赵邯郸
- 作品数：9 被引量：21H指数：3
- 供职机构：吉林农业大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项吉林省科技发展计划基金国家重大科技成果转化项目更多>>
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- 转植酸酶基因玉米的获得及后代鉴定分析
- 玉米是重要的经济农作物,在各个领域都被广泛应用,对发展国民经济有着巨大的推动作用。如今玉米育种研究的重要内容之一就是利用基因工程技术进行玉米品质改良和提高产量,应用此技术不仅缩短了育种周期,还可以避免种质间远缘杂交不亲和...
- 赵邯郸
- 关键词：玉米植酸酶基因土壤磷含量新种质
- 大豆锰超氧化物歧化酶基因在乳酸乳球菌中的分泌表达被引量：3
- 2015年
- 为使大豆锰超氧化物歧化酶(Mn superoxide dismutase,Mn SOD)在乳酸乳球菌中高效表达,将克隆的Mn SOD基因开放阅读框序列分别重组到质粒p NZ8149和经改造的质粒p NZS上,表达载体p NZ-SOD和分泌表达载体p NZS-SOD,将两者分别以电穿孔法转化乳酸乳球菌L.lactis NZ3900,经Elliker琼脂板筛选、聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)、酶切鉴定正确后,获得的两重组菌株加入Nisin进行诱导表达,对L.lactis NZ3900/p NZ-SOD和L.lactis NZ3900/p NZS-SOD的表达产物进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)和酶活性对比分析。结果显示:L.lactis NZ3900/p NZS-SOD菌株表达SOD总活性约是L.lactis NZ3900/p NZ-SOD菌株的1.6倍,是L.lactis NZ3900/p NZ8149的13.5倍,且可将表达的约2/3的SOD分泌到胞外,表明经改造的乳酸菌分泌表达系统L.lactis NZ3900/p NZS能够分泌表达SOD,并增强SOD的表达。
- 马红丹张丽媛赵邯郸徐丹丹曲静关淑艳王丕武
- 关键词：乳酸乳球菌
- 农杆菌介导phyA基因转化玉米愈伤组织培养体系的优化被引量：2
- 2015年
- 以根癌农杆菌(Agrobacterium)EHA105介导外源基因phy A转入玉米(Zea mays L.)自交系GS01的胚性愈伤组织,并利用除草剂(草胺磷)筛选出抗性愈伤组织,培养并获得再生植株。结果表明,菌液浓度及侵染时间显著影响愈伤组织的转化率;不同激素种类及配比对抗性愈伤组织再生植株的影响明显。当菌液浓度OD600 nm为0.6,侵染时间为20 min时,抗性愈伤组织的转化率最高,达到了68.7%,为玉米农杆菌转化并获得再生植株奠定了基础。
- 徐丹丹王丕武赵邯郸刘双陈昭汀关淑艳
- 关键词：PHYA基因
- 利用低温聚合酶链式反应技术提高大豆超氧化物歧化酶活性
- 2015年
- 目的:利用低温聚合酶链式反应对大豆超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的活性进行改良。方法:将6种在较低退火温度下扩增出的超氧化物歧化酶基因插入到表达载体p REP5N上,构建p PM1、p PM2、p PM3、p PM4、p PM5、p PM6表达载体,转入大肠杆菌后得到工程菌,诱导其在大肠杆菌中进行蛋白表达,并进行酶活力测定,筛选高酶活力菌株。结果:将已克隆的目的基因序列与已知的大豆Mn SOD基因序列比对分析,一致性平均为86.57%,氨基酸序列同源性平均为82.58%。对已获得的6种工程菌进行蛋白质提取,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示表达产物的分子质量约为26 k D。经1%差异水平分析,改良后的SOD酶活力均有极显著提高,平均比对照菌株的酶活力提高1.95倍。结论:本实验证明低温聚合酶链式反应是改变酶活性的一种有效方法,为超氧化物歧化酶在生产中的应用提供了技术支持。
