王泳
- 作品数：11 被引量：40H指数：4
- 供职机构：河北农业大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家肉羊产业技术体系建设项目河北省自然科学基金国家绒毛用羊产业技术体系建设专项更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 粒细胞集落刺激因子在羊成纤维细胞中的表达及对细胞增殖和凋亡的影响
- 2021年
- 【目的】研究粒细胞集落刺激因子(granule cell stimulating factor,GCSF)在羊成纤维细胞体外培养中对其增殖、周期和凋亡的影响,为今后基于羊GCSF为靶标诱导全能干细胞进行分子遗传育种研究提供理论依据。【方法】将羊GCSF真核表达质粒pRTL1-GCSF和对照载体质粒pRTL1分别转染到1×10^(5)个细胞/mL的羊成纤维细胞中,培养48 h后,利用Trizol法分别提取总RNA并反转录为cDNA,通过实时荧光定量PCR检测羊GCSF在羊成纤维细胞中的瞬时表达水平。通过GCSF依赖型细胞系NFS-60,利用细胞活力检测试剂alamarBlue测定转染48 h后羊成纤维细胞培养上清中分泌表达的GCSF的生物学活性。通过HEK 293F悬浮培养细胞系真核表达分泌型羊GCSF蛋白后,用Ni-NTA凝胶对细胞表达至细胞培养基中的GCSF蛋白进行纯化,并SDS-PAGE检测。加入纯化的30 ng·mL^(-1)GCSF蛋白后在24和48 h时,通过alamarBlue测定羊成纤维细胞的增殖状态,利用流式细胞术检测羊成纤维细胞的细胞周期和凋亡变化。【结果】羊GCSF真核表达质粒转染羊成纤维细胞48 h,检测发现在羊成纤维细胞中GCSF表达量得到显著提高。在羊成纤维细胞中,转染了pRTL1-GCSF质粒的羊GCSF表达量是转染了pRTL1空载对照组的(50615.92±4738.83)倍(P<0.01);羊成纤维细胞瞬时分泌表达的含有GCSF蛋白的培养基上清加入到GCSF依赖型细胞系NFS-60后,试验组和阳性对照组中的NFS-60的荧光强度与阴性对照组和空白对照组相比显著升高(P<0.01),试验组中的NFS-60的荧光强度与阳性对照组相比均差异不显著(P>0.05),结果显示羊GCSF能显著刺激NFS-60细胞的增殖,表明在羊成纤维细胞中表达的羊GCSF具有生物学活性。用HEK 293F悬浮培养细胞系真核表达分泌型羊GCSF蛋白后,纯化得到羊GCSF蛋白。在羊成纤维细胞中添加30 ng·mL^(-1)的羊GCSF后,体外培养24和48 h,GCSF试验组与培养基稀释液对照组相比,细胞活力变化差�
- 李闰婷李闰婷陈龙欣何海迎张丽萌杨若晨王泳刘月琴段春辉刘月琴
- 关键词：GCSF转染生物学活性
- 灭活酵母培养物对羔羊生长性能、养分消化和胃肠道重量的影响被引量：2
- 2020年
- 试验旨在研究不同水平灭活酵母培养物(yeast culture,YC)对羔羊生长性能、养分消化和胃肠道重量的影响。选择3.5月龄、体重(35.65±1.84) kg的断奶杂交健康公羔80只,随机分为4组,每组20只。试验Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅳ组分别于基础日粮中添加灭活酵母培养物0、5、10 g/(只·d)和15 g/(只·d)。结果表明:①随着灭活酵母培养物添加量的增加,各组间羔羊末重、平均日增重(ADG)逐渐增加(P>0.05),干物质采食量(DMI)逐渐减少(P>0.05),试验Ⅳ组料重比(F/G)均显著低于试验Ⅰ组(P<0.05)。②试验Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组干物质(DM)的表观消化率显著高于试验Ⅰ组(P<0.05);试验Ⅱ组、Ⅳ组总能(GE)的表观消化率显著高于试验Ⅰ组(P<0.05);试验Ⅳ组粗蛋白(CP)的表观消化率显著高于试验Ⅰ组(P<0.05)。③各组间胴体重、屠宰率和胃肠道重量无显著差异(P>0.05)。综上所述,日粮中添加灭活酵母培养物不能显著改变羔羊生长性能,但可以显著降低料重比,提高DM、CP、GE的表观消化率。
