陈思佳
- 作品数：9 被引量：1H指数：1
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- 哺乳动物细胞表达载体、表达系统、制备方法和应用
- 本发明公开了一种哺乳动物细胞表达载体、表达系统、制备方法和应用，属于基因工程技术领域。该表达载体包含TOP1 MAR序列(GenBank：L23999.1)，通过将外源目的基因插入载体的多克隆位点，能够构建TOP1 MA...
- 贾岩龙郭潇王天云王稳王燕芳陈思佳田政伟徐丹华
- 文献传递
- 重组人白血病抑制因子的原核表达及优化被引量：1
- 2019年
- 目的在大肠杆菌中表达重组人白血病抑制因子(HLIF)蛋白,并探索其高效表达的条件。方法将HLIF重组质粒转化至大肠杆菌BL21,分别给予不同诱导时间(4、8、12、16、20、24 h)、不同浓度大肠杆菌(吸光度值分别为0. 5、0. 6、0. 8、1. 0)、不同诱导温度(20、25、30、37、42℃)、不同浓度诱导剂异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)(0. 1、0. 2、0. 3、0. 4、0. 5 mmol·L-1)、不同浓度乙酸(0. 0、0. 1、0. 2、0. 3、0. 4 mmol·L-1)进行培养,蛋白电泳考马斯亮蓝染色后,采用Image J软件分析HLIF蛋白的相对表达量,观察不同干预条件对HLIF表达的影响。结果不同诱导时间下HLIF蛋白相对表达量比较差异有统计学意义(F=22. 088,P <0. 05),诱导16 h时的HLIF蛋白相对表达量显著高于诱导4、8、12、20、24 h(P <0. 05)。不同浓度(以吸光度值表示)大肠杆菌诱导时HLIF蛋白相对表达量比较差异有统计学意义(F=17. 153,P <0. 05);吸光度值为0. 8时HLIF蛋白相对表达量显著高于吸光度值为0. 5、0. 6时(P <0. 05),吸光度值为1. 0时与吸光度值为0. 8时HLIF蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P> 0. 05)。不同温度诱导时HLIF蛋白相对表达量比较差异有统计学意义(F=18. 053,P <0. 05),25℃时HLIF蛋白相对表达量显著高于20、30、37、42℃时(P <0. 05)。不同浓度诱导剂诱导时HLIF蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(F=1. 181,P> 0. 05)。不同浓度乙酸诱导时HLIF蛋白相对表达量比较差异有统计学意义(F=27. 181,P <0. 05),乙酸浓度为0. 00 mmol·L-1时HLIF蛋白相对表达量显著高于乙酸浓度为0. 1、0. 2、0. 3、0. 4 mmol·L-1时(P <0. 05)。结论成功在大肠杆菌表达了HLIF,并探索出了适合最佳表达的诱导时间、大肠杆菌浓度、诱导温度、诱导剂浓度、乙酸浓度等条件。
- 曹顺杨玉露徐光华陈思佳王天云
- 关键词：原核表达
- 筛选标记对重组CHO细胞转基因表达的影响及分子机制
- 背景由于哺乳动物细胞表达系统具备复杂的翻译后修饰功能,因而广泛应用于重组药物蛋白的生产。其中70%以上的重组药物蛋白由中国仓鼠卵巢细胞（Chinese hamster ovary cells,CHO）表达系统生产。有许多...
- 陈思佳
- 关键词：CHO细胞转基因顺式作用元件启动子
- 文献传递
- 一种三顺反子表达载体、制备方法及应用
- 本发明公开了一种三顺反子表达载体、制备方法及应用，属于基因工程技术领域。三顺反子表达载体包括核基质结合区序列以及由两个内核糖体进入位点序列连接而成的三顺反子序列，三顺反子序列的结构为：启动子-轻链信号肽SP<Sub>L<...
- 王天云贾岩龙倪天军赵春澎徐红彦王喜成陈思佳郭潇
- 文献传递
- 哺乳动物细胞表达载体、表达系统、制备方法和应用
- 本发明公开了一种哺乳动物细胞表达载体、表达系统、制备方法和应用，属于基因工程技术领域。该表达载体包含TOP1 MAR序列(GenBank：L23999.1)，通过将外源目的基因插入载体的多克隆位点，能够构建TOP1 MA...
- 贾岩龙郭潇王天云王稳王燕芳陈思佳田政伟徐丹华
- 双顺反子表达载体、表达系统、制备方法及应用
- 本发明公开了一种双顺反子表达载体、表达系统、制备方法及应用，属于基因工程技术领域。该表达载体包含核基质结合区序列、内核糖体进入位点序列和筛选标记，通过在启动子与IRES序列之间插入目的基因，可构成目的基因‑IRES序列‑...
- 王天云贾岩龙郭潇王稳陈思佳王俐张俊河李琴田政伟徐丹华
- 文献传递
- 一种三顺反子表达载体、制备方法及应用
- 本发明公开了一种三顺反子表达载体、制备方法及应用，属于基因工程技术领域。三顺反子表达载体包括核基质结合区序列以及由两个内核糖体进入位点序列连接而成的三顺反子序列，三顺反子序列的结构为：启动子‑轻链信号肽SP<Sub>L<...
- 王天云贾岩龙倪天军赵春澎徐红彦王喜成陈思佳郭潇
- 文献传递
- 富含GC的DNA片段对中国仓鼠卵巢细胞中转基因表达的影响及其位置效应
- 2017年
- 目的分析富含GC的DNA片段对中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中转基因表达水平的影响及其位置效应。方法人工合成富含GC的DNA片段,将其克隆到表达载体的表达盒的5'、3'端及两端,构建在载体不同位置插入富含GC DNA片段的3个新表达载体(p IRES-G1、p IRES-G2和p IRES-G3),分别转染CHO细胞并用荧光显微镜进行观察;对照载体为p IRES-EGFP。采用G418筛选稳定细胞株,流式细胞术分析增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测其转基因拷贝数。结果成功构建了在载体不同位置含有GC DNA片段的3个载体,瞬时及稳定转染结果显示,在载体表达盒两端及3'端插入富含GC DNA片段能够明显提高EGFP在CHO细胞中的表达水平。与对照载体比较,稳定表达情况下载体表达盒两端及3'端插入富含GC DNA能分别提高转基因表达水平约1.39、1.32倍,而在5'端插入富含GC DNA片断对于提高基因表达水平作用尚不明显。表达盒两端及3'端插入富含GC DNA片段的转基因拷贝数比对照载体提高了约1.32、1.24倍。结论富含GC的DNA片段在CHO细胞提高转基因表达与其在载体上的位置有关,在载体表达盒两端或3'端插入一段富含GC的DNA片段可以提高转基因表达水平。
- 陈思佳赵春澎张俊河王小引王天云
- 关键词：转基因
- 双顺反子表达载体、表达系统、制备方法及应用
- 本发明公开了一种双顺反子表达载体、表达系统、制备方法及应用，属于基因工程技术领域。该表达载体包含核基质结合区序列、内核糖体进入位点序列和筛选标记，通过在启动子与IRES序列之间插入目的基因，可构成目的基因‑IRES序列‑...
- 王天云贾岩龙郭潇王稳陈思佳王俐张俊河李琴田政伟徐丹华
- 文献传递
