王燕燕
- 作品数：19 被引量：51H指数：5
- 供职机构：大连工业大学生物工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项辽宁省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学文化科学轻工技术与工程更多>>
- 多种激素对喜树悬浮细胞中喜树碱合成关键酶基因的影响
- 2023年
- 喜树中抗肿瘤活性成分喜树碱的生物合成调控具有重要的理论意义与应用价值。基于喜树碱生物合成途径的复杂性及其积累的时间、空间特异性,本研究选择生理状态的均一的喜树悬浮细胞作为研究材料,分析植物激素茉莉酸甲酯(methyl jasmonate, MeJA)、脱落酸(abscisic acid, ABA)、赤霉素(gibberellin, GA)以及水杨酸(salicylic acid, SA)对喜树碱合成途径中关键酶基因转录水平的调控。实时荧光定量PCR (RT-qPCR)检测结果显示,MeJA、ABA、GA以及SA均可促进喜树碱合成色胺途径中关键酶基因CaTDC1以及下游CaSTR的表达,且在处理2 h左右达到峰值;MeJA、GA、SA主要调控环烯醚萜途径中关键酶基因Ca7DLGT、CaG8O、CaCYC1的表达,而ABA则显著调控色胺途径关键酶基因CaTDC1以及下游CaSTR的转录水平;4种激素中SA调控效果与其他激素相比极其显著。本实验排除了喜树碱合成时间、空间特异性影响以及植物向重性、激素浓度梯度等干扰因素,准确地分析了4种激素对喜树碱合成途径关键酶基因的调控,为后续研究植物激素调控喜树碱等次生代谢产物的积累的分子机制提供依据,对于有效提高喜树碱等代谢产物的高效生产以及积累提供了科学依据。
- 霍晓雷杨秉润王燕燕于放
- 关键词：喜树悬浮细胞植物激素实时荧光定量PCR
- 省一流专业背景下《发酵工艺原理》以学生为中心的线上线下混合式教学改革与实践被引量：17
- 2022年
- 以学生为中心、立德树人的教育理念是当前教学改革的根本宗旨。传统的教学模式已不再适用于当下教书育人的需要,同时限制了我校葡萄与葡萄酒工程专业这一特色学科以及省一流专业的发展。解决以往以教师为中心的教学模式以及考核方式单一等问题,开设课程线上线下混合式教学改革势在必行。该文结合目前葡萄与葡萄酒工程专业培养目标对主干专业课程发酵工艺原理进行了线上线下混合式教学的探索与实践。结果表明,《发酵工艺原理》线上线下混合式教学以及增加形成性评价等措施,显著提高了学生自主学习能力、学习兴趣以及学习效果,且有助于提高学生分析问题、解决问题的能力。这为本专业相关专业课程的教学改革提供依据。
- 王燕燕于放孙玉梅陈明王亮刘志文金朝霞张悦
- 关键词：课程建设教学改革
- 脱落酸调节长春花中单萜吲哚生物碱的生物合成被引量：5
- 2019年
- 利用病毒诱导的基因沉默技术沉默长春花幼苗中ABA生物合成途径基因八氢番茄红素脱氢酶(Cr PDS)的表达,控制内源ABA的含量,并对其进行外源ABA处理,从而研究脱落酸(abscisic acid, ABA)对长春花中单萜吲哚生物碱(monoterpenoid indole alkaloids, MIAs)生物合成的影响。Real-time PCR结果显示,在ABA处理后,单萜吲哚生物碱生物合成基因CrTDC、CrNMT和CrD4H表达量显著上升。进一步实验表明,ABA生物合成途径基因CrPDS的沉默能够降低内源ABA水平,并通过下调单萜吲哚生物碱生物合成途径基因降低长春质碱和文朵灵的积累。外源ABA处理能够恢复这些基因的正常表达,由此确定单萜吲哚生物碱生物合成基因CrTDC、CrNMT和CrD4H能够响应ABA信号,并且在ABA介导的长春花单萜吲哚生物碱生物合成调控中发挥重要作用。
- 张孟夏王燕燕于放
- 关键词：脱落酸植物次生代谢调控基因表达
