黄宇晨
- 作品数：5 被引量：7H指数：1
- 供职机构：东北农业大学动物医学学院更多>>
- 发文基金：黑龙江省自然科学基金黑龙江省博士后基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- EtAMA1蛋白特异亲和肽抑制鸡艾美尔球虫入侵宿主细胞的作用研究
- 研究目的筛选鸡柔嫩艾美尔球虫(E.tenella)顶膜抗原AMA1(Et AMA1)胞外域重组蛋白(Ecto AMA1)亲和配体,并检测其在抗球虫感染中的作用与机理。材料方法以纯化复性的Ecto AMA1蛋白为靶蛋白,噬...
- 马德星黄宇晨陈文静李光昊
- 关键词：宿主细胞靶蛋白AMA
- 文献传递
- 禽戊型肝炎病毒衣壳蛋白多克隆抗体的制备及其在乳酸乳球菌中的表达
- 2017年
- 将编码禽戊型肝炎病毒(a HEV)衣壳蛋白的ORF2基因片段克隆入原核表达载体p ET-30a(+)中,构建重组质粒p ET-30a(+)-ORF2。质粒经鉴定正确后转化入大肠杆菌Rosseta中筛选阳性菌,阳性菌经IPTG诱导后检测目的蛋白表达情况。用表达的重组蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,应用间接ELISA检测抗体效价。将衣壳蛋白主要抗原区域ORF2Δ250(251~606 aa)基因片段克隆入乳酸菌表达载体p TX8048中获得阳性质粒p TX8048-ORF2Δ250,质粒电转化入宿主菌Lactococcus lactis NZ9000中筛选阳性菌p TX8048-ORF2Δ250/L.lact is NZ9000。阳性菌经Nisin诱导后采用West ern-blot检测目的蛋白表达情况。结果表明,a HEV衣壳蛋白在大肠杆菌中以包涵体形式表达,制备的多克隆抗体效价为1∶216。重组菌p TX8048-ORF2Δ250/L.lactis NZ9000经Nisin诱导后,Western-blot检测到约55 ku的目的蛋白。上述研究结果将为鸡戊型肝炎乳酸菌疫苗研究提供参考。
- 黄宇晨张跃马春丽王芬张丽丽高铭扬周恩民马德星
- 关键词：ORF2多克隆抗体乳酸乳球菌
- 禽戊型肝炎病毒衣壳蛋白多抗制备及在乳酸乳球菌中的表达
- 兔抗禽戊型肝炎病毒(aHEV)衣壳蛋白(ORF2)的特异性抗体,将ORF2蛋白(251-606aa)在乳酸如球菌L.lactis NZ9000中表达.为aHEV的乳酸菌疫苗研究提供参考.戊型肝炎病毒主要分为5个基因型，Ⅰ...
- 张跃黄宇晨王典张丽丽王芬李健马德星
- 关键词：戊型肝炎病毒乳酸乳球菌蛋白表达
- 表达堆型艾美耳球虫3-1E蛋白的三种重组乳酸乳球菌构建与鉴定
- 2016年
- 为探索堆型艾美耳球虫(Eimeria acervulina)表面抗原3-1E基因在乳酸乳球菌L.lactis NZ9000中的不同表达形式,首先通过PCR扩增3-1E目的基因片段,克隆入pTX8048载体中,构建胞内表达质粒p TX8048-3-1E;将乳球菌未知分泌蛋白(Usp45)信号肽(SP)与3-1E基因片段融合(SP-Δ3-1E),并克隆入pTX8048中,构建分泌表达质粒pTX8048-SP-Δ3-1E;将化脓性链球菌M6蛋白细胞壁锚定序列(Cell wall anchor,CWA)克隆入pTX8048-SP-Δ3-1E中的Δ3-1E下游(去除Δ3-1E终止密码子,即NAΔ3-1E),构建表面表达质粒pTX8048-SP-NAΔ3-1E-CWA;将三种表达载体电转化到乳酸乳球菌L.lactis NZ9000中,构建三种乳酸乳球菌L.lactis NZ9000/pTX8048-3-1E(胞内表达菌)、L.lactis NZ9000/pTX8048-SP-Δ3-1E(分泌表达菌)及L.lactis NZ9000/pTX8048-SP-NAΔ3-1E-CWA(表面表达),通过Western blot来检测3-1E目的蛋白在三种阳性乳酸乳球菌中的表达。结果表明,构建的三种重组乳酸乳球菌均可表达目的蛋白。研究结果为进一步评估重组乳酸乳球菌的抗球虫免疫保护作用及后续非抗性标记乳酸菌体系建立奠定基础。
- 张丽丽马德星高铭扬王芬张跃王典黄宇晨李健
- 关键词：乳酸乳球菌胞内表达分泌表达
- 柔嫩艾美耳球虫AMA1蛋白多克隆抗体的制备及在乳酸乳球菌中的表达被引量：7
- 2015年
- 将柔嫩艾美耳球虫子孢子顶膜抗原AMA1胞外域基因片段(EtAMA1)克隆入原核表达载体pET-30a(+)中,构建重组质粒pET-30a(+)-EtAMA1。质粒经鉴定正确后转化入大肠杆菌中筛选阳性菌,阳性菌经IPTG诱导后采用Western-blot检测目的蛋白的表达情况。用表达的重组蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体。应用间接ELISA测定抗体效价,并采用Western-blot检测抗体特异性。将EtAMA1克隆入乳酸菌表达载体pTX8048中构建阳性质粒pTX8048-EtAMA1,质粒电转化入宿主菌乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)NZ9000中筛选阳性菌pTX8048-EtAMA1-L.lactis NZ9000。阳性菌经Nisin诱导后采用Western-blot检测目的蛋白的表达情况。结果表明,EtAMA1在大肠杆菌中以包涵体形式表达。多克隆抗体的效价为218。Western-blot检测证实,制备的抗体可与子孢子反应。重组菌pTX8048-EtAMA1-L.lactis NZ9000经Nisin诱导后,采用Western-blot检测到约61ku的目的蛋白。上述研究结果为基于EtAMA1的鸡球虫病乳酸菌口服疫苗的研制提供了重要参考。
- 王芬马春丽马德星张跃黄宇晨潘龙高铭扬洪琴杨贵君康健
- 关键词：柔嫩艾美耳球虫多克隆抗体乳酸乳球菌
