赵博
- 作品数：5 被引量：4H指数：1
- 供职机构：秦皇岛市海港医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金天津市应用基础与前沿技术研究计划天津市应用基础与前沿技术研究计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- UCH-L1基因敲除对低压低氧小鼠海马α-突触核蛋白表达的影响
- 目的明确低压低氧环境下UCH-L1对小鼠海马中α-突触核蛋白(α-synuclein,α-Syn)表达的调控作用。方法采用杂合子小鼠雌雄交配的方式获得UCH-L1基因敲除纯合子(UCH-L1-/-)小鼠;将野生型小鼠(W...
- 赵博武磊张志清王天辉周学思刘洪涛刘晓华
- 关键词：低压低氧Α-突触核蛋白基因敲除
- 文献传递
- 泛素C端水解酶L1的RNA干扰载体的构建及效果评价
- 2013年
- 目的:获得抑制效果好的泛素C端水解酶L1(UCH-L1)基因小干扰RNA(siRNA)干扰载体。方法:根据Gen Bank中大鼠UCH-L1基因序列设计并合成4对siRNA寡核苷酸序列,将4对寡核苷酸序列退火成双链后分别插入siRNA表达载体pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR中构建4个siRNA表达质粒,测序鉴定后将4个siRNA表达质粒分别转染HEK293细胞,利用Western印迹和qPCR方法检测干扰效果;将干扰效果最好的质粒包装成腺病毒,感染大鼠血管平滑肌细胞(VSMC),并采用TNFα干预诱导UCH-L1表达升高,Western印迹验证干扰效果。结果:测序分析证实4对siRNA寡核苷酸序列分别插入siRNA表达载体pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR;qPCR检测与Western印迹均表明第3号siRNA表达载体对UCH-L1表达的抑制程度最高,将其包装成腺病毒并转染VSMC能显著抑制TNFα诱导的UCH-L1表达升高。结论:构建并筛选出干扰效果好的UCH-L1 siRNA干扰载体。
- 赵博刘晓华段梦张志清冷雪王立群武磊段瑞峰王广增张艳淑
- 关键词：RNA干扰HEK293细胞
- UCH-L1对急性低压低氧小鼠海马中α-突触核蛋白表达水平的调控作用被引量：1
- 2015年
- 目的探讨急性低压低氧条件下UCH-L1基因敲除对小鼠海马中α-突触核蛋白(α-Syn)表达水平的影响及其机制,为治疗α-Syn蛋白相关的神经系统疾病提供依据。方法采用UCH-L1基因杂合子(UCH-L1^(+/-))小鼠雌雄交配的方式获得UCH-L1基因敲除纯合子(UCHL1^(-/-))小鼠和野生型小鼠(UCH-L1^(+/+)),PCR法鉴定小鼠的基因型。将UCH-L1^(+/+)小鼠和UCH-L1^(-/-)小鼠放入低压氧舱模拟海拔8000 m高度,持续低氧8 h,建立急性低压低氧模型。采用Western Blot法检测小鼠海马中UCH-L1、α-突触核蛋白及LC3蛋白表达水平的变化,观察UCH-L1基因敲除对α-突触核蛋白表达水平及其相关细胞自噬降解通路的影响。结果与对照组(0.702±0.121)相比,急性低压低氧可诱导野生型小鼠海马中α-突触核蛋白表达水平(1.310±0.096)显著升高(P<0.05),LC3Ⅱ/Ⅰ的比值轻度升高,而对UCH-L1蛋白的表达水平没有影响。当敲除UCH-L1基因的小鼠经急性低压低氧处理后,小鼠海马中α-突触核蛋白表达水平(0.952±0.093)明显低于野生型对照组(1.490±0.074)(P<0.05),同时LC3Ⅱ/Ⅰ的比值也显著升高(P<0.05)。结论UCH-L1基因敲除降低了急性低压低氧诱导的α-突触核蛋白表达水平升高,其机制之一可能与小鼠在急性低压低氧时因敲除UCH-L1基因而进一步促进细胞自噬通路的活化有关。
- 武磊田蕾赵博张志清李康杲修杰周学思刘晓华
- 关键词：低压低氧Α-突触核蛋白基因敲除
- UCH-L1基因敲除对低压低氧小鼠海马α-突触核蛋白表达的影响
- ：明确低压低氧环境下下UCH-L1对小鼠海马中α-突触核蛋白(α-synuclein,α-Syn)表达的调控作用. 方法：采用杂合子小鼠雌雄交配的方式获得UCH-L1基因敲除纯合子(UCH-L1-/-)小鼠;将野生...
- 赵博武磊张志清王天辉周学思刘洪涛刘晓华
- 关键词：海马组织Α-突触核蛋白基因敲除
- UCH-L1基因敲除小鼠的饲养、繁殖及鉴定被引量：3
- 2013年
- 目的饲养、繁殖和鉴定泛素羧基末端水解酶L1(UCH-L1)基因敲除小鼠,获得UCH-L1基因敲除纯合子小鼠,为深入研究UCH-L1的生物学功能奠定基础。方法从美国购进的UCH-L1基因敲除小鼠经适应性饲养1周后,将1只雌性杂合子和1只雄性杂合子小鼠合笼饲养并繁殖,剪取子代小鼠尾尖部0.5 cm组织,提取基因组DNA,PCR方法鉴定其基因型。雄性杂合子与雌性杂合子交配生产后代中,野生型和UCH-L1基因敲除纯合子小鼠用于后续的生物学功能研究;杂合子小鼠用于繁殖。观察UCH-L1基因敲除纯合子小鼠的表型变化,并利用免疫印迹法验证UCH-L1基因敲除的效果。结果小鼠成功繁殖后,利用杂合子交配共生产370只小鼠,其中UCH-L1+/+占34.1%、UCH-L1+/-占50.5%、UCH-L1-/-占15.4%,成功获得UCH-L1基因敲除纯合子小鼠,并建立了饲养、繁殖和鉴定方法。结论采用雌性和雄性UCH-L1基因敲除杂合子小鼠交配,不仅可以获得UCH-L1基因敲除纯合子小鼠,而且有利于长期饲养与繁殖。
- 武磊赵博张志清杲修杰冷雪刘晓华
- 关键词：基因敲除小鼠基因型鉴定
