马志倩
- 作品数：7 被引量：12H指数：2
- 供职机构：西北农林科技大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：陕西省重大科技创新专项计划项目中央高校基本科研业务费专项资金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 非泼罗尼纳米乳的制备及理化性质与安全性分析被引量：5
- 2013年
- 作者拟制备非泼罗尼纳米乳,并对其理化性质及安全性进行分析。以纳米乳的载药量、稳定性和毒性为考察指标,筛选合适的油相、表面活性剂,再利用伪三元相图选出最佳配方,制备出非泼罗尼纳米乳。用透射电镜观察非泼罗尼纳米乳的形态;用激光粒度分析仪测定其粒径分布范围、多分散系数(PDI)和Zeta电位;通过留样观察和加速试验考察其稳定性;通过皮肤毒性试验和急性毒性试验评估其安全性;通过改良的Franz扩散装置考察其透皮性。结果显示非泼罗尼纳米乳最佳配方:非泼罗尼1.2%,肉桂醛8.0%,聚氧乙烯醚蓖麻油32.0%,蒸馏水58.8%。其呈规则的圆球形,粒径分布在5～24nm,平均粒径11.5nm,PDI为0.218,Zeta电位为-20.6mV,稳定性良好。皮肤毒性试验、急性毒性试验和透皮试验表明,该纳米乳有良好的安全性和透皮效果。成功研制了非泼罗尼纳米乳,其稳定性好,安全性高,透皮性好。
- 郭建军欧阳五庆李会芳苏金辉马志倩李旭召张莹
- 关键词：纳米乳伪三元相图安全性透皮效果
- 新型冠状病毒检测技术研究进展被引量：1
- 2020年
- 截至2020年4月20日,全球已有211个国家和地区受到由严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)引起的新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的危害,该疫病对全球公共卫生构成了巨大威胁。该病毒主要通过飞沫和接触传播,潜伏期为1 d^14 d,多为3 d^7 d,人群普遍易感,严重者可出现急性呼吸窘迫综合征等症状,甚至导致死亡。因此,选择快速准确的确认或清除疑似病例体内的SARS-CoV-2的方法对控制疫情和挽救生命具有重要的意义。现就COVID-19暴发以来所报道的SARS-CoV-2检测方法包括病原学、血清学抗体检测及胸部影像学检测进行了综述,旨在为研究人员和临床医生及时检测SARS-CoV-2感染提供可靠的方法。
- 荆扬马志倩肖书奇
- 关键词：新型冠状病毒
- 猪流行性腹泻病毒S蛋白纳米抗体的筛选与鉴定被引量：3
- 2021年
- 猪流行性腹泻病(porcine epidemic diarrhea,PED)是一种高度接触性肠道传染性疫病,主要危害1周龄以内的仔猪,仔猪感染死亡率高达100%,是目前危害世界养猪业的主要疫病之一。本研究旨在制备针对猪流行性腹泻病毒S蛋白的特异性纳米抗体并鉴定其结合活性。作者原核表达并纯化PEDV S1蛋白,将纯化后的PEDV S1重组蛋白免疫双峰驼,第4次免疫后分离其外周血淋巴细胞,提取淋巴细胞RNA,反转录得到cDNA,通过巢式PCR扩增VHH片段,并构建至pCANTAB-5E载体中,电转化至TG1感受态细胞,得到VHH噬菌体抗体展示文库;随后,对构建的噬菌体抗体展示文库进行救援和3轮富集,利用噬菌体展示技术从中筛选针对PEDV S蛋白纳米抗体,通过ELISA验证筛选的纳米抗体的特异性和结合力。通过Western blot和间接免疫荧光验证纳米抗体与PEDV的结合活性。结果显示:成功表达并纯化PEDV S1蛋白,经4次免疫后,双峰驼血清中的特异性抗体效价达到了1∶256000。构建的噬菌体展示文库的库容量为2.1×10^(7),阳性率85%;对噬菌体展示文库3轮的淘选富集后,最终筛选出6株氨基酸序列不同的纳米抗体,ELISA结果显示,6株纳米抗体均对PEDV S1重组蛋白具有良好的结合力与特异性。随后验证了Nb3能够与PEDV结合,表明其具有良好的活性。成功筛选到针对PEDV S1蛋白的特异性纳米抗体,所筛选纳米抗体有望用于PED的诊断和治疗,同时为PEDV的致病机制研究提供抗体材料。
