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陈永华

作品数:1 被引量:3H指数:1
供职机构:苏州市立医院(东区)更多>>
发文基金:江苏省自然科学基金苏州市科技发展计划更多>>
相关领域:生物学医药卫生更多>>

文献类型

  • 1篇中文期刊文章

领域

  • 1篇生物学
  • 1篇医药卫生

主题

  • 1篇单链
  • 1篇单链抗体
  • 1篇生长因子受体
  • 1篇受体
  • 1篇人肝
  • 1篇人肝细胞
  • 1篇细胞
  • 1篇细胞生长
  • 1篇细胞生长因子
  • 1篇慢病毒
  • 1篇慢病毒表达
  • 1篇慢病毒表达载...
  • 1篇抗体
  • 1篇肝细胞
  • 1篇肝细胞生长因...
  • 1篇肝细胞生长因...
  • 1篇病毒表达

机构

  • 1篇同济大学
  • 1篇苏州市立医院...

作者

  • 1篇郭佳
  • 1篇尹衍新
  • 1篇蒋明
  • 1篇张国栋
  • 1篇朱红胜
  • 1篇陈永华
  • 1篇李冰宇

传媒

  • 1篇细胞与分子免...

年份

  • 1篇2014
1 条 记 录,以下是 1-1
排序方式:
抗人肝细胞生长因子受体单链抗体慢病毒载体的构建和应用被引量:3
2014年
目的构建可表达抗人肝细胞生长因子受体(HGFR)单链抗体(scFv)的慢病毒表达载体,将其感染HEK293细胞,检测该抗体的表达及与抗原结合活性。方法采用反转录PCR(RT-PCR)从分泌小鼠抗人HGFR抗体的杂交瘤细胞株(8E8)中扩增VH和VL基因,用重叠延伸PCR法将VH和VL进行拼接,得到含有信号肽SP-VH-linker-VL的单链抗体基因(HGFR-scFv),将其插入克隆载体pCR-Blunt中。用内切酶将HGFR-scFv基因从pCR-Blunt上切下,插入慢病毒载体pRRL-CMV中,经相应酶切和测序鉴定,正确构建慢病毒表达载体pRRL HGFR-scFv。磷酸钙法转染HEK293T细胞,48 h后通过荧光显微镜检测绿色荧光蛋白(GFP)的表达,将获得病毒颗粒进一步感染HEK293细胞,RT-PCR和ELISA检测scFv的表达情况。结果抗人HGFRscFv的慢病毒表达载体构建成功,病毒颗粒感染HEK293细胞后,得到了可以稳定表达抗人HGFR-scFv的细胞系;ELISA结果表明,scFv能与人HGFR特异性结合。结论成功克隆了小鼠抗人HGFR抗体的scFv基因,并构建其慢病毒表达系统。
陈永华郭佳尹衍新蒋明朱红胜张国栋李冰宇
关键词:肝细胞生长因子受体单链抗体慢病毒表达载体
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