刘英
- 作品数：2 被引量：7H指数：2
- 供职机构：中国医科大学附属第一医院更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- SCF对体外转染pEGFP-C1/Akt的骨髓间充质干细胞中c-kit、Akt及VEGF表达的影响被引量：6
- 2008年
- 目的克隆构建绿色荧光蛋白(GFP)/Akt表达载体,观察其在鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)中的表达和定位,并探讨干细胞因子(SCF)通过PI3-Akt途径对转染pEGFP-C1/Akt的MSCs中c-kit、Akt和VEGF mRNA及蛋白表达的影响。方法采用酶切法将Akt重组于GFP表达载体中,经酶切序列鉴定后,将该重组质粒GFP/Akt及GFP空质粒通过脂质体转染骨髓MSCs;荧光显微镜观察其转染及在细胞中的分布;分别采用Western blot和反转录多聚酶链反应(RT-PCR)方法检测pEGFP-C1和pEGFP-C1/Akt转染MSCs后对c-kit、Akt及VEGF mRNA和蛋白表达的影响,pEGFP-C1/Akt转染MSCs后不同浓度SCF对c-kit、Akt及VEGF mRNA和蛋白表达的影响。结果GFP/Akt基因表达载体经酶切鉴定和测序分析后确认构建成功,并在MSCs中表达。荧光显微镜下见pEGFP-C1转染后,绿色荧光均匀分布于整个细胞中;pEGFP-C1/Akt转染后,绿色荧光分布于细胞质中。与pEGFP-C1组相比较,pEGFP-C1/Akt转染组Akt及VEGF的mRNA和蛋白表达均明显增强(P<0.05),c-kit mRNA和蛋白表达则无明显变化(P>0.05)。加入SCF后其能增强实验组(SCF+pEGFP-C1/Akt)和对照组(SCF+pEGFP-C1)中c-kit、Akt及VEGF的mRNA和蛋白表达,并且随着SCF的浓度增高该作用则越明显(P<0.05);与对照组相比较,实验组c-kit mRNA和蛋白的表达无明显变化(P>0.05),而Akt和VEGF mRNA和蛋白表达则明显增强(P<0.01)。结论成功构建GFP/Akt融合基因表达载体在MSCs中表达,可诱导Akt及VEGF mRNA和蛋白的表达;SCF可能通过PI3/Akt途径刺激c-kit、Akt及VEGF mRNA和蛋白的表达。
- 霍鑫唐海燕孔宏亮刘英张宏伟王欣胡新华张强
- 关键词：骨髓间充质干细胞AKT基因
- 无血清条件对诱导转染pEGFP-C1/Akt的骨髓间充质干细胞凋亡的影响被引量：2
- 2008年
- 目的探讨无血清条件对诱导pEGFP-C1/Akt转染的骨髓间充质干细胞(MSCs)凋亡的影响。方法实验分实验组(pEGFP-C1/Akt转染MSCs)、抑制组(pEGFP-C1/Akt转染MSCs+PI3K/Akt特异性抑制剂)和对照组(MSCs)。在无血清培养基条件下,分别在4、12、24和36h共4个时间点利用RT-PCR检测Akt及Caspase-3mRNA表达,Western blot检测Akt蛋白表达,免疫组化检测Caspase-3蛋白表达,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果在无血清培养4、12、24和36h后,实验组的Akt mRNA和蛋白的表达均高于抑制组及对照组(P<0.01),Caspase-3mRNA及蛋白的表达水平和细胞凋亡率则均低于抑制组及对照组(P<0.01);抑制组及对照组间Akt和Caspase-3mRNA及蛋白的表达和凋亡率的差异无统计学意义(P>0.05)。结论Akt可能通过PI3K/Akt途径抑制其下游底物Caspase-3的表达,从而抑制无血清诱导的MSCs凋亡。
- 霍鑫孔宏亮刘方峰孟祥民刘英张强
- 关键词：凋亡天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3
