赵爱华
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
- 供职机构：军事医学科学院野战输血研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 微小RNA miR-125b真核表达载体的构建及其对细胞增殖的影响被引量：1
- 2010年
- 目的:构建微小RNA125b(miR-125b)真核表达载体,研究其过表达后对细胞增殖的影响。方法:以pcDNA3.1(-)-myc-his载体为模板,PCR扩增CMV启动子,克隆入pHRS-1cla-EGFP慢病毒载体,构建pHRS-1cla-CMV-EGFP载体;以从人全血中提取的基因组DNA为模板,PCR扩增pri-miR-125b序列,将其克隆到pHRS-1cla-CMV-EGFP载体中,构建pHRS-1cla-miR125b-CMV-EGFP慢病毒表达载体;将pHRS-1cla-miR125b-CMV-EGFP表达载体瞬时转染入293FT细胞,用实时定量PCR技术对miR-125b在转录水平的表达进行检测,用MTT及Brdu法检测miR-125b过表达后对293FT细胞增殖的影响。结果:构建的pHRS-1cla-miR125b-CMV-EGFP真核表达载体经质粒酶切和测序鉴定正确,转染细胞后72h经实时定量PCR检测,成熟miR-125b表达上调约750倍(P<0.01),说明其能有效高表达,MTT及Brdu法检测显示细胞增殖受到明显抑制(P<0.01)。结论:构建了pHRS-1cla-miR-125b-CMV-EGFP慢病毒真核表达载体,转染293FT细胞后能高效表达成熟miR-125b,同时证明过表达miR-125b能使细胞的增殖受到非常明显的抑制。
- 曾泉谢小燕赵爱华王静雪陈琳岳文裴雪涛
- 关键词：微小RNA真核表达载体细胞增殖