- 曹文新琚思思王泳张英杰刘月琴纪守坤
- 关键词：羔羊养分消化
- 羊用四种粗饲料营养价值评定被引量：6
- 2017年
- 试验旨在研究利用套算法计算肉用绵羊常用单一粗饲料的代谢能和可消化粗蛋白。试验选取3只体重为(40±1.0)kg、健康的小尾寒羊为试验羊,分别对4种不同试验日粮(花生秧、豆秸、苜蓿和燕麦草各替代30%基础日粮)进行消化代谢和气体代谢试验。通过套算法计算4种单一粗饲料的代谢能值和可消化粗蛋白。结果表明,花生秧、豆秸、苜蓿和燕麦草的代谢能值分别为13.45、5.53、11.14 MJ/kg和15.49 MJ/kg;可消化粗蛋白含量分别为124.61、52.14、104.08 g/kg和74.34 g/kg。
- 张雅飞张英杰段春辉张继伟王泳
- 关键词：绵羊套算法粗饲料代谢能
- 羊用11种植物性非常规饲料营养价值评定被引量：10
- 2019年
- 试验旨在对植物性非常规饲料的营养价值进行评定,为非常规饲料在羊上的应用及开发提供参考。选择3只12月龄、平均体重(35±1.0)kg的小尾寒羊母羊,采用单因素试验设计,用11种非常规饲料:桑树叶、杨树叶、桃树叶、白酒糟、稻壳粉、玉米芯粉、豆腐渣、菊花粕、玉米胚芽粕、玉米皮粉和小麦糠各替代30%基础日粮进行消化代谢试验和气体代谢试验,检测每种饲料原料的常规营养成分以及实测甲烷能,并通过套算法计算其表观消化能、代谢能和可消化粗蛋白值。结果表明:11种非常规饲料代谢能值为2.21~11.83 MJ/kg,由高到低分别为玉米胚芽粕、菊花粕、豆腐渣、桃树叶、小麦糠、桑树叶、白酒糟、玉米芯、玉米皮、杨树叶、稻壳粉;可消化粗蛋白为19.86~170.45 g/kg,由高到低分别为豆腐渣、白酒糟、桑树叶、桃树叶、菊花粕、玉米胚芽粕、小麦糠、玉米皮、杨树叶、稻壳粉、玉米芯。综上,本试验测定的11种植物性非常规粗饲料均可作为羊的饲料资源,其中玉米胚芽粕、豆腐渣、菊花粕、桑树叶和桃树叶等营养价值相对较高。
- 王泳宋杰何海迎张乐超张英杰刘月琴段春辉
- 关键词：代谢能套算法
- 催乳素对绵羊颗粒细胞雌激素和孕酮分泌及相关基因表达的影响被引量：6
- 2020年
- 采用免疫组化技术检测催乳素受体蛋白(PRLR)在绵羊卵巢中的表达定位,建立绵羊卵泡颗粒细胞体外培养体系,将颗粒细胞分成4个处理组,添加不同浓度催乳素(PRL):对照组(不添加PRL)、试验Ⅰ组(0.05 mg/L PRL)、试验Ⅱ组(0.50 mg/L PRL)、试验Ⅲ组(5.00 mg/L PRL),用ELISA法检测各组颗粒细胞雌激素(E2)和孕酮(P4)的分泌水平,荧光定量RT-PCR检测FSHR、LHR、PRLR、StAR、CYP11和CYP19等基因相对表达量。结果表明:在绵羊卵巢中,PRLR蛋白主要在卵泡的颗粒细胞和黄体细胞中表达;添加PRL抑制了E2的分泌、促进了P4分泌,其中Ⅱ组和Ⅲ组E2分泌水平显著低于对照组和Ⅰ组(P<0.05);P4随着PRL添加浓度的升高而升高,各试验组P4分泌水平均显著高于对照组(P<0.05)。各试验组颗粒细胞FSHR、LHR、PRLR、CYP11、StAR的mRNA表达量均极显著高于对照组(P<0.01),而试验组CYP19的表达量极显著低于对照组(P<0.01)。综上,PRL通过上调FSHR、LHR、PRLR、CYP11和StAR mRNA表达,下调CYP19 mRNA的表达,抑制绵羊卵巢颗粒细胞E2的分泌、促进P4的分泌。通过研究添加PRL对绵羊卵巢颗粒细胞E2和P4分泌及相关基因表达的影响,为探讨PRL对卵泡发育的调控机制奠定基础。
- 何海迎王泳段春辉杨若晨王康张英杰刘月琴
- 关键词：催乳素雌激素孕酮绵羊颗粒细胞基因表达
