王天云
- 作品数：220 被引量：526H指数：11
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- 相关领域：医药卫生生物学文化科学矿业工程更多>>
- 重组CHO细胞中不同启动子对含MAR表达载体转基因表达的影响被引量：1
- 2017年
- 目的分析在重组CHO细胞中不同启动子对含核基质结合区(MAR)表达载体转基因表达的影响。方法 PCR扩增CMV启动子及β-珠蛋白MAR,构建含β-珠蛋白MAR表达载体pCAT1,随后将CMV启动子替代pCAT1上SV40启动子构建CMV启动子驱动的表达载体pCAT2。pCAT1、pCAT2不含MAR的对照载体同时转染CHO细胞,G418筛选稳定转化的细胞株,酶联免疫吸附试验(ELISA)分析氯霉素乙酰转移酶(CAT)基因的表达水平。结果含MAR表达载体转染的细胞CAT酶表达量比不含MAR的pCATG和pCAT3载体转染的细胞高,分别提高2.14倍和1.25倍(P<0.05);而由SV40启动子驱动含MAR表达载体pCAT1转染的细胞CAT酶表达水平明显比由CMV启动子驱动的pCAT2载体高3.26倍(P<0.05)。结论在稳定重组CHO细胞中MAR能够提高转基因的表达水平,SV40启动子与MAR组合其启动效率优于CMV启动子与MAR组合。
- 李琴赵春澎王小引孙秋丽王天云
- 关键词：MAR启动子转基因表达CHO细胞
- 核基质结合区提高报告基因在稳定转化的杜氏盐藻中的表达被引量：7
- 2007年
- 前期的研究从杜氏盐藻(Dunaliella salina)中分离出一核基质结合区(matrix attachment region,MAR)片段---DSM1.实验证实,它在体外能与核基质结合且具有MAR的典型特征.为研究其在转基因盐藻中的作用,构建了RbcS启动子驱动、氯霉素乙酰转移酶(chloramphenicol acetyltransferase,CAT)基因为报告基因及表达盒两侧含DSM1MAR的表达载体.电击法转化盐藻,随机挑选20株稳定转化的盐藻藻株,分析CAT酶活性.结果表明,在稳定转化的盐藻细胞中,MAR能使报告基因CAT的表达水平比对照藻株提高1.5倍,不同藻株之间个体表达的差异性也有所降低.
- 王天云薛乐勋姬祥王亚峰
- 关键词：核基质结合区基因沉默杜氏盐藻
- 杜氏盐藻核基质结合区结合蛋白的表达分析
- 2012年
- 目的研究杜氏盐藻(Dunaliella salina)核基质结合区结合蛋白(matrix attachment region bindingprotein,MBP)基因随盐藻的生长表达变化情况及真核表达。方法利用实时荧光定量PCR检测盐藻中MBP基因的表达变化,构建MBP的cDNA全长序列及N端和C端序列的含有组氨酸标签的真核表达载体,转染CHO细胞,筛选稳定转染株,Western blotting检测融合蛋白表达情况。结果盐藻的MBP基因表达随生长周期变化,MBP及其N端和C端的融合蛋白成功在CHO细胞表达。结论 MBP可能参与盐藻增殖过程中RNA的加工,并为下一步分离真核表达的MBP,研究其功能提供了实验基础。
- 王鹏举王天云王亚峰
- 关键词：杜氏盐藻真核表达
- 哺乳动物细胞组合表达载体、表达系统、制备方法和应用
- 本发明属于基因工程技术领域，公开了一种哺乳动物细胞组合表达载体、表达系统、制备方法和应用，该表达载体上插入有ARE序列、IRES序列、WPRE序列以及筛选标记基因序列，所述ARE序列如SEQ ID NO:1、SEQ ID...
