李娟
- 作品数：7 被引量：23H指数：3
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- YB-1表达对乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响被引量：7
- 2010年
- 目的:观察Y-盒结合蛋白-1(YB-1)对肿瘤细胞迁移和侵袭能力的影响。方法:通过脂质体介导的方法将YB-1 shRNA重组载体转染入人类乳腺癌MCF-7细胞,经G418筛选及克隆化培养后获得稳定转染株。运用RT-PCR和蛋白质印迹方法检测MCF-7细胞中YB-1 mRNA和YB-1蛋白的表达水平,运用划痕实验和Transwell小室法检测细胞运动、迁移和侵袭能力的变化,同时运用RT-PCR和蛋白质印迹方法检测细胞中MMP-2的表达水平,并用明胶酶谱法检测MMP-2蛋白的活性。结果:稳定转染YB-1 shRNA的细胞中YB-1的表达明显低于转染随机片段的细胞和未转染组细胞,且细胞的运动、迁移和侵袭能力以及MMP-2的表达及活性也较后两组细胞明显下降。转染随机片段的细胞和未转染组细胞间无明显差异。结论:YB-1 shRNA可以沉默乳腺癌MCF-7细胞中YB-1的表达,并降低细胞的迁移和侵袭能力以及MMP-2的表达及活性。
- 杨靖许文林李娟弓晋灵吴晓君陈巧云王法春
- 关键词：MCF-7SHRNAMMP-2
- 一种新CD44变异体(CD44v17)在乳腺癌组织中的表达及其临床意义被引量：8
- 2010年
- 目的:探讨一种新CD44变异体(CD44v17)在乳腺癌组织中的表达及其临床意义。方法:根据本实验室在MCF-7/Adr中新发现的一种CD44剪切拼接变异体CD44v17(基因库NO.FJ216964)设计特异性引物,应用SYBRG reenⅠ荧光染料,采用实时PCR法检测了52例乳腺癌组织及相应癌旁组织CD44v17 mRNA的表达情况,根据标准曲线计算出CD44v17 mRNA的表达量,分析CD44v17 mRNA表达与乳腺癌临床生物学特性之间的关系。结果:乳腺癌组织CD44v17 mRNA表达(3.10±1.12)明显高于相应癌旁正常组织(2.31±0.84)(P<0.01);乳腺癌淋巴结转移组(4.07±1.13)显著高于无淋巴结转移组(2.75±0.89)(P<0.01);肿瘤组织>5 cm组CD44v17 mRNA表达(4.18±0.95)明显高于肿瘤组织≤5 cm组(2.96±1.07)(P<0.05);髓样癌(5.27±0.30)显著高于导管内癌(3.28±1.08)和浸润性导管癌(2.92±1.04)(P<0.05),导管内癌和浸润性导管癌CD44v17 mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05);乳腺癌临床Ⅲ期CD44v17 mRNA表达(4.18±0.92)明显高于Ⅰ期(2.73±0.97),Ⅱ期(2.76±0.96)(P<0.05);乳腺癌CD44v17 mRNA表达与雌激素受体、孕激素受体(progesterone receptor,PR)和cerbB-2表达无明显相关性(P>0.05)。结论:CD44v17 mRNA在乳腺癌组织中高表达,在乳腺癌的发生发展中起重要作用,可能与乳腺癌的侵袭、转移及预后有关。
- 弓晋灵许文林李娟杨靖吴晓君陈巧云
- 关键词：实时荧光定量PCR乳腺癌
- PI3K/Akt信号通路及SP1在VEGF上调胃癌细胞MRP1中的作用被引量：3
- 2014年
- 目的:从多药耐药相关蛋白1(multidrug resistanceassociated protein 1,MRP1)基因转录调控入手,初步探讨血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)上调MRP1表达的机制.方法:(1)以人胃癌BGC-823细胞为模型,一组常规培养24 h,另一组VEGF作用24 h,最后一组PI3K/Akt抑制剂LY294002预处理1 h后再加VEGF作用24 h,Western blot法分别检测各实验组MRP1、Akt、p-Akt及SP1蛋白表达水平,EMSA方法检测各实验组转录因子SP1与D N A的结合活性;(2)构建分别含M R P1基因启动子序列及SP1结合位点突变的MRP1基因启动子序列的重组荧光素酶报告基因载体(PGL3-Basic-MRP1w、PGL3-Basic-MRP1m),荧光素酶活性分析突变后的MRP1基因启动子在BGC-823细胞中活性的改变及VEGF对其转录活性的影响.