- 绵羊粒细胞集落刺激因子原核表达与提纯及用于颗粒细胞培养的效果被引量：1
- 2020年
- 文中旨在研究粒细胞集落刺激因子(Granule cell stimulating factor,GCSF)对绵羊颗粒细胞体外培养过程中细胞增殖和凋亡的影响,明确GCSF对绵羊颗粒细胞生存的调节作用,为今后该蛋白用于羊繁育方面的研究奠定基础。原核克隆表达纯化羊GCSF蛋白,纯化的蛋白用M-NSF60细胞检测生物学活性,将纯化的GCSF添加到颗粒细胞培养基中作为试验组,以培养基中未添加GCSF的细胞为对照,利用Alarmarblue检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡的变化。结果表明,羊GCSF可以原核表达并纯化,并且具有生物学活性。在24 h和48 h时,在0.06–600 ng/mL的范围内随着加入GCSF的终浓度增加,细胞活力升高。试验组颗粒细胞体外培养24 h后,与阴性对照相比,细胞周期的分布显著改变,S期细胞比例显著减少(P<0.05),G2/M期细胞比例显著增多(P<0.05)。试验组凋亡率和对照组相比,48 h检测时凋亡率显著降低(P<0.05)。综上表明,GCSF在体外培养的绵羊颗粒细胞中,可调控绵羊颗粒细胞周期,促进细胞增殖,抑制细胞凋亡。
- 李闰婷李闰婷陈龙欣何海迎张丽萌杨若晨王泳刘月琴段春辉刘月琴
- 关键词：粒细胞集落刺激因子颗粒细胞细胞活力细胞周期
- PRL基因在小尾寒羊母羊不同组织中的表达分析
- 2020年
- 本实验旨在研究催乳素(PRL)基因在小尾寒羊母羊不同组织中的表达规律。选择42月龄、体重(73.2±2.0)kg、体况良好的小尾寒羊空怀母羊5只,屠宰后采集垂体、下丘脑、肾、子宫、卵巢、淋巴和乳腺组织,用实时荧光定量PCR方法检测各组织中PRL mRNA的相对表达量。结果表明:PRL mRNA在小尾寒羊母羊不同组织中的表达量由高到低依次为:垂体、下丘脑、淋巴、肾、乳腺、卵巢、子宫,其中,PRL mRNA在垂体和下丘脑中的表达量极显著高于淋巴、肾、乳腺、卵巢和子宫,垂体中PRL mRNA的表达量极显著高于下丘脑,而淋巴、肾、乳腺、卵巢、子宫中PRL mRNA表达量差异不显著。
- 王康段春辉纪守坤郭云霞严慧王泳刘月琴张英杰
- 关键词：催乳素小尾寒羊基因表达
- 敲除G0S2基因对绵羊卵巢颗粒细胞增殖、类固醇激素及相关基因表达的影响
- 2023年
- 本文旨在探究G0S2基因对绵羊卵巢颗粒细胞增殖,雌激素(E_(2))和孕酮(P_(4))分泌,以及类固醇分泌相关基因和细胞凋亡基因表达的影响。采集小尾寒羊新鲜卵巢,用割吸法收集中小卵泡的卵泡液,离心分离颗粒细胞,分为试验组和对照组,试验组采用CRISPR-Cas9基因编辑技术敲除G0S2基因,获得重组表达载体PX458-sgRNA-G0S2转染至颗粒细胞;对照组转染PX458质粒至颗粒细胞。检测颗粒细胞活力和凋亡情况,以及E_(2)和P_(4)水平及相关基因的表达量。结果表明,试验组G0S2 mRNA的表达量及蛋白水平极显著低于对照组(P<0.01),分别降低了66%和70%,G0S2敲除成功。试验组颗粒细胞的增殖活力显著高于对照组(P<0.05),细胞凋亡率极显著下降56%(P<0.01)。试验组E_(2)水平显著高于对照组(P<0.05),P_(4)水平显著低于对照组(P<0.05)。试验组颗粒细胞中StAR、CYP11、3β-HSD的表达量极显著低于对照组(P<0.01),CYP19的表达量极显著高于对照组(P<0.01)。与对照组相比,试验组颗粒细胞中Caspase3和Bax的表达极显著下调(P<0.01),Bcl-2的表达极显著上调(P<0.01)。上述结果表明,敲除G0S2基因能促进在绵羊卵巢颗粒细胞的增殖,抑制其凋亡,通过下调StAR、CYP11、3β-HSD,上调CYP19的表达影响E_(2)和P_(4)的分泌。
- 马钰静段春辉贺名扬张英杰杨若晨王泳刘月琴