- 王天宇李志伟杨婷董林芳马志倩边巴次仁肖书奇李爽
- 关键词：猪流行性腹泻病毒噬菌体展示技术
- 病毒调节宿主适应性免疫的分子机制被引量：2
- 2021年
- 在适应性免疫过程中,机体主要通过T细胞和B细胞特异性识别入侵的病毒并将其清除。正常情况下,产生的抗体有利于病毒清除,但有些病毒存在抗体依赖增强作用(ADE),亚中和浓度或非中和抗体反而促进病毒感染。自然杀伤(NK)细胞的记忆性和特异性,使其与适应性免疫的界限越来越模糊。病毒为了更好地在宿主细胞中生存,进化出多种可逃逸宿主适应性免疫系统的机制。本文对病毒调节的各种宿主适应性免疫反应和病毒的免疫逃逸机制进行总结,以期为进一步探究病毒与宿主适应性免疫的关系及相应疫病的防治和疫苗开发提供参考。
- 徐乐乐李洋李志伟马志倩肖书奇
- 关键词：病毒适应性免疫NK细胞
- PRRS减毒活疫苗抗体消长规律及仔猪最佳首免日龄探究被引量：1
- 2021年
- 从山东省某规模化猪场随机选择5头健康母猪,在其分娩前35 d免疫1头份猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)减毒活疫苗。从5头母猪分娩的仔猪中随机选择30头,于0,4,7,10,16,21,28,35日龄时采集各仔猪前腔静脉血分离血清,测定PRRS抗体水平及抗体阳性率,以探究仔猪PRRS抗体消长情况。为探究仔猪接种PRRS疫苗的最佳首免日龄,选择175头健康仔猪,随机分为7组,每组25头,分别于0,7,14,21,28,35日龄时免疫PRRS减毒活疫苗,并于免疫后7,14,21,28,35 d时采集血清测定其PRRS抗体水平及抗体阳性率。结果显示,仔猪吮吸初乳后逐渐获得高水平的母源抗体,于4日龄时达到峰值且阳性率高达100%;7日龄及10日龄时,仔猪体内PRRS抗体仍处在峰值附近,且阳性率为100%;此后,PRRS抗体及阳性率逐渐降低,在28日龄时接近阴性,在35日龄时大部分转为阴性。不同日龄进行首免的各组仔猪中,0日龄免疫组在免疫后7 d即可产生高水平PRRS抗体,且阳性率达75%,之后PRRS抗体逐渐增高,且阳性率逐渐增至96%;4日龄免疫组除在免疫后7 d处于临界值(S/P=3.9)外,其余时间点PRRS抗体均呈阳性,但阳性率为70%~83%;7日龄免疫组与4日龄免疫组相似,除免疫后7 d处于较低值(S/P=0.26)外,其余各时间点PRRSV抗体均呈阳性;而14,21,28,35日龄免疫组仔猪在免疫后14 d之前PRRS抗体均为阴性,血清转化出现在14 d或21 d后,但阳性率较高。综上,妊娠母猪产前35 d免疫PRRS减毒活疫苗所产仔猪体内PRRS母源抗体均值在4日龄时达峰值,28日龄时衰减至接近阴性,而35日龄时大部分转为阴性;仔猪分娩当天(吮吸初乳前)或分娩后4~7 d进行PRRS减毒活疫苗免疫均能使仔猪迅速产生较高水平阳性抗体,且具有较长的免疫持续时间和PRRS抗体阳性率,是较为合理的免疫方案。
- 高胜李洋马志倩李志伟徐乐乐焦点冯英桐杜兴乾肖书奇
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征疫苗首免日龄
- 酸性硫酸钙对临床常见致病微生物的杀灭能力
- 2021年