结果:(1)VEGF 32 ng/m L作用24 h组与未处理组相比,MRP1、p-Akt、SP1在蛋白水平均上调,且SP1的DNA结合活性明显增强;LY294002 50μmol/m L预处理1 h再联合VEGF32 ng/m L作用24 h后,与VEGF 32 ng/m L单独作用组相比,MRP1、p-Akt、SP1在蛋白水平均下调,SP1的DNA结合活性明显减弱;(2)在BGC-823细胞中,PGL3-Basic-MRP1m具有启动子活性(110.000±2.603),其转录活性为空载体PGL3-Basic的1.8倍(t=-8.936,P<0.01),但与SP1结合位点突变之前的MRP1启动子(PGL3-Basic-MRP1w)活性(144.000±6.888)相比,其转录活性下降23.6%(t=4.617,P<0.05);V E G F作用12 h后,其活性增强,且呈剂量依赖关系(r=0.911,P<0.01),VEGF作用浓度为32 ng/m L时达最大值(191.000±14.799),与无V E G F作用组(112.000±11.358)相比,活性增高0.7倍(t=-7.335,P<0.01);VEGF作用24 h后,也能以剂量依赖的方式上调SP1结合位点突变后MRP1启动子区的转录活性(r=0.945,P<0.01),与无VEGF作用组(133.000±6.083)相比,最大活性(426.000±7.000)增高2.2倍(t=-56.032,P<0.01).结论:VEGF对MRP1启动子活性的上调作用与激活PI3K/Akt信号通路及增强转录因子SP1的表达及活性相关;MRP1基因启动子区SP1结合位点突变后其
- 李娟许文林冷加燕
- 关键词：多药耐药相关蛋白1启动子活性PI3K/AKT信号通路转录因子SP1
- 血管内皮生长因子对胃癌BGC-823细胞多药耐药相关蛋白1启动子活性的影响
- 2010年
- 目的:检测血管内皮生长因子(VEGF)对多药耐药相关蛋白1(MRP1)基因启动子转录活性的影响并初步探讨其作用机制。方法:合成MRP1启动子片段,克隆到荧光素酶报告基因载体PGL3-Basic中;用脂质体2000将重组的报告基因载体与内参质粒β-半乳糖苷酶(β-gal)瞬时共同转染人胃癌BGC-823细胞,检测VEGF作用后MRP1启动子活性的改变;继之,采用PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002预处理转染的细胞,再检测VEGF对MRP1启动子转录活性的影响。结果:酶切鉴定和DNA序列分析表明成功地构建了重组PGL3-Basic-MRP1载体;荧光素酶活性分析表明重组PGL3-Basic-MRP1在BGC-823细胞中具有启动子活性(144±3.0),与空载体PGL3-Basic(60±4.910)相比,转录活性增高2.4倍,差异有统计学意义(P<0.01);VEGF能以剂量依赖的方式上调MRP1启动子区的转录活性,与无VEGF作用组(171±6.083)相比,最大活性(924±19.975)增高5.4倍(P<0.05);LY294002能够显著抑制VEGF对MRP1启动子区的转录激活,当LY294002浓度为50μmol/ml时,MRP1启动子活性(392±25.541)与无LY294002作用组(1001±11.533)相比下降2.5倍(P<0.05)。结论:VEGF对MRP1启动子活性具有上调作用,PI3K/AKT信号通路在这一过程中发挥了重要作用。
- 李娟许文林弓晋灵杨靖吴晓君陈巧云
- 关键词：多药耐药相关蛋白1血管内皮生长因子荧光素酶报告基因启动子活性
- shRNA干扰VEGF表达对白血病细胞多药耐药的影响被引量：3
- 2009年
- 目的:探讨血管内皮细胞生长因子(VEGF)与人白血病耐药细胞株K562/A02细胞多药耐药的关系及其机制。方法:针对VEGF基因设计合成3条干扰片段shRNA1,2,3,采用脂质体2000分别将其转染入K562/A02细胞,RT-PCR法检测VEGF和多药耐药相关基因MDR1,MRP1,topoⅡ,GST的mRNA水平;蛋白质印迹法检测VEGF蛋白水平;MTT法检测各组细胞对多柔比星的半数抑制浓度(IC50值)。结果:K562/A02细胞VEGFmRNA表达水平显著高于敏感株K562细胞,差异有统计学意义(P<0.01),且VEGF蛋白水平也显著高于K562细胞;转染shRNA后,K562/A02细胞中VEGFmRNA水平出现不同程度下调,其中shRNA2组和shRNA3组与转染随机片段组比较差异有统计学意义(P<0.05),以shRNA3组下调最显著,并且VEGF蛋白水平也出现相应的下调;转染48 h后K562/A02细胞中MDR1,MRP1及topoⅡ的mRNA水平均出现不同程度下调,以shRNA3组下调最显著,分别下调(39.7±1.21)%,(29.1±0.97)%,(28.2±1.04)%,GST基因表达则无明显变化;阳性转染组细胞对多柔比星的敏感性明显增加,其中以shRNA3组最显著。结论:VEGFshRNA可以抑制K562/A02细胞VEGF基因与蛋白的表达,不同干扰片段的沉默效果不同,并增强K562/A02细胞对多柔比星的敏感性,其机制可能与MDR1,MRP1及topoⅡ的表达下调有一定的关系。