- 关键词：绵羊颗粒细胞类固醇激素
- 褪黑激素对绵羊卵巢颗粒细胞增殖、凋亡、类固醇激素分泌的影响被引量：1
- 2023年
- 旨在研究褪黑素(melatonin,MT)对绵羊卵巢颗粒细胞增殖、凋亡、类固醇激素分泌及相关基因表达的影响,以期解析MT影响绵羊繁殖的路径。本研究采集1岁龄体重相近饲养条件相同的20只健康小尾寒羊母羊新鲜卵巢,收集2~3 mm卵泡的颗粒细胞,随机分为5组,每组5个重复,分别添加0、10^(-9)、10^(-8)、10^(-7)、10^(-6)mol·L^(-1)MT,培养48 h后CCK8和Annexin V-FITC分别检测颗粒细胞的增殖和凋亡,确定体外培养浓度为10^(-7)mol·L^(-1),将细胞随机分为2组,每组3个重复,收集试验组(添加10^(-7)mol·L^(-1))和对照组(不添加)培养液及裂解液上清,ELISA检测孕酮(P_(4))、雌二醇(E_(2))和cAMP的含量,并利用RT-qPCR和Western blot分析MT对绵羊颗粒细胞MT受体基因、凋亡相关基因和类固醇分泌相关基因mRNA和蛋白表达的影响。结果表明,添加MT各试验组均显著提高了颗粒细胞增殖活力,其中10^(-7)、10^(-6)和10^(-8)mol·L^(-1)组颗粒细胞增殖活力显著高于10^(-9)mol·L^(-1)组(P<0.05),10^(-7)mol·L^(-1)细胞增殖活力最高,但与10^(-6)和10^(-8)mol·L^(-1)组间差异不显著(P>0.05)。添加10^(-7)、10^(-6)和10^(-8)mol·L^(-1)MT颗粒细胞早期凋亡和晚期凋亡率极显著低于10^(-9)mol·L^(-1)组和对照组(P<0.01),其中10^(-7)mol·L^(-1)组细胞晚期凋亡率最低,但与10^(-6)mol·L^(-1)和10^(-8)mol·L^(-1)间差异不显著(P>0.05),而10^(-9)mol·L^(-1)组对细胞凋亡没有显著影响(P>0.05)。添加10^(-7)mol·L^(-1)MT颗粒细胞P_(4)分泌显著降低(P<0.05),而对E_(2)和cAMP水平无显著影响(P>0.05)。添加10^(-7)mol·L^(-1)MT可显著上调MT受体基因MT 1的mRNA和蛋白表达水平及抗凋亡基因Bcl-2的mRNA表达(P<0.05),显著下调了FSHR、StAR、CYP11 A1和3β-HSD的mRNA和蛋白表达(P<0.05),以及凋亡基因BAX、Caspase-3的表达及BAX/Bcl-2比值(P<0.05),对受体基因MT2、LHR和CYP19 A1的表达无显著影响(P>0.05)。综上,绵羊卵巢颗粒细胞体外培养添加MT通过�
- 贺名扬马钰静王泳杨若晨刘月琴张英杰段春辉
- 关键词：褪黑素绵羊颗粒细胞类固醇激素
- 7个地方山羊品种遗传多样性及遗传结构分析被引量：10
- 2020年
- 检测了7个地方山羊群体在15个微卫星位点的遗传多样性和遗传结构,旨为地方山羊群体的保护利用奠定基础。采集燕山绒山羊、辽宁绒山羊、承德无角山羊、济宁青山羊、太行山羊、武安山羊血液样品及内蒙古绒山羊的耳组织,利用微卫星方法分析遗传多样性及遗传结构。结果表明,7个山羊群体的平均有效等位基因数为4.2358、平均期望杂合度为0.7188、平均多态信息含量为0.7068,均具有高度的遗传多样性;总群体平均近交系数为0.0883,平均遗传分化系数为0.5442,平均基因流为0.2094。武安山羊和承德无角山羊的遗传距离最近,太行山羊和燕山绒山羊的遗传距离最远。系统进化树聚类分析表明,燕山绒山羊与辽宁绒山羊聚为一类,济宁青山羊、承德无角山羊、武安山羊、内蒙古绒山羊和太行山羊聚为一类。综上,7个地方山羊群体遗传多样性丰富,群体间遗传分化程度大,基因交流少,受近交程度影响小,具有较高的利用价值和潜力。
- 张乐超刘月琴段春辉张英杰王泳郭云霞
- 关键词：微卫星