- 喜树中ABA转运蛋白基因CaABAT的克隆及生物信息学分析
- 2018年
- 以喜树叶片提取的总RNA为模板,通过RT-PCR方法扩增喜树中的ABA转运蛋白基因CaABAT全长序列,并克隆到pGMT载体中,序列分析表明,CaABAT基因4 377 bp,编码1 458个氨基酸,等电点为7.82,分子量约为164.8 KD,且该基因与拟南芥中ABA转运蛋白基因At ABCG40氨基酸序列同源性高达73%,并将该序列提交至GenBank(No.KY882555)。该蛋白的二级结构中α-螺旋为49.45%,β-折叠为11.04%,无规则卷曲39.51%,定位细胞的质膜上。且该蛋白基因功能分类体系(Gene ontology)分析显示其具有ATPase依赖的跨膜转运活性,可能参与细胞内如含氮化合物代谢过程。然后分别分段导入至酵母表达载体pDRGAL与植物表达载体pBIGD中,构建重组质粒pDRGAL-CaABAT和pBIGD-CaABAT。最终为探究CaABAT转运ABA功能以及研究其对植物次生代谢调控奠定基础。
- 王燕燕洪雨晨韩玉乾于放
- 关键词：喜树脱落酸重组质粒生物信息学
- 长春花ZCTs基因片段克隆及不同器官中表达分析
- 2021年
- 长春花(Catharanthus roseus)中含有许多具有生物学功能和药用价值的萜类吲哚生物碱,但其含量极低,鉴于其复杂的合成途径及结构,目前无法进行商业规模化的化学合成与生产。为了确定长春花不同器官中锌指结构转录因子(Zinc finger Catharanthus transcription factor,ZCT)家族(ZCT1,ZCT2,ZCT3)与两种生物碱(文朵灵和长春质碱)积累之间的联系,对ZCTs基因片段进行克隆及生物信息学分析,同时收集长春花不同器官进行高效液相色谱检测及实时定量荧光PCR分析。结果表明,长春花不同器官中ZCTs表达量有显著差异,根、茎以及幼嫩叶片中ZCTs的相对表达量较低,成熟叶片中ZCTs的相对表达量较高。长春花生物碱在茎中含量最低,其次为根、叶片。幼嫩的叶片中生物碱含量更高。在相同器官中,长春质碱相对积累量约为文朵灵相对积累量的70%。ZCTs作为长春花生物碱积累的抑制性转录因子基因,在幼嫩叶片中ZCTs的表达量较低,对生物碱积累抑制较轻,叶片发育成熟后,ZCTs表达量增加,抑制叶片中生物碱的积累。长春花叶片中ZCTs相对表达量与生物碱积累量呈负相关。
- 刘师吕莹穆贤王燕燕于放刘志文
- 关键词：实时荧光定量PCR生物碱基因克隆
- 喜树幼叶发育与喜树碱类化合物生物合成的相关性被引量：1
- 2022年
- 喜树(Camptotheca acuminata)能够合成具有抗肿瘤作用的喜树碱(CPT)与10-羟喜树碱(10-HCPT),其积累具有组织特异性,但对于同一组织不同发育阶段的积累特性尚不清楚。利用高效液相色谱和实时荧光定量PCR分析喜树幼叶不同部位(叶片、叶基、叶柄)CPT和10-HCPT积累量以及关键酶基因相对表达量。结果发现,幼叶中CPT的积累量在叶片中最多,其次是叶基、叶柄;10-HCPT的积累量在叶柄中最多,其次是叶基、叶片;合成途径关键酶基因CaG8O、CaCYC1、Ca7-DLS、Ca7-DLGT、CaTDC 1以及CaSTR的表达均具有相似的趋势,且与CPT的积累量呈负相关,但与10-HCPT的积累量呈正相关。
- 董淋淋杨秉润王燕燕张悦于放
- 关键词：喜树碱酶基因幼叶
- 激发和提升高校大学生创新活动能力的措施分析被引量：8
- 2016年
- 本文作者结合多年指导大学生科技创新项目的经验,提出包括高等学校要树立先进的创新创业理念;二级学院搭好创新平台,创造创新活动的外部条件;加强优秀指导教师队伍建设和充分发挥学生的主观能动性等措施,以激发和提升高校大学生创新活动能力,不断提高高校人才培养质量。
- 刘志文王英于放金朝霞王燕燕
- 关键词：创新创业高校指导老师大学生
