李长龙
- 作品数：5 被引量：24H指数：3
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项国家科技部农业科技成果转化资金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 猪A群轮状病毒VP6蛋白单克隆抗体的制备及抗原表位鉴定
- 2014年
- 为制备猪A群轮状病毒(RV)VP6蛋白的单克隆抗体(MAb)及鉴定其抗原表位,本研究以原核表达、纯化的重组VP6蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与SP2/0细胞进行融合,r VP6-GST为包被抗原,通过间接ELISA筛选出一株稳定分泌抗VP6蛋白的MAb杂交瘤细胞株(1F4)。MAb鉴定结果显示其抗体亚类为Ig G1型,轻链为κ链;细胞上清液及腹水效价分别为1∶12 800和1∶106。Western blot和间接免疫荧光结果显示该MAb能够与天然的VP6蛋白反应。应用肽扫描技术鉴定显示该MAb对应抗原表位核心序列为134DYIENWNLQNR144。该MAb的制备为进一步研究VP6蛋白功能和建立RV检测方法奠定基础。
- 韩斅陈建飞时洪艳张鑫石达迟延彬李长龙冯力
- 关键词：A群轮状病毒单克隆抗体抗原表位
- 抗猪传染性胃肠炎病毒N蛋白单克隆抗体的制备及抗原表位的鉴定被引量：6
- 2014年
- 为制备抗猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)N蛋白的单克隆抗体(MAb)及鉴定其抗原表位,本研究利用原核表达系统表达重组N蛋白,纯化后免疫BALB/c小鼠,将其脾细胞与骨髓瘤细胞融合,通过间接ELISA方法筛选阳性克隆,经4次细胞克隆纯化后,获得两株稳定分泌抗重组TGEV N蛋白的MAb,命名为3D7和5E8。通过western blot和间接免疫荧光试验对MAb的免疫活性和特异性进行鉴定,结果表明两株MAb均能够与TGEV全病毒反应并且特异性良好。利用合成的多肽对N蛋白抗原表位进行鉴定,初步确定MAb 3D7识别的表位为241AGKGDVTRFYGARSSSANFG260;5E8为184NKKDDSVEQAVLAALKKLGV203。本研究制备了两株MAb并对其表位进行鉴定,为TGEV检测方法的建立和N蛋白功能的分析奠定了基础。
- 赵鑫张鑫时红艳陈建飞迟延彬韩斆李长龙刘宁胡桂学冯力
- 关键词：猪传染性胃肠炎病毒单克隆抗体抗原表位
- 猪流行性腹泻病毒野毒株/疫苗株RT-PCR鉴别诊断方法的建立被引量：15
- 2014年
- 开放阅读框3（Open reading frame 3,ORF3）是猪流行性腹泻病毒（PEDV）基因组中的惟一辅助基因。前期研究表明,PEDV疫苗株的ORF3在245~293位缺失49个核苷酸。在ORF3缺失区域两端设计合成引物建立反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）可以对PEDV野毒株和疫苗株进行鉴别诊断,野毒株扩增产物为319 bp,疫苗株扩增产物为270 bp。用该鉴别诊断方法对猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒、猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒和猪繁殖和呼吸综合征病毒的cDNA进行扩增均无特异性条带,说明该方法特异性强。现地病料的检测结果表明,该鉴别诊断方法能够区分PEDV野毒和疫苗株,而且可以排除其他病毒的影响,有助于减少免疫猪被淘汰的可能,降低经济损失。
- 李长龙陈建飞张鑫时洪艳冯力
- 关键词：猪流行性腹泻病毒ORF3RT-PCR
- VeroE6细胞酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定
- 2014年
- 为寻找与猪流行性腹泻病毒（porcineepidemicdiarrheavirus，PEDV）相互作用的VeroE6细胞蛋白，深入研究病毒感染机制，本试验建立了一个VeroE6细胞酵母杂交cDNA文库。采用Trizol试剂从培养的VeroE6细胞中提取细胞总RNA，通过SMART技术合成双链cDNA，并利用同源重组的方法构建VeroE6细胞的酵母cDNA文库。结果显示，文库滴度为9．7×10^8 CFU／mL，插入的双链cDNA片段大小为0．5～3kb，平均长度约为1．6kb，文库重组率为87％，此文库可以用来筛选与病毒相互作用的VeroE6蛋白。该文库的构建为发现和研究与PEDV结构蛋白相互作用的宿主细胞蛋白奠定基础。
- 迟延彬石达朱庆贺陈建飞时洪艳张鑫李长龙韩斅刘宁赵鑫冯力
- 关键词：猪流行性腹泻病毒VEROCDNA文库SMART技术酵母双杂交
- A群猪轮状病毒VP7蛋白单克隆抗体的制备及鉴定被引量：4
- 2014年
- 试验旨在制备A群G11血清型猪轮状病毒(porcine rotavirus,PoRV)VP7蛋白的单克隆抗体,并鉴定其免疫学特性。将A群G11血清型PoRVVP7基因克隆至pGEX-6P-1载体,然后转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,IPTG诱导表达GST-VP7融合蛋白。分离纯化融合蛋白GST-VP7并免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,利用间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞并进行有限稀释法克隆化筛选。经3次筛选,最终得到1株能与GST-VP7蛋白反应的特异性、稳定分泌抗体的阳性细胞克隆。Western blotting鉴定结果显示该单克隆抗体具有良好的免疫原性及特异性;MTT法中和试验结果显示其具有中和活性;分泌的单克隆抗体亚型为IgG2b。本试验结果表明A群PoRV VP7蛋白在大肠杆菌中成功表达且制备了单克隆抗体,可用于PoRV VP7蛋白结构和功能的研究,也为猪轮状病毒病的预防、诊断和治疗等研究奠定基础。
- 迟延彬陈建飞时洪艳张鑫石达李长龙韩斅陈洪岩冯力
- 关键词：VP7基因单克隆抗体
