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人体鼠双微体2C端结构域ZF&RING重组蛋白的表达、纯化及单体结构研究: 2016年; 目的:通过在大肠杆菌SUMO系统中对鼠双微体2(MDM2)C端结构域ZF&RING(aa.300-491)进行构建并进行表达,酶切和纯化,从而得到MDM2蛋白C端结构域的单体结构,为其后续的晶体研究及MDM2非p53依赖途径的研究提供途径。方法:利用大肠杆菌SUMO表达系统对zf&ring基因进行重组构建。构建成功的表达载体经诱导表达优化后,通过Ni-NTA进行亲和层析纯化,并利用SDS-PAGE及Western blot鉴定分析。纯化后的融合蛋白经ULP1酶切得到目的蛋白ZF&RING,并通过Hi Trap Q FF离子交换层析检验和去除杂质DNA。最后通过分子筛检验其蛋白结构。结果:构建了SUMO-ZF&RING重组载体。重组载体在大肠杆菌高效可溶性表达,纯化并酶切后的目的蛋白ZF&RING以单体形式存在。结论:通过原核表达、纯化、酶切及层析发鉴定,成功获得高稳定、高纯度且为单体结构的MDM2 C端结构域ZF&RING蛋白,为后续关于MDM2,尤其是其非p53依赖途径的结构学和功能学提供了思路和途径。; 孟希陈婷张云龙黄旋刘晋源陆昌瑞; 关键词：C端结构域蛋白表达纯化

人胰岛素B27K-DTrI前体在毕氏酵母中表达条件的优化被引量：1: 2011年; 目的优化甲醇酵母表达系统,提高B27K-DTrI前体表达量。方法用不同浓度的G418 YPD平板、联合Real-time PCR筛选高拷贝菌株。优化高拷贝菌株的最佳起始诱导吸光度A、诱导时间、诱导剂浓度等表达条件。结果筛选到高拷贝菌株S3菌,最佳诱导条件为诱导起始A600约6.0,甲醇诱导浓度0.75%,诱导时间72 h,目的蛋白表达量118 mg/L。结论通过条件优化实验,为人胰岛素B27K的产业化提供了可靠的实验基础。; 郝贺龙陈婷乔元昊黄旋江致君张兴群; 关键词：速效胰岛素甲醇酵母

人胰岛素MIP融合蛋白在大肠杆菌中表达条件的优化: 2016年; MIP即人胰岛素B27赖氨酸去三肽胰岛素(B27K-DTr I)的前体。B27K-DTr I是一种新型单体速效胰岛素类似物,其单体性质好,生物活性高,是潜在的速效人胰岛素药物。将构建好的重组质粒pp SUMO-MIP转入大肠杆菌BL21(DE3)菌株,利用IPTG进行诱导表达。对MIP融合蛋白的诱导表达时间进行一系列的优化,结果表明:重组质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中最优的表达条件为TB培养基、0.1 m M IPTG,15℃诱导过夜。通过表达条件的优化,每升菌液可获得30.1 mg的融合蛋白粗品。为进一步制备单体胰岛素B27K-DTr I打下了基础。; 黄旋陈婷张云龙陆昌瑞; 关键词：速效胰岛素

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黄旋