曲璟秋
- 作品数：2 被引量：11H指数：2
- 供职机构：中国科学院微生物研究所更多>>
- 发文基金：国家重点实验室开放基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 应用基因敲除快速构建大肠杆菌突变体改造脂肪酸代谢途径被引量：8
- 2013年
- 【目的】基因敲除技术是研究基因功能的重要手段。我们试图建立一种快速、高效的大肠杆菌基因敲除方法。【方法】利用大肠杆菌(Escherichia coli)BW25113单基因缺失体Keio文库,将经典的Red同源重组技术与P1噬菌体转导技术相结合,对E.coli MG1655脂肪酸代谢基因进行快速敲除。【结果】获得了大肠杆菌β-氧化途径的缺失菌株△fadD、△fadE和△fadD-△fadE;脂肪酸合成途径缺失菌株△fabH、△fabF和△fabH-△fabF。敲除fadD和fadE对生长情况没有影响;敲除fabH后,生长速度明显减慢;敲除fabF对生长几乎没有影响。FadD、FadE及双敲缺失体的脂肪酸含量18.2 mg/L、20.0mg/L和19.2 mg/L,略高于野生型17.5 mg/L;FabH、FabF及双敲缺失体的含量分别为12.6 mg/L、15.2 mg/L和11.2 mg/L,明显低于野生型。【结论】在单基因突变体文库基础上,利用P1噬菌体转导、Red同源重组和抗性基因消除进行基因敲除,简化了构建大肠杆菌单基因和多重突变体的方法。
- 曲璟秋刘翠花刘伟丰陶勇朱坤
- 关键词：大肠杆菌RED同源重组基因敲除脂肪酸含量
- 异油酸含量对铜绿假单胞菌群集运动能力的影响被引量：3
- 2015年
- 【目的】研究铜绿假单胞菌的脂肪酸组成对群集运动(swarming)的影响及可能的原因。【方法】通过双交换原理敲除铜绿假单胞菌PAO1脂肪酸合成的一个重要基因fab F,构建fab F缺失突变体;构建p UCP18Gm-fab F质粒大量表达Fab F,对缺失体进行回补。比较野生型、缺失体和回补后菌株的swarming能力。利用气相色谱分析野生型、缺失体和回补后菌株的脂肪酸组成变化,以揭示Fab F表达影响swarming能力的可能原因。【结果】获得了假单胞菌的fab F缺失突变体YFF-1,证实了fab F敲除后假单胞菌的swarming能力消失,fab F回补后细菌的swarming能力得以恢复。气相色谱结果显示,突变后脂肪酸组成发生明显变化,异油酸(C18:1Δ11)含量由33.6%急剧下降至8.9%,不饱和脂肪酸:饱和脂肪酸(USA:SFA)也由0.96下降至0.74;fab F回补后,异油酸含量恢复至20.9%,USA:SFA也上升至1.09。【结论】铜绿假单胞菌fab F基因的表达水平对细菌的swarming能力具有重要影响,突变体中异油酸含量的下降及脂肪酸不饱和程度的降低(尤其是异油酸含量的急剧下降),可能是YFF-1 swarming能力消失的重要原因。
- 于非非余祥勇于海英胡明杰曲璟秋朱坤王梅芳
- 关键词：铜绿假单胞菌群集运动
