吴勇
- 作品数:4 被引量:2H指数:1
- 供职机构:蚌埠医学院第二附属医院更多>>
- 发文基金:安徽省自然科学基金更多>>
- 相关领域:医药卫生生物学更多>>
- 野生型及c.454C>T突变型人血管内皮生长因子A基因重组真核表达载体的体外表达
- 2015年
- 目的:探讨野生型和c.454C>T突变型人血管内皮生长因子A(VEGFA)基因重组真核表达载体(p EGFP-VEGFA)体外表达有无差异。方法:用脂质体法将野生型和突变型p EGFP-VEGFA转染人胚胎肾细胞(HEK293T),采用荧光显微镜观察重组载体VEGFA和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的融合蛋白的表达,以实时荧光定量PCR法检测VEGFA mRNA的表达。结果:在经转染的HEK293T细胞内观察到绿色荧光,转染后48 h突变型p EGFP-VEGFA转染组荧光强度低于野生型p EGFPVEGFA转染组。突变型p EGFP-VEGFA转染组VEGFA mRNA表达明显低于野生型p EGFP-VEGFA转染组(P<0.01)。结论:在HEK293T细胞中,初步表明VEGFA突变体导致VEGFA mRNA和蛋白的表达水平均下调,为进一步研究VEGFA c.454C>T突变体在先天性左心室流出道病变发生中的作用奠定了基础。
- 吴勇刘学刚赵武徐家丽郭嘉诚李慧敏丁周志王亚明宋伟
- 关键词:血管内皮生长因子A突变实时荧光定量聚合酶链反应
- 野生型及突变型人血管内皮生长因子A真核表达载体的构建与鉴定被引量:1
- 2013年
- 目的:构建人野生型和c.454C>T突变型血管内皮生长因子A(VEGFA)真核表达载体。方法:采用反转录聚合酶链反应扩增人VEGFA基因,用限制性核酸内切酶BglⅡ和SalⅠ双酶切后连接真核表达载体pEGFP-N1,构建野生型VEGFA真核表达载体(野生型pEGFP-VEGFA),通过双酶切和测序进行鉴定。采用定点诱变PCR技术构建c.454C>T突变型人VEGFA真核表达载体(突变型pEGFP-VEGFA),同样通过双酶切和测序进行鉴定。结果:野生型和突变型pEGFP-VEGFA被双酶切为4 697 bp和1 251 bp两条条带。测序结果证实野生型pEGFP-VEGFA VEGFA序列与GenBank公布的VEGFA mRNA序列完全一致,突变型pEGFP-VEGFA除第454位碱基C被T替代以外,其余序列与野生型完全一致。结论:成功构建了野生型和突变型pEGFP-VEGFA,为下一步研究VEGFA基因功能提供参考。
- 吴勇刘学刚郭嘉诚李慧敏宋伟丁周志王亚明赵武徐家丽
- 关键词:分子遗传学血管内皮生长因子A重叠延伸PCR定点突变
- 先天性左室流出道梗阻遗传学研究进展及其临床意义
- 2012年
- 左室流出道梗阻(LVOTO)是一类常见的先天性心脏病,包括从解剖左心室流出道一直延伸到降主动脉弓的一组狭窄性病变。研究表明,非综合征LVOTO以寡基因遗传的可能性最大。对LVOTO相关致病基因和候选基因的深入研究使得人们有望对LVOTO实施产前基因诊断、疾病筛查乃至早期干预和基因治疗。
- 吴勇赵武徐家丽
- 关键词:左室流出道梗阻遗传学基因突变
- VEGFA基因重组真核表达载体的构建与表达被引量:1
- 2013年
- 目的构建VEGFA基因重组真核表达载体pEGFP-VEGFA,并检测其在人胚胎肾细胞(HEK293T)中的表达。方法以人脐血单核细胞的RNA为模板,采用RT-PCR技术扩增VEGFA基因,并将其定向插入真核表达载体pEGFP-Nl中,构建重组真核表达载体pEGFP-VEGFA。经限制性核酸内切酶BglII和SalI酶切和DNA测序鉴定后,用脂质体法将pEGFP-VEGFA转染HEK293T细胞,转染后24 h和48 h采用荧光显微镜观察pEGFP-VEGFA的表达。结果 pEGFP-VEGFA被双酶切为4 697 bp和1 251 bp两条条带,测序结果证实VEGFA序列与GenBank公布的VEGFA mRNA序列完全一致。在经转染的HEK293T细胞内观察到较强的绿色荧光,表明pEGFP-VEGFA成功转染HEK293T细胞,并在其中得到了表达。结论成功构建重组真核表达载体pEGFP-VEGFA,为进一步研究VEGFA基因的生物学功能奠定了基础。
- 吴勇刘学刚郭嘉诚李慧敏丁周志王亚明宋伟徐家丽赵武
- 关键词:血管内皮生长因子A基因