石达
- 作品数：49 被引量：237H指数：7
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金黑龙江省自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 宿主蛋白NPM1、EB3和HSP47对PEDV复制的影响
- 一般来说病毒感染后，宿主对病毒侵染最初的应答是天然免疫应答，如细胞凋亡、炎性反应和抗病毒免疫分子分泌等，通过这些免疫机制，宿主可以拮抗病毒的入侵，或者为宿主建立获得性免疫应答赢得时间从而最终清除入侵的病毒。但是，很多病毒...
- 石达
- 关键词：热休克蛋白47
- 文献传递
- 猪轮状病毒(G9型)TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立被引量：1
- 2015年
- 为建立灵敏、特异的G9型猪轮状病毒(Po RV)Taq Man的荧光定量RT-PCR检测方法,本研究根据Gen Bank中登录的G9型Po RV NMTL株的VP7基因保守区域设计一条特异性引物和探针。以104TCID50的病毒液所提取的总RNA进行10倍系列稀释作为标准品,通过对反应条件进行优化,建立了检测G9型Po RV的Taq Man荧光定量RT-PCR检测方法。结果显示,该方法的相关系数R2=0.991,对其它常见的Po RV(G5)、猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻、猪繁殖与呼吸综合征和猪圆环病毒2型等猪病病原检测均为阴性,具有良好的特异性;该方法最低可以检测到的病毒滴度为10-3TCID50,比普通RT-PCR方法灵敏度高约1 000倍;组内和组间变异系数均小于0.87%,稳定性高,重复性好。对疑似感染Po RV的45份临床病料样品进行检测,结果表明,该方法阳性率(64.4%)高于普通RT-PCR(44.4%),两者总符合率为80%。本研究建立的方法为Po RV的流行病学调查和早期诊断奠定基础。
- 王宇飞时洪艳朱向东陈建飞袁婧张鑫石达刘建波王潇博高晶冯力
- 关键词：轮状病毒VP7基因
- Vero细胞nucleolin和fibrillarin基因的克隆及序列分析
- 2012年
- 为克隆及分析Vero细胞的nucleolin和fibrillarin基因,本研究根据人类的相关基因设计两对引物,从Vero E6细胞中扩增nucleolin和fibrillarin基因。测序结果显示nucleolin基因序列长度为2 139 bp,编码712个氨基酸;fibrillarin基因序列长度为969 bp,编码322个氨基酸。与GenBank中登录的人类相应序列相似性高达97%,处于同一进化分支,表明该基因具有种属特异性并且保守性很高;同时利用软件对nucleolin和fibrillarin预测蛋白进行了生物信息学分析,从而为研究冠状病毒核蛋白与核仁蛋白相互作用奠定了基础。
- 石达陈建飞时红艳王洪峰张鑫刘孝珍张莎刘随心王璐冯力
- 关键词：核仁素纤维蛋白克隆
- 猪流行性腹泻病毒N蛋白与Vero E6核仁蛋白Fibrillarin的亚细胞定位分析被引量：2
- 2011年
- 为鉴定猪流行性腹泻病毒(PEDV)核衣壳蛋白(N)与Vero E6细胞核仁fibrillarin蛋白的亚细胞定位的特征。本实验参照GenBank中人细胞fibrillarin基因(M59849.1)序列,设计并合成特异性引物,利用RT-PCR方法扩增了Vero E6细胞的fibrillarin基因,并将其克隆于真核表达载体pDsRed2-N1中,构建重组质粒pDsRed-Fib。将pDsRed-Fib与本实验室构建的含有PEDV N基因的重组质粒pAcGFP-N,共转染Vero E6细胞。Western blot结果表明fibrillarin及N融合蛋白在转染的Vero E6细胞中均获得表达;利用共聚焦显微镜观察显示在共转染VeroE6细胞中PEDV N蛋白与Vero E6细胞核仁中的fibrillarin发生共定位。该结果为进一步研究PEDV和核仁蛋白相互作用奠定基础。
- 石达陈建飞时洪艳张志榜冯力
- 关键词：猪流行性腹泻病毒核衣壳蛋白共定位
- 宿主蛋白EB3和HSP47对PEDV复制的影晌
- 为了筛选与PEDV相互作用的宿主蛋白，本研究应用酵母双杂交系统和GST-pull down技术分别发现PEDVM蛋白和宿主蛋白EB3以及非结构蛋白NSP7和宿主蛋白HSP47之间存在相互作用。发现NSP7蛋白定位在宿主细...