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- 关键词：酶活力
- 玉米自交系H99与齐319幼胚愈伤组织诱导条件的优化被引量：4
- 2013年
- 以优良玉米自交系H99与齐319为研究材料,采用正交试验设计L9(34),探讨了2,4-D、CaCl2、AgNO3三个因素不同浓度组合对玉米幼胚愈伤组织形成的影响。结果表明:2,4-D、CaCl2、Ag-NO3对两个自交系胚愈伤组织诱导率均有影响,其中H99所需2,4-D、CaCl2、AgNO3最佳浓度组合为2mg/L、5mmol/L、8mg/L或2mg/L、5mmol/L、12mg/L;自交系齐319所需2,4-D、CaCl2、AgNO3的最佳浓度组合为2mg/L、4mmol/L、10mg/L或2mg/L、5mmol/L、10mg/L。本研究为基于这两个自交系的玉米遗传转化提供了优化的愈伤组织培养条件。
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- 关键词：玉米自交系愈伤组织正交试验
- 两种测定植酸酶酶活的方法比较及发酵条件研究被引量：3
- 2019年
- 从富含有机质的环境中采集土样,通过植酸钙平板透明圈法初筛得到产植酸酶菌株,进而用钒-钼酸铵法和丙酮-磷钼酸铵法2种方法测定植酸酶酶活力,并进行比较。结果表明,钒-钼酸铵法为准确、可用的方法,通过正交试验确定了最适产酶发酵条件为pH5,可溶性淀粉用量1.25g/100mL,酵母粉用量1.80g/100mL,植酸钙用量1.0g/100mL。
- 徐丹丹赵邯郸王秀然关淑艳
- 关键词：植酸酶酶活
- 玉米愈伤组织的耐盐性筛选被引量：2
- 2015年
- 以玉米(Zea mays L.)自交系H99、丹988、丹598的胚性愈伤组织为材料,利用农杆菌介导的方法将带有p CAMBIA1301-BADH抗盐碱基因转入供试品种的胚性愈伤中,通过愈伤组织对盐(NaCl)的敏感性试验,确定愈伤组织适宜选择压,同时研究了2,4-D浓度对筛选结果的影响。结果表明,玉米自交系H99在盐筛培养基中NaCl浓度为200 mmol/L,2,4-D浓度为1.0 mg/L时筛选结果最佳。对移栽成活的48棵抗盐转p CAMBIA1301-BADH基因植株,经PCR检测有3株呈阳性,阳性株率达到6.3%,初步证明目的基因已整合到玉米基因组中。
- 赵邯郸关淑艳徐丹丹刘双陈沼汀
- 关键词：愈伤组织耐盐性NACL
- 转phyA基因玉米新种质的创制被引量：3
- 2014年
- 【目的】构建植酸酶基因(phyA)根部特异表达的重组植物表达载体,并利用其创制磷高效利用的玉米新种质.【方法】通过PCR方法从携带phyA的表达载体pCAMBIA3301中扩增出phyA表达元件ZmGLU1P-phyA-Nos,并将其插入到带有耐盐基因的中间载体pCAMBIA1301-BADH上,获得phyA根特异表达的植物表达载体:pCAMBIA1301-ZmGLU1P-phyA-Nos,通过农杆菌介导法转化玉米胚性愈伤组织,并对再生植株进行分子生物学检测分析.【结果和结论】经PCR检测获得了9株T0代阳性植株;T1代植株的抗盐筛选、PCR检测、Southern杂交检测及RTPCR检测证明了phyA已经整合到玉米基因组中,获得6株T1代阳性植株;T2代植株的RT-PCR及根组织的酶活性测定结果表明,phyA在转基因植株根部大量表达,植酸酶活性平均比对照植株提高了10.9倍,活性最高的达到5.432 U/g.植酸酶基因在转基因植株根部大量特异表达,获得了转phyA的玉米新种质,为创制磷高效利用的玉米新种质、提高玉米的产量奠定了基础.
- 刘强张丽媛马红丹赵邯郸袁文娅刘思言关淑艳
- 关键词：玉米植酸酶基因表达载体构建新种质
