张宇婷
- 作品数：6 被引量：16H指数：2
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- 桦褐孔菌纤维素酶基因的克隆与原核表达被引量：1
- 2016年
- 成功获得了桦褐孔菌(Inonotus obliquus)JL 01菌株的内切葡聚糖酶(IO-EG)和β-葡萄糖苷酶(IOBGL)的cDNA全长序列。eg2基因cDNA序列全长(ORF)为1149bp,编码382个氨基酸,bgl2基因cDNA序列全长(ORF)为2583bp,编码860个氨基酸;成功构建了30a-eg2和30a-bgl2大肠杆菌表达菌株,诱导培养后,SDS-PAGE电泳分析表明两个菌株均表达蛋白,且蛋白以包涵体形式存在,为桦褐孔菌高效外源基因表达系统的建立提供了基础。
- 安丹丹张宇婷李健陈艳秋
- 关键词：纤维素酶基因桦褐孔菌原核表达
- 桦褐孔菌酸性蛋白酶基因的克隆及其生物信息分析被引量：5
- 2016年
- 采用RACE法对桦褐孔菌JL01菌株的蛋白酶基因的cDNA全长序列进行克隆,并对其进行生物信息学分析。结果表明:本研究中克隆的目的基因的cDNA序列全长为1 178bp,包含990bp开放阅读框(ORF),编码由329个氨基酸组成的蛋白(IO-AP);IO-AP属于胃蛋白酶超级家族的天冬氨酸蛋白酶家族,具有天冬氨酸类型蛋白内切酶活性,是一种酸性蛋白酶。IO-AP与鲍姆桑黄菌(Sanghuangporus baumii)的酸性蛋白酶(AP)的氨基酸序列一致性为88%,进化关系最近;与地中海嗜蓝孢孔菌(Fomitiporia mediterranea)的氨基酸序列一致性为85%;与其他来源AP的序列一致性均小于75%。
- 李健张宇婷安丹丹陈艳秋
- 关键词：桦褐孔菌酸性蛋白酶RACE克隆
- Cry1Ab13杀虫基因的PCR诱变及功能验证被引量：1
- 2018年
- 【目的】通过易错PCR技术克隆一种新的Cry1Ab13基因,以利用Cry类Bt基因提高作物抗虫性,丰富基因资源。【方法】利用易错PCR技术对苏云金芽孢杆菌Cry1Ab13基因进行随机诱变,构建突变体文库,筛选获得突变株Cry1Ab13-1,将该基因构建原核重组表达载体后转化到大肠杆菌中进行异源表达,并利用表达的目的蛋白进行抗虫鉴定。【结果】序列分析表明,突变株Cry1Ab13-1基因序列全长2 036bp,与原始碱基序列的一致性为97.79%,有2个碱基发生突变,导致该基因编码的氨基酸序列中有2个氨基酸改变,分别是第130位由脯氨酸变成丝氨酸,第383位由丝氨酸变成苏氨酸;改变后的氨基酸序列与原始氨基酸序列一致性为96.97%。在线分析表明,该基因与已知过敏源的序列同源性低于35%,不存在致敏性。SDS-PAGE电泳分析表明,表达蛋白分子质量大小为79.5ku,与预期结果相符。抗虫鉴定表明,处理72h时表达的目的蛋白对小菜蛾(Plutella xyllostella)幼虫的致死率达87.88%,明显高于未突变基因对照组的幼虫死亡率;对亚洲玉米螟(Ostrinia nubilalis)幼虫的致死率达81.11%,而且存活的亚洲玉米螟幼虫的生长发育受到明显抑制。【结论】成功克隆了Cry1Ab13-1抗虫基因,且该基因对小菜蛾幼虫和亚洲玉米螟幼虫均具有高效的杀虫活性。
- 闫鸽宋阳张宇婷张卓代力强王丕武
- 关键词：易错PCR玉米螟小菜蛾
- 桦褐孔菌纤维素酶基因真核表达载体构建被引量：1
- 2017年
- 根据已知的内切葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶基因ORF全长序列,分别设计1对带有粘性末端酶切位点EcoRI和NotI的特异性引物,PCR克隆得到桦褐孔菌内切葡聚糖酶(endo-l,4-β-D-glucanase,EG)和β-葡萄糖苷酶(beta-glucosidase,BGL)ORF基因全长,将酶切后的目的片段分别与真核表达载体pPICZαA连接,构建出真核表达载体pPICZαA-EG和pPICZαA-BGL,并成功转化到毕赤酵母GS115中,为下一步纤维素酶的表达和功能验证奠定了基础。
- 张宇婷曲柏宏宁云山安丹丹李健陈艳秋
- 关键词：桦褐孔菌内切葡聚糖酶Β-葡萄糖苷酶真核
- 桦褐孔菌实时荧光定量PCR内参基因的筛选被引量：7
- 2016年
- 笔者采用软件GeNorm分析7个内参基因在桦褐孔菌(Inonotus obliquus)中表达的稳定性。结果表明,在不同pH培养基处理下,最适内参基因数为2,act和gapdh为最适内参基因;高温刺激下,最适内参基因数为2,act和gapdh为适宜内参基因;在菌核发育阶段,最适内参基因数为2,gapdh和cyp为最适内参基因;在菌丝体发育阶段,最适内参基因数为3,act,tub和ubq为适宜内参基因;在整体试验样本中,最适内参基因数为2,act和gapdh为最稳定的内参基因。
- 安丹丹李健隋飞飞曲柏宏陈艳秋张宇婷
- 关键词：实时荧光定量PCR内参基因桦褐孔菌GENORM
- 桦褐孔菌GPD基因cDNA序列和启动子的克隆与分析被引量：1
- 2019年
- 利用RACE和染色体步移技术首次从桦褐孔菌中克隆得到三磷酸甘油醛脱氢酶(GPD)基因和启动子序列。桦褐孔菌GPD基因的cDNA序列全长1223 bp,其中,编码区1020 bp,共编码339个氨基酸,相对分子质量约为36.39 kDa,理论等电点为8.28。序列比对结果表明:桦褐孔菌GPD基因与鲍姆桑黄(Sanghuangporusbaumii)相似度为88%。利用染色体步移技术方法克隆得到GPD基因起始密码子上游446 bp启动子序列,分析表明在152 bp和160 bp处有2个转录起始位点,含有TATA、CAAT、CCAAT box及重要顺势作用元件LTR、O2-site、circadian、Sp1、TCCC-motif等,这将为桦褐孔菌菌株的分类鉴定、功能研究及高效表达载体的建立提供基因资源。
- 张宇婷朴钟云朴钟云刘迪
- 关键词：桦褐孔菌启动子克隆