- 【目的】研究消毒剂酸性硫酸钙(ACS)对微生物的杀灭效果,为用消毒剂防控人畜疫病提供基础数据和理论依据。【方法】将ACS与中和剂(3%卵磷脂、5%吐温-80的磷酸盐缓冲液)共孵育一段时间后,再分别加入大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)共培养一段时间,将与细菌的混合物涂布于营养琼脂平板,置于37℃生化培养箱培养18-24 h;将与病毒的混合物接种于细胞板,在37℃细胞培养箱内培养一定时间,评价中和剂的中和效果。其对照设置和评判标准如下:消毒剂+菌悬液或病毒悬液(第1组),(消毒剂+菌悬液或病毒悬液)+中和剂(第2组),(中和剂+消毒剂)+菌悬液或病毒悬液(第3组),(无菌硬水+菌悬液或病毒悬液)+中和剂(第4组),(无菌硬水+菌悬液或病毒悬液)+PBS(第5组),无菌硬水+PBS(第6组);细菌杀灭试验中和剂效果评价标准:第1组有极少量细菌生长或无菌生长,第2组有菌生长且明显少于第3、4、5组但多于第1组,第3、4、5组细菌数接近且与阳性对照组细菌数接近,第6组无菌生长,3次重复试验均符合上述条件,结果一致,判定所选中和剂及浓度合适;病毒灭活试验中和剂效果评价标准:第1组有极少量病毒生长或无病毒生长,第2组有病毒生长且明显少于第3、4、5组但多于第1组,第3、4、5组病毒生长与原接种量相近,第6组细胞正常生长,3次重复试验结果一致,判定所选中和剂及浓度合适。利用悬液定量杀菌法和测定病毒滴度的方法评价ACS对上述细菌和病毒的消灭效果,将ACS稀释200、300、400、500、600、700倍分别与上述细菌或病毒作用不同时间后加入中和剂进行中和,然后将细菌混合物涂布于营养琼脂平板,通过计算菌落数评价ACS杀灭细菌的效果,测定病毒混合物中病毒滴度评价ACS对病毒的杀灭效果。【结果】所选用的中和剂能够有效地中和ACS 200倍稀释液�
- 付霞丽郑紫方马志倩徐乐乐李志伟李洋肖书奇李爽
- 关键词：微生物中和剂杀灭效果
- 一种基于猪流行性腹泻病毒S1蛋白的单域抗体的阻断ELISA方法及其评价
- 2021年
- 文中旨在利用猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)S1蛋白生物素化纳米抗体建立一种阻断酶联免疫吸附试验(Blocking enzyme-linked immunosorbent assay,bELISA)方法,用于检测猪体内PEDV抗体水平及疫苗免疫效果的评估。对PEDVS1蛋白的特异性单域抗体(Single-domain antibodies,sdAb)sdAb3基因进行扩增,并在3′端融合Avitag序列,构建至原核表达载体pET21b,进行sdAb3-Avitag蛋白诱导表达纯化。对纯化的sdAb3-Avitag融合蛋白进行生物素标记并鉴定其活性。以PEDV重组S1蛋白为抗原,通过对各反应条件进行摸索与优化,建立一种可靠灵敏的bELISA方法应用于血清样品检测,并与商品化试剂盒检测进行比价。成功构建重组载体pET21b-sdAb3-Avitag并诱导表达出sdAb3-Avitag蛋白。体外生物素标记的sdAb3(sdAb3-Biotin)具有良好的活性。所构建的bELISA方法中,最适参数为:S1蛋白的包被浓度200 ng/孔;血清稀释比例1︰2,血清孵育时间2 h;sdAb3-Biotin稀释比1︰8000,孵育时间30 min;酶标抗体稀释比例1︰5000,反应时间30 min。所建立的方法与猪传染性胃肠炎病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒等主要猪源病毒的阳性血清均无交叉反应,具有良好的特异性和重复性。利用建立的bELISA方法对临床54份猪血清样品进行检测,结果显示,该方法与商品化试剂盒检测结果具有92.56%的总体符合率。文中建立了一种省时可靠的bELISA方法,可用于PEDV的临床监测和疫苗免疫效果评估。
- 马志倩白鸽王天宇李志伟李洋肖书奇李爽
- 关键词：猪流行性腹泻病毒S1蛋白