- 王天云林艳王蒙米春柳樊振林倪天军安文琪马超援赵春澎
- 文献传递
- 重组蛋白含MAR高效载体分子组装优化及其应用
- 王天云贾岩龙倪天军郭潇王小引林艳董卫华潘若文马超援蒋涛
- 一、项目背景和意义：
重组蛋白药物是生物医药产业的重要部分，其中70%左右是用中国仓鼠卵巢（CHO）细胞生产的。由于转基因沉默导致的重组蛋白表达水平较低已经成CHO细胞生产重组蛋白药物的瓶颈和“卡脖子”技术。国内动物细...
- 关键词：
- 关键词：基因表达
- 一种三顺反子表达载体、制备方法及应用
- 本发明公开了一种三顺反子表达载体、制备方法及应用，属于基因工程技术领域。三顺反子表达载体包括核基质结合区序列以及由两个内核糖体进入位点序列连接而成的三顺反子序列，三顺反子序列的结构为：启动子-轻链信号肽SP<Sub>L<...
- 王天云贾岩龙倪天军赵春澎徐红彦王喜成陈思佳郭潇
- 文献传递
- 哺乳动物游离表达载体的构建及应用
- 杨瑞董卫华张俊河王芳王天云姚朝阳郭伟云王小引
- 技术原理和指标：附着体载体在宿主细胞中附着于染色体外存在，使转基因持续、高效表达。MAR元件介导的新型附着体载体在哺乳动物细胞体内不整合到宿主的基因组上，以附着于染色体外的形式复制，在有丝分裂期与核基质区结合而稳定附着，...
- 关键词：
- 关键词：哺乳动物基因表达基因治疗
- 用于重组药物蛋白生产的人源化细胞系研究进展被引量：2
- 2018年
- 哺乳动物细胞表达系统由于存在翻译后加工修饰(PTMs)机制,能够产生分子量大、结构复杂的蛋白,是重组药物蛋白生产的优选系统。虽然非人源化的哺乳动物细胞系的PTMs与人源化细胞类似,但仍能进行人源化细胞不存在的其他PTMs,表达药物蛋白存在免疫原性、改变药物代谢动力学等缺点。近年来,人源化的细胞系已经用于治疗重组药物蛋白的生产,此类细胞系的优点在于具备和人源细胞完全一致的PTMs,表达的蛋白活性高、疗效好。目前用于重组药物蛋白生产及临床前研究的人源细胞系主要有HEK293、HT-1080、PER.C6等。本文综述了人源化细胞用于重组药物蛋白的最新进展。
- 李琴王天云王小引郭潇林艳
- 藻蓝蛋白对Hepa1-6细胞及荷瘤小鼠免疫功能影响被引量：3
- 2012年
- 原发性肝癌是严重危害人类健康和生命的疾病,东南亚地区高发,全球每年有31万患者,其中中国有13万患者死于肝癌,占全球肝癌死亡总数的42%。肝癌高发年龄为35～45岁,男性多于女性,男女之比为2～5∶1。中国为肝癌高发区,治疗肝癌主要方法是手术和肝移植,难于被患者接受,且大多数患者不具备手术适应症,如晚期肝癌和肝功能极差患者1〕。
- 刘素芳王天云高燕郝会敏李倩李万里
- 关键词：藻蓝蛋白SFASSFASL
- 重组中国仓鼠卵巢细胞表达系统高效表达载体研究进展被引量：2
- 2016年
- 生物制药是21世纪高科技产业,治疗性重组蛋白的生产是生物制药的重要部分。宿主细胞以中国仓鼠卵巢(CHO)细胞用途最为广泛,近70%宿主细胞是用CHO细胞表达系统生产的。影响外源蛋白在CHO细胞中表达的因素很多,其中表达载体是重要因素之一。构建重组CHO细胞表达系统高效表达载体可以利用核基质附着区、泛在染色质开放元件,构建特定位点重组载体系统,以及选择合适的内部核糖体进入位点及弱化筛选标记等实现。CHO细胞表达高效载体构建涉及多个因素,需要进行不同元件的优化,才可达到高效表达。
- 孙秋丽王天云
- 关键词：中国仓鼠卵巢细胞核基质附着区内部核糖体进入位点
