以橙色大白菜金冠2号为试材,就其子叶及下胚轴原生质体游离、纯化方法及影响因素等进行了研究。结果表明:适宜金冠2号子叶原生质体游离的条件为CPW+DPD培养基+0.8%纤维素酶R-10+0.1%离析酶R-10+0.5 mol/L甘露醇+10 mM CaCl2.2H2O+0.7 mM KH2PO4+0.1%MES,酶解温度27℃,酶解时间2 h,产量达3.52×106个/g.FW,活力60.3%;适宜金冠2号下胚轴原生质体游离的条件为CPW+DPD培养基+1.5%纤维素酶R-10+0.3%离析酶R-10+0.5 mol/L甘露醇+10 mM CaCl2.2 H2O+0.7 mM KH2PO4+0.1%MES,酶解时间18 h,产量达2.20×106个/(g.FW),活力63.7%。而且以21%蔗糖,800 rpm等密度梯度法离心5 min纯化原生质体效果最佳。
