李健
- 作品数：5 被引量：18H指数：3
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- 桦褐孔菌纤维素酶基因的克隆与原核表达被引量：1
- 2016年
- 成功获得了桦褐孔菌(Inonotus obliquus)JL 01菌株的内切葡聚糖酶(IO-EG)和β-葡萄糖苷酶(IOBGL)的cDNA全长序列。eg2基因cDNA序列全长(ORF)为1149bp,编码382个氨基酸,bgl2基因cDNA序列全长(ORF)为2583bp,编码860个氨基酸;成功构建了30a-eg2和30a-bgl2大肠杆菌表达菌株,诱导培养后,SDS-PAGE电泳分析表明两个菌株均表达蛋白,且蛋白以包涵体形式存在,为桦褐孔菌高效外源基因表达系统的建立提供了基础。
- 安丹丹张宇婷李健陈艳秋
- 关键词：纤维素酶基因桦褐孔菌原核表达
- 桦褐孔菌酸性蛋白酶基因的克隆及其生物信息分析被引量：5
- 2016年
- 采用RACE法对桦褐孔菌JL01菌株的蛋白酶基因的cDNA全长序列进行克隆,并对其进行生物信息学分析。结果表明:本研究中克隆的目的基因的cDNA序列全长为1 178bp,包含990bp开放阅读框(ORF),编码由329个氨基酸组成的蛋白(IO-AP);IO-AP属于胃蛋白酶超级家族的天冬氨酸蛋白酶家族,具有天冬氨酸类型蛋白内切酶活性,是一种酸性蛋白酶。IO-AP与鲍姆桑黄菌(Sanghuangporus baumii)的酸性蛋白酶(AP)的氨基酸序列一致性为88%,进化关系最近;与地中海嗜蓝孢孔菌(Fomitiporia mediterranea)的氨基酸序列一致性为85%;与其他来源AP的序列一致性均小于75%。
- 李健张宇婷安丹丹陈艳秋
- 关键词：桦褐孔菌酸性蛋白酶RACE克隆
- 桦褐孔菌实时荧光定量PCR内参基因的筛选被引量：7
- 2016年
- 笔者采用软件GeNorm分析7个内参基因在桦褐孔菌(Inonotus obliquus)中表达的稳定性。结果表明,在不同pH培养基处理下,最适内参基因数为2,act和gapdh为最适内参基因;高温刺激下,最适内参基因数为2,act和gapdh为适宜内参基因;在菌核发育阶段,最适内参基因数为2,gapdh和cyp为最适内参基因;在菌丝体发育阶段,最适内参基因数为3,act,tub和ubq为适宜内参基因;在整体试验样本中,最适内参基因数为2,act和gapdh为最稳定的内参基因。
- 安丹丹李健隋飞飞曲柏宏陈艳秋张宇婷
- 关键词：实时荧光定量PCR内参基因桦褐孔菌GENORM
- 桦褐孔菌内切葡聚糖酶基因的克隆与表达分析被引量：5
- 2016年
- 利用RACE技术首次从药用真菌桦褐孔菌中克隆得到了与菌核形态发育相关的内切葡聚糖编码(EG)基因。结果表明:桦褐孔菌内切葡聚糖酶基因(IO-EG)的cDNA全长为1 315 bp,其中编码区占1 233 bp,具有13个内含子和14个外显子,共编码410个氨基酸。系统进化树分析表明,桦褐孔菌EG与嗜蓝孢孔菌EG在分子进化关系上最相近。实时荧光定量PCR分析表明,随着菌核的生长发育,IO-EG基因的表达量不断升高,初步证明内切葡聚糖酶基因的表达量与桦褐孔菌菌核的产量相关。
- 隋飞飞李健安丹丹陈艳秋
- 关键词：桦褐孔菌内切葡聚糖酶菌核
- 桦褐孔菌纤维素酶基因真核表达载体构建被引量：1
- 2017年
- 根据已知的内切葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶基因ORF全长序列,分别设计1对带有粘性末端酶切位点EcoRI和NotI的特异性引物,PCR克隆得到桦褐孔菌内切葡聚糖酶(endo-l,4-β-D-glucanase,EG)和β-葡萄糖苷酶(beta-glucosidase,BGL)ORF基因全长,将酶切后的目的片段分别与真核表达载体pPICZαA连接,构建出真核表达载体pPICZαA-EG和pPICZαA-BGL,并成功转化到毕赤酵母GS115中,为下一步纤维素酶的表达和功能验证奠定了基础。
- 张宇婷曲柏宏宁云山安丹丹李健陈艳秋
- 关键词：桦褐孔菌内切葡聚糖酶Β-葡萄糖苷酶真核
