秦伟
- 作品数：5 被引量：7H指数：2
- 供职机构：江苏大学基础医学与医学技术学院检验医学研究所更多>>
- 发文基金：江苏省卫生厅医学科研项目江苏省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- ULBP3分子在消化道肿瘤病人中的临床意义
- 研究背景:NKG2D是NK细胞表面活化性受体,其配体包括MHC-I类分子相关蛋白A和B(MICA/B)、UL-16结合蛋白(ULBP),MICA/B多存在于恶性血液病细胞表面而ULBP1,ULBP2多表达在实体瘤细胞表面...
- 牟笑秦伟毛朝明
- 关键词：NK肝癌
- 人IL-21 mRNA实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用被引量：1
- 2013年
- 目的:建立检测人白细胞介素-21(interleukin-21,IL-21)mRNA的实时荧光定量PCR(real-time fluorescencequantitative PCR,qRT-PCR)方法。方法:分离人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC),磁珠分选CD4+细胞,经PHA刺激后提取总RNA并逆转录成cDNA。采用qRT-PCR方法检测IL-21 mRNA的表达水平。评价该方法的特异性,应用该方法检测Graves病患者CD4+T细胞中IL-21 mRNA的相对表达水平。结果:建立了人IL-21 mRNA的实时荧光定量PCR检测方法。该法的熔解曲线为单峰,核酸电泳显示为一特异性条带。Graves病患者CD4+T细胞中IL-21 mRNA的相对表达水平明显高于健康对照组(P<0.001)。结论:建立的检测人IL-21 mRNA的实时荧光定量PCR方法灵敏性、特异性好,为进一步临床应用提供了实验基础。
- 朱晨露陈艳红魏衍财秦伟马洁许化溪王胜军
- 关键词：白细胞介素-21实时荧光定量PCRGRAVES病
- 小鼠CCL20 mRNA实时荧光定量PCR检测方法的建立被引量：2
- 2012年
- 目的:建立检测小鼠脂肪组织中趋化因子CCL20(CC chemokine ligand 20)mRNA的实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,qRT-PCR)的方法。方法:分离小鼠脂肪组织细胞,经PMA和离子霉素刺激4 h后收集细胞提取总RNA并逆转录为cDNA。采用qRT-PCR方法检测趋化因子CCL20 mRNA的表达水平。评价该方法的特异性,同时应用该方法检测小鼠脂肪组织中趋化因子CCL20mRNA相对表达水平。结果:建立了小鼠脂肪组织中趋化因子CCL20的SYBR Green实时荧光定量PCR检测方法,结果显示该方法的熔解曲线为单峰,同时核酸电泳显示一条特异性条带。检测结果表明高脂饮食诱导的肥胖小鼠脂肪组织中趋化因子CCL20的相对表达水平明显高于正常饮食对照组(t=3.02,P<0.05)。结论:建立了检测小鼠脂肪组织中趋化因子CCL20 mRNA的实时荧光定量PCR方法,特异性好、灵敏性强,为进一步研究小鼠CCL20的生物学功能提供了实验基础。
- 陈艳红朱晨露魏衍财秦伟田洁袁靖陈娟吴晶晶汤新逸许化溪王胜军
- 关键词：SYBR实时荧光定量PCR
- 小鼠白介素17受体A胞外段的表达、纯化及鉴定
- 2012年
- 目的:分别克隆小鼠白介素17受体A胞外段(mIL-17RAaa32-322)及小鼠IgG2AFc(mIgG2AFc)基因,构建mIL-17RAaa32-322-mIgG2AFc融合蛋白原核表达载体,并在体外表达、纯化及鉴定。方法:利用基因重组技术构建pET32a(+)-mIL-17RAaa32-322-mIgG2AFc原核表达载体,并在E.coli Rosetta中表达mIL-17RAaa32-322-mIgG2AFc融合蛋白,经镍离子螯合层析分离纯化后,用SDS-PAGE电泳和蛋白质印迹法进行鉴定。结果:成功构建pET32a(+)-mIL-17RAaa32-322-mIgG2AFc原核表达载体,获得高效表达的融合蛋白,且蛋白质印迹证实为目的蛋白。结论:获得mIL-17RAaa32-322-mIgG2AFc融合蛋白,为进一步研究其生物学功能奠定基础。
- 魏衍财朱晨露陈艳红秦伟田洁袁靖陈娟吴晶晶汤新逸Samuel Essien Baidoo许化溪王胜军
- 关键词：原核表达纯化
- 人UL16结合蛋白3的原核表达及其多克隆抗体制备被引量：4
- 2012年
- 目的:表达和纯化人UL16结合蛋白3(ULBP3)胞外段融合蛋白,制备兔抗人ULBP3多克隆抗体。方法:利用PCR技术获得人ULBP3分子胞外段的基因编码序列,并将其亚克隆至原核表达载体pQE30,构建出重组表达质粒pQE30-ULBP3(aa30-171)。测序鉴定正确后转化入大肠杆菌感受态细胞M15,经IPTG 30℃诱导4 h后,SDS-PAGE显示融合蛋白(表达产物)以包涵体形式存在。用镍柱对融合蛋白进行纯化,将纯化的蛋白免疫新西兰白兔,采用流式细胞术(FCM)、Western blot法和免疫组化染色对所得多克隆抗体的生物学特性进行鉴定。结果:成功表达及纯化了人ULBP3(aa30-171)重组蛋白。结果显示该多克隆抗体能够识别大肠癌细胞株COLO205表面表达的天然构象ULBP3分子,而且能与结直肠癌组织细胞的ULBP3分子结合。结论:成功构建了原核表达载体pQE30-ULBP3(aa30-171),并获得高纯度的人pQE30-ULBP3(aa30-171)重组蛋白;成功制备了兔抗人ULBP3分子的多克隆抗体。
- 秦伟毛朝明王胜军吴蔚牟笑许化溪包丹霞
- 关键词：NKG2D多克隆抗体