- 基于LiCl法优化酿酒葡萄叶片的RNA提取
- 2024年
- 为获得纯度高、质量好的酿酒葡萄植株叶片RNA以用于荧光实时定量分析,为后续以酿酒葡萄叶片RNA为材料研究相关转录水平的调控提供技术保障,以经典酿酒葡萄赤霞珠叶片为试验材料,比较分析了重蒸酚法、Trizol法、改良的十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法和LiCl法(基于改良的SDS法)4种方法对酿酒葡萄叶片RNA提取的影响。结果表明,重蒸酚法提取RNA浓度较低,完整性较差,存在部分降解;Trizol法提取的RNA则有部分DNA污染;改良CTAB法提取浓度较高,但蛋白和DNA污染严重;LiCl法提取结果显示,28S的条带亮度是18S的2倍,条带无拖尾,完整性较好,存在DNA污染和少量的蛋白污染。进一步在LiCl法基础上利用醋酸钠、DNAase消化、苯酚抽提法进一步优化,并采用荧光实时定量验证,结果表明,醋酸钠的加入RNA质量无明显改善;然而,经氯仿和水饱和酚(体积比1∶1)抽提2次,氯仿抽提1次,氯仿和水饱和酚(体积比1∶1)抽提1次,并经DNAase进行消化,最终提取出质量浓度为173.611μg/mL、A_(260/280)为1.803纯度高、完整性较好且无蛋白和DNA污染的葡萄叶片总RNA;经实时荧光定量PCR进一步验证,该方法提取的RNA经反转录后获得较好的扩增曲线以及融解曲线,并能够对相关基因进行定量分析。
- 成丹丹范丽娜王美娇于放王燕燕
- 关键词：酿酒葡萄赤霞珠RNA提取QRT-PCR
- 6-BA调控喜树叶片表皮毛发育相关基因转录水平被引量：1
- 2021年
- 喜树因能够合成具有抗癌作用的喜树碱及其衍生物而备受关注。喜树叶片是喜树碱积累的主要场所,且在表皮毛中大量积累。因此,深入了解表皮毛发育调控对于喜树碱合成调控具有重要意义。然而,目前对于喜树叶片表皮毛研究报道较少。本研究基于模式植物拟南芥表皮毛发育的已有研究,分析了外源激素6-BA对喜树叶片表皮毛相关基因转录水平的影响。用6-BA (2.2μmol/L)处理喜树叶片后,喜树表皮毛发育相关基因中CaGIS、CaTTG1、CaMYB23、CaGL2、CaEGL3、CaSPL9、CaTCL1的转录水平被上调,尤其是CaGL2和CaEGL3,其实验组分别为对照组的5倍和4.5倍。再将此结合表皮毛发育模型推测,6-BA能够提高喜树正调控因子CaGIS的转录水平,进而调控转录复合体CaMYB23-CaGL3-CaTTG1,随后激活喜树表皮毛发育下游基因CaGL2,最终激活表皮毛的启动。本研究探讨了6-BA对喜树表皮毛相关基因转录水平的调控,对于研究喜树表皮毛的发育和提高喜树碱积累具有重要的应用价值。
- 王桐王燕燕于放
- 关键词：喜树表皮毛6-BA转录水平
- 外源茉莉酸甲酯调控喜树叶片表皮毛发育及喜树碱生物合成
- 2022年
- 喜树叶片表皮毛存储大量的抗肿瘤活性物质喜树碱,而茉莉酸信号在表皮毛的发育中发挥重要作用。本研究采用外源茉莉酸甲酯(MeJA)处理喜树叶片,并对表皮毛发育相关基因及喜树碱合成关键酶基因转录水平进行分析。结果表明:喜树无菌苗通过喷施外源MeJA(1μmol/L)两周后,叶片表皮毛分布密度显著增加;外源MeJA处理0、2、6 h后,喜树表皮毛合成关键基因的转录水平显著提高,且喜树碱上游环烯醚萜途径关键酶基因(CaCYC1,Ca7DLS,Ca7DLGT,CaG80)和下游萜类吲哚生物碱合成途径中关键酶基因(CaSTR)的转录水平与对照组相比显著提高。据此推测,外源MeJA在调控喜树碱合成的分子机制中不仅促进表皮毛发育,同时促进喜树碱代谢途径酶基因的表达。本研究通过MeJA调控表皮毛发育、增加其分布密度,进而促进喜树碱的积累,从扩增存储空间的角度为喜树碱的高效生产提供调控策略,为下一步提高喜树碱的存储提供理论依据。
- 马文慧王燕燕于放
- 关键词：喜树表皮毛茉莉酸甲酯喜树碱
