杜杰
- 作品数：3 被引量：6H指数：2
- 供职机构：苏州大学医学部基础医学与生物科学学院更多>>
- 发文基金：国家现代农业产业技术体系建设项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 家蚕蜕皮激素受体基因EcR-A的启动子活性区域分析
- 2014年
- 昆虫蜕皮激素(20-羟基蜕皮酮)与蜕皮激素受体(EcR)和超气门蛋白(USP)相互作用启动蜕皮级联反应过程,由EcR和USP组成的复合物是蜕皮激素的作用靶标。为研究家蚕EcR-A基因(Bm EcR-A)的转录调控机制,利用双荧光素酶报告系统和Bac-to-Bac表达系统制备含5'端长度不同Bm EcR-A基因启动子片段的重组杆状病毒,分别将重组杆状病毒感染家蚕后检测启动子的活性。结果表明,在Bm EcR-A启动子的-637^-518 bp和-278^-177 bp区域存在正调控元件,并且能被0.002 g/L 20E诱导。通过构建含5'端长度不同Bm EcR-A启动子片段的荧光素酶报告质粒,在细胞水平上进一步分析Bm EcR-A启动子活性区域,结果显示:在-637^-612 bp和-278^-177 bp区域包含Bm EcR-A基因启动子转录调控必需的重要调控元件;当删除-197^-177 bp区域后,启动子活性明显增强,推测在该区域可能含有一个转录抑制因子结合位点。研究结果提示:上述启动子区域包含有转录调控元件的结合位点,是进一步研究Bm EcR-A启动子核心区域的重要线索。
- 杜杰黄明霞刘云垒赵国栋卫正国沈卫德
- 关键词：家蚕启动子活性
- 家蚕蜕皮激素受体和超气门蛋白基因的诱导表达模式及蜕皮激素响应元件核心保守区的识别被引量：2
- 2016年
- 核受体基因家族是介导昆虫蜕皮激素(20E)作用的关键信号分子。为了研究家蚕丝腺中核受体异源二聚体编码基因——蜕皮激素受体基因Bm EcR和超气门蛋白基因Bm USP的表达模式,应用实时荧光定量PCR技术检测家蚕5龄幼虫正常状态下和用2×10^(-3)μg/μL蜕皮激素处理后Bm EcR与Bm USP在丝腺组织中的表达变化。结果表明,20E处理后,Bm EcRA、Bm EcR-B1和Bm USP在中、后部丝腺的表达量与对照组相比均有不同程度增加,说明20E能够促进Bm EcR-A、Bm EcR-B1和Bm USP基因的表达;但中部丝腺与后部丝腺Bm EcR-A、Bm EcR-B1和Bm USP基因的表达变化趋势不同。利用等温滴定量热技术(ITC)获得的家蚕蜕皮激素受体结构域蛋白Bm EcR-B1D与蜕皮激素响应元件Bm E75A-EcRE及其缺失突变体相互作用的亲和力常数(K)、反应热(ΔH)和熵(ΔS),显示了Bm EcR-B1D蛋白能够与Bm E75A-EcRE进行结合,并发现Bm E75A-EcRE的核心保守区为编码序列TCTTC,推测该区域有可能是Bm EcR-B1D蛋白结合在Bm E75A-EcRE上的精确位点。
- 刘云垒杜杰赵晓明苏琳瑛卫正国李兵虞晓华沈卫德
- 关键词：家蚕实时荧光定量PCR
- 家蚕蜕皮激素受体基因EcR-B1的启动子调控区域活性检测被引量：5
- 2014年
- 昆虫蜕皮激素通过与蜕皮激素受体(EcR)和超气门蛋白(USP)形成的异源二聚体相互作用,起始包括转录因子表达在内的蜕皮级联反应,引起昆虫蜕皮。为了探究家蚕蜕皮激素受体基因EcR-B1(BmEcR-B1)表达的调控机制,利用双荧光素酶报告系统和Bac-to-Bac表达系统检测家蚕幼虫经蜕皮激素诱导后,脂肪体、马氏管、中肠组织内不同缺失片段的BmEcR-B1启动子活性。对各组织样品的检测结果均证明:BmEcR-B1启动子-138^-11 bp之间存在正调控元件,并且其活性能被蜕皮激素诱导。在细胞水平上进一步分析BmEcR-B1启动子调控区域,结果显示在-138^-108 bp区域包含的调控元件对于BmEcR-B1启动子的转录调控是必需的,序列分析显示这一区域包含有畸形基因编码蛋白Dfd和热休克转录因子(HSF)2个转录调控元件的结合位点。研究结果为探索BmEcR-B1在家蚕变态发育中的转录调控机制提供了有益线索。
- 黄明霞杜杰刘云垒赵国栋卫正国沈卫德
- 关键词：家蚕启动子转录调控