- 石达陈建飞时洪艳张鑫冯力
- 关键词：猪流行性腹泻病毒病毒复制宿主蛋白分子机制
- ST细胞酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定被引量：1
- 2017年
- 为了筛选与猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)结构蛋白VP2相互作用的宿主蛋白,深入研究病毒入侵及致病的分子机制,本试验建立了ST细胞酵母双杂交cDNA文库。采用RNeasy Min Kit提取ST细胞的总RNA,反转录合成cDNA第一链之后,通过SMART技术合成了双链cDNA,并利用同源重组的方法,构建了ST细胞的酵母cDNA文库。结果显示,文库滴度为8.1×108 CFU/mL,插入的双链cDNA片段大小为250~1 000bp,平均大小约为500bp,文库的重组率为96%。此文库可用于筛选与病毒相互作用的ST细胞宿主蛋白,为进一步阐明病毒的致病机制奠定了基础。
- 王鑫石达董慧曹丽艳陈建飞时洪艳张鑫冯力
- 关键词：猪细小病毒酵母双杂交ST细胞CDNA文库
- 猪急性腹泻综合征冠状病毒RT-LAMP快速检测方法的建立与应用被引量：4
- 2021年
- 为建立简捷、灵敏的猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)检测方法,本研究针对SADS-CoV N基因片段保守区域设计特异性的反转录环介导等温扩增(RT-LAMP)引物,经条件优化后显示建立的SADS-CoV RTLAMP检测方法最佳反应条件为64℃,50 min,初步建立SADS-CoV的RT-LAMP快速检测方法。利用该方法检测SADS-CoV、猪流行性腹泻性病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)、猪轮状病毒(PoRV)和猪肠道病毒9型(PEV9),评估其特异性,结果显示除SADS-CoV外,该方法与其它病原无交叉反应,特异性较强;将病毒RNA 10倍倍比稀释后作为模板,利用该RT-LAMP与普通RT-PCR同时检测,结果显示,RTLAMP方法比普通RT-PCR方法的敏感性高103倍,敏感性较高。以同一批次或不同批次的SADS-CoV核酸为模板进行RT-LAMP试验,结果显示RT-LAMP批内批间均可稳定的检出阳性样本,表明该方法具有良好的重复性和稳定性。对经口服感染SADS-CoV和未感染仔猪的临床样本进行检测,结果显示RT-LAMP与普通RT-PCR检测结果高度一致。本实验首次建立的SADS-CoV可视化RT-LAMP检测方法具有特异性强、敏感性高,操作简便、快速和高通量检测的优点,为临床SADS-CoV感染的快速诊断和综合防控提供检测手段。
- 韩郁茹石达张记宇时洪艳陈建飞张鑫刘建波冯力
- 关键词：N基因
- 猪氨基肽酶N不是猪德尔塔冠状病毒入侵宿主细胞的受体被引量：8
- 2017年
- 猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)是一种新出现的冠状病毒,能够引起猪只发生呕吐和水样腹泻,临床症状与猪流行性腹泻(PED)和猪传染性胃肠炎(TGE)相似。相关研究表明猪氨基肽酶N(pAPN)是PED病毒(PEDV)和TGE病毒(TGEV)入侵宿主细胞的功能性受体。为研究pAPN是否是PDCoV入侵宿主细胞的受体,本研究以TGEV为指示病毒,通过BHK-pAPN细胞感染试验、pAPNRNA干扰试验、ST细胞过表达pAPN试验、可溶性pAPN阻断试验,发现BHK-pAPN细胞是PDCoV非易感细胞,在易感细胞ST上沉默和过表达pAPN对PDCoV的增殖并无影响,可溶性pAPN不能阻止PDCoV感染ST细胞。这些研究结果表明pAPN不是PDCoV入侵宿主细胞的受体,而且对PDCoV的增殖无影响。
- 卢曼曼张家林王洪峰时洪艳张鑫袁婧石达刘建波陈建飞冯力
- 关键词：受体
- 宿主蛋白NPM1、EB3和HSP47对PEDV复制影响
- 一般来说病毒感染后,宿主对病毒侵染最初的应答是天然免疫应答,如细胞凋亡、炎性反应和抗病毒免疫分子分泌等,通过这些免疫机制,宿主可以拮抗病毒的入侵,或者为宿主建立获得性免疫应答赢得时间从而最终清除入侵的病毒。但是,很多病毒...
- 石达
- 关键词：猪流行性腹泻病毒病毒复制
- 猪丁型冠状病毒S1-CTD相互作用宿主蛋白的筛选和鉴定
- 2022年
- 猪丁型冠状病毒纤突蛋白S1亚基C端结合域(S1-CTD)是诱导中和抗体产生的主要区域,为研究与其相互作用的宿主蛋白,采用HEK-293T真核表达系统表达并纯化了S1-CTD,提取了猪回肠上皮细胞膜蛋白,通过免疫共沉淀筛选了可能与S1-CTD相互作用的蛋白并进行质谱分析,发现32个疑似相互作用的宿主蛋白。构建其中可能与S1-CTD互作的蛋白KIF1 binding protein(KIFBP)的真核表达质粒,通过免疫共沉淀和激光共聚焦验证上述宿主蛋白与S1-CTD是否存在相互作用,结果表明KIFBP和S1-CTD之间存在相互作用,共同转染时在细胞质共定位。进一步研究表明,过表达KIFBP能够有效降低病毒RNA水平和病毒滴度,其中mRNA水平降低了约70%,病毒滴度降低了10^(1.6)TCID_(50)。综上,本研究筛选并鉴定出一种与PDCoV S1-CTD相互作用的宿主蛋白KIFBP,为了解PDCoV的致病机制提供了理论基础。
- 汤荣锋范前进郭龙军张鑫石达时洪艳陈建飞冯力
- 关键词：相互作用
