氏菌在不同熟肉制品中的生长。
- 胡燕卢大新张海予王京韩嘉宁
- 关键词：大肠埃希氏菌肉制品食品安全
- 耐高温中性蛋白酶产生菌株KN1的部分酶学性质及发酵条件的研究被引量：4
- 2011年
- 为了给酶的应用提供理论依据,采用Folin-酚法测定蛋白酶活性,通过单一变量控制对KN1菌株的蛋白酶酶学特性和发酵条件进行研究。该酶的最适作用温度为75℃,最适作用pH7.5,Cu^(2+)对酶活有促进作用;EDTA对酶活有明显的抑制作用,而PMSF对酶活的抑制作用小,推测KN1菌株产生的是一种金属蛋白酶;经SDS处理后KN1的蛋白酶仍能保持较高的活性。KN1菌株的蛋白酶的最佳发酵条件为37℃培养4天,最佳碳源为玉米粉,最佳氮源为豆饼粉。KN1菌株的蛋白酶是一种耐高温中性蛋白酶,最适作用温度达到75℃,在最适合条件下,酶活性可达1498.84U/mL,具有良好的应用前景。
- 张蕾孙萌刘岳张海予
- 关键词：蛋白酶活性酶学性质发酵条件
- 创伤弧菌鞭毛蛋白单克隆抗体的制备及在食品检测中的应用被引量：2
- 2013年
- 目的制备创伤弧菌鞭毛蛋白单克隆抗体（mAb）并建立双抗夹心ELISA。方法采用差速离心法提取创伤弧菌ATCC1．1758菌株的鞭毛蛋白，并以此为抗原免疫BALB／c小鼠，抗血清效价达到1：32000时，取脾细胞与生长良好的对数期Sp2／0骨髓瘤细胞进行融合。采用杂交瘤技术和ELISA制备并筛选分泌mAb的杂交瘤细胞株，有限稀释法对阳性孔克隆化培养。制备腹水，纯化以得到抗体。结果获得5株持续、稳定分泌抗创伤弧菌鞭毛蛋白mAb的杂交瘤细胞株，命名为VVN0．1～VVN0．5，抗体效价高达1：（2×10^6）。SDS—PAGE结果显示，提取出的鞭毛蛋白相对分子质量（丝）为44000并且纯度较高。采用VVN0．5抗体建立了创伤弧菌双抗夹心ELISA，该方法的检测灵敏度达到10^3CFU／mL菌液，通过采用12株创伤弧菌和130株非创伤弧菌进行特异性实验，12株创伤弧菌呈阳性反应，130株非创伤弧菌呈阴性反应，结果表明VVN0．5抗体具有良好的特异性。在基质添加试验中，通过增菌，最低检出限为2CFU／25g样品。结论成功制备了创伤弧菌鞭毛蛋白单克隆抗体，并将其应用于双抗夹心ELISA，该方法的检测灵敏度达到1×10^3CFU／mL菌液，与所测试的非目标菌没有交叉反应。
- 曾静程晋霞张蕾张琳张海予魏海燕刘雪松曹栋
- 关键词：创伤弧菌鞭毛蛋白单克隆抗体
- 食品中牛奶过敏原成分LAMP检测方法的建立被引量：5
- 2014年
- 目的建立食品过敏原牛奶成分LAMP(loop-mediated isothermal amplification)检测方法,并与实时荧光PCR(real-time PCR)检测方法比对。方法针对牛线粒体细胞色素b(cyt-b)基因设计LAMP引物并建立反应体系,在特异性和灵敏度方面与real-time PCR检测方法比对。结果本研究建立的LAMP方法检测9份不同品牌的牛奶和羊奶及其加工制品,没有出现交叉反应,具有良好的特异性。该方法的检测灵敏度为0.5%,与real-time PCR方法检测灵敏度相当。检测了69份实际样品,检测结果与real-time PCR检测结果一致。结论本研究建立的食品过敏原牛奶成分LAMP检测方法简单经济,检测结果可靠,可有效缩短检测时间,适用于过敏原牛奶成分的检测,具有良好的应用前景。
- 程晋霞曾静马丹魏海燕张海予
- 关键词：牛奶实时荧光PCR
- 扩展青霉拮抗细菌发酵液在苹果保鲜中的应用被引量：5
- 2011年
- 从水果果皮上筛选出2株对扩展青霉有拮抗作用的枯草芽孢杆菌T3与T8,其发酵液在平板上对扩展青霉有较强的抑制作用。将这2株拮抗菌的发酵液应用于苹果的保鲜上,结果表明,拮抗菌T3与T8发酵液能在活体上抑制扩展青霉病斑的扩大,在接种后第6天抑制率分别为51%与46%。还研究了拮抗菌发酵液、扑海因、壳聚糖分别单独使用对贮藏苹果可溶性固形物、抗坏血酸含量、可滴定酸度和失重率的影响,分析比较它们在保鲜中的效果。结果表明,2株拮抗菌的发酵液可使贮藏苹果的可滴定酸度有一定程度的提高,分别高出对照50%与100%,而对其他指标影响不大。而壳聚糖与扑海因都能使贮藏期苹果的抗坏血酸含量保持较高水平,分别高出对照700%与180%,此外壳聚糖与扑海因对降低水果的失重率也有一定的作用,失重率分别比对照低20%和32%,但它们对苹果的可溶性固形物的影响与对照相比并不明显。
- 刘杨张海予
- 关键词：扩展青霉壳聚糖苹果保鲜
- 霍乱弧菌鞭毛蛋白单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA的建立被引量：6
- 2013年
- 目的制备霍乱弧菌鞭毛蛋白单克隆抗体（mAb）、建立双抗体夹心ELISA并初步应用于食品检测。方法采用差速离心法提取霍乱弧菌Vc75菌株的鞭毛蛋白，并以此为抗原免疫BALB／c小鼠，抗血清效价达到1：32000时，取脾细胞与生长良好的对数期Sp2／0骨髓瘤细胞进行融合。多次克隆化培养后获得杂交瘤细胞株并制备腹水，纯化后得到抗体。结果获得6株持续、稳定分泌抗霍乱孤菌鞭毛蛋白mAb的杂交瘤细胞株，命名为VcNo．1～VcNo．6，抗体效价高达1：2×10^6。SDS-PAGE结果显示，提取出的鞭毛蛋白相对分子质量（肘，）为44000并且纯度较高。采用VcNo．6抗体建立了霍乱弧菌双抗体夹心ELISA，该方法的检测灵敏度达到10^3CFU／mL菌液，通过采用100株霍乱弧菌和101株非霍乱弧菌进行特异性实验，100株霍乱弧菌呈阳性反应，101株非霍乱弧菌呈阴性反应，结果表明VcNo．6抗体具有良好的特异性。在基质添加试验中，最低检出限为1CFU／g样品。结论成功制备了霍乱弧菌鞭毛蛋白mAb，并将其应用于双抗体夹心ELISA，该方法的检测灵敏度达到10^3CFU／mL菌液，与所测试的非霍乱弧菌没有交叉反应。
- 程晋霞曾静张蕾张琳张海予刘雪松曹栋
- 关键词：霍乱弧菌鞭毛蛋白单克隆抗体双抗体夹心ELISA
- 海产品中霍乱弧菌免疫磁分离和实时荧光PCR快速检测方法的建立被引量：6
- 2014年
- 目的 采用纳米免疫磁珠（Nano-IMS）分离霍乱弧菌,建立霍乱弧菌实时荧光PCR（Real-time PCR）检测方法.方法 采用霍乱弧菌单克隆抗体,制备霍乱弧菌纳米免疫磁珠（Nano-IMB-Vc）,特异性吸附霍乱弧菌,结合Real-time PCR技术,建立霍乱弧菌快速检测方法.选用15株典型菌株,对Nano-IMB-Vc捕获特异性进行验证;选取102株霍乱弧菌和101株非目标菌,对所建立的Real-time PCR方法进行特异性验证;采用纯菌的灵敏度检测和基质添加实验对所建立方法的灵敏度进行检测,并与食品中霍乱弧菌的检测方法（NMKL No.156）进行比较.结果 Nano-IMB-Vc在菌体浓度为103 CFU/ml水平,对霍乱弧菌的捕获率最高可达70.2％.Nano-IMB-Vc分离结合Real-time PCR技术,在纯培养、无需增菌情况下,检测灵敏度达到5.4×102 CFU/ml;通过102株霍乱弧菌和101株非目标菌的测试,102株霍乱弧菌检测结果均为阳性,其余101株非目标菌检测结果均为阴性,无交叉反应.采用Nano-IMB-Vc分离结合Real-time PCR技术,在食品基质添加试验中,每25 g样品中添加1CFU霍乱弧菌,增菌8h即可检出.结论 Nano-IMB-Vc分离结合Real-time PCR技术,具有良好的特异性,较高的检测灵敏度,适用于霍乱弧菌的快速筛选.
- 程晋霞曾静刘莉魏海燕赵晓娟张西萌张蕾张海予
- 关键词：聚合酶链反应
- 环介导等温扩增方法在食品中沙门菌检测的应用和评价被引量：2
- 2013年
- 目的将环介导等温扩增检测方法应用于食品中沙门菌的检验,并在检测方法特异性、灵敏度等方面与实时荧光PCR和传统检测方法进行比较。方法针对沙门菌属高度保守的fimY基因设计环介导等温扩增检测引物并优化反应体系,在特异性、灵敏度和实际样品检测等方面与实时荧光PCR及传统检测方法比对。结果本研究建立的LAMP方法检测沙门菌93株和非目标菌31株,具有良好的特异性。在纯培养、无需增菌情况下,其检测灵敏度为6.4×102cfu/ml,与实时荧光PCR方法相当。食品基质添加试验中,环介导等温扩增方法检测低限为2 cfu/25 g样品;对45份实际食品样品检测结果表明,该方法实际样品检出率为11.1%,与实时荧光PCR及传统方法检测结果一致。结论本研究建立的沙门菌环介导等温扩增检测方法具有良好的特异性,检测灵敏度与实时荧光PCR相当,适用于沙门菌的快速筛选。
- 张蕾张海予魏海燕张西萌程晋霞曾静
- 关键词：沙门菌环介导等温扩增实时荧光PCR食源性致病菌
- 纳米免疫磁分离-实时荧光聚合酶链式反应快速检测海产品中副溶血性弧菌被引量：8
- 2014年
- 采用副溶血性弧菌单克隆抗体、纳米免疫磁分离技术,结合实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测方法,建立海产品中副溶血性弧菌纳米免疫磁分离-实时荧光PCR检测方法。副溶血性弧菌纳米免疫磁珠在菌体浓度为103 CFU/mL水平时,对副溶血性弧菌的捕获率达到74%。在纯培养、无需增菌情况下,该方法检测灵敏度达到140 CFU/mL;通过134株副溶血性弧菌和74株非目标菌的测试,实时荧光PCR技术具有良好的特异性;在食品基质添加实验中,其检测限为2 CFU/25 g样品,增菌时间缩短到8 h。
- 张蕾曾静魏海燕马丹程晋霞张西萌张海予
- 关键词：副溶血性弧菌