- 方莉莉许文林陈琛房新建陈巧云李娟
- 关键词：RNA干扰K562/A02细胞多药耐药
- vegf shRNA对耐药白血病细胞化疗敏感性的增强作用被引量：2
- 2011年
- 本研究采用RNA干扰技术探讨血管内皮生长因子(VEGF)对耐药白血病细胞K562/A02药物敏感性的影响及其机制。针对人vegf基因合成3个特异性shRNA干扰片段,采用脂质体介导的方法将其导入K562/A02细胞,用RT-PCR检测vegf及mrp1的mRNA表达水平,用Western blot检测VEGF、MRP1、AKT及P-AKT的蛋白表达情况,用MTT法检测阿霉素对各组细胞的半数抑制浓度(IC50),用流式细胞术检测细胞凋亡、胞内罗丹明123(Rho123)积聚情况。结果表明:转染vegf shRNA后,K562/A02细胞vegf的mRNA表达下调,其中vegf shRNA2组和vegf shRNA3组与HK组比较有显著差异(p<0.05),以vegf shRNA3组最显著,VEGF蛋白表达也出现下调,与mRNA的表达基本一致;MTT检测结果显示阳性转染组对阿霉素的敏感性增加,其中vegf shRNA2组和vegfshRNA3组的半数抑制浓度(IC50)与HK组比较具有显著的统计学差异(p<0.05);阳性转染组胞内Rho123积聚增多,与HK组比较均有统计学差异(p<0.05);阳性转染组细胞凋亡增加,其中vegf shRNA2组和vegf shRNA3组与HK组比较有统计学意义(p<0.05);阳性转染组MRP1mRNA蛋白及表达均下调,以vegf shRNA3组下调最显著;阳性转染组P-AKT的表达水平低于对照组,以vegf shRNA3组最明显,而总的AKT无明显变化。结论:vegf shR-NA可以抑制vegf的基因的转录及翻译,从而增加耐药白血病细胞对阿霉素的敏感性,其机制可能是vegf shRNA通过抑制PI3K/AKT信号转导通路的活化而促进细胞凋亡及下调MRP1的表达。
- 沈慧玲方莉莉陈琛房新建陈巧云李娟许文林
- 关键词：VEGFSHRNA白血病K562/A02细胞MRP1
- 血清睾酮、雌二醇水平与男性阻塞性睡眠呼吸暂停综合征患者轻度认知功能障碍的相关性研究
- 2023年
- 目的:探讨男性阻塞性睡眠呼吸暂停综合征(obstructive sleep apnea hypopnea syndrome,OSAHS)患者血清睾酮、雌二醇水平及其与轻度认知功能障碍(mild cognitive impairment,MCI)的关联。方法:共纳入男性OSAHS患者168例,将其分为OSAHS伴MCI组(85例)和OSAHS不伴MCI组(83例)。比较两组患者的基本情况、睡眠呼吸监测指标及血清性激素水平,采用Logistic回归评估男性OSAHS患者伴MCI的影响因素并绘制ROC曲线。采用Pearson相关性分析评估OSAHS伴MCI患者血清睾酮、雌二醇水平与血清IL-6和MMP-9水平的相关性。结果:两组患者的年龄、高血压、糖尿病、体重指数(BMI)、呼吸暂停低通气指数(AHI)、夜间最低血氧饱和度(LSaO_(2))、氧降指数和觉醒指数均无统计学差异(P>0.05),两组吸烟史和SaO_(2)<90%时间占总监测时间的百分比(T90)比较,差异有统计学意义(P<0.05)。男性OSAHS伴MCI组患者血清睾酮、雌二醇和泌乳素水平与不伴MCI组相比均显著降低(P<0.01)。Logistic回归显示T90是男性OSAHS伴发MCI的独立危险因素(P<0.01),血清睾酮和雌二醇水平是男性OSAHS伴发MCI的独立保护因素(P<0.01)。联合睾酮和雌二醇诊断男性OSAHS伴发MCI的ROC曲线下面积为0.806,敏感度及特异度分别为83.53%和79.27%。男性OSAHS伴发MCI患者中血清睾酮水平与血清IL-6和MMP-9水平呈负相关(r分别为-0.683和-0.607,P<0.05);血清雌二醇水平与血清IL-6和MMP-9水平呈负相关(r分别为-0.662和-0.615,P<0.05)。结论:血清睾酮和雌二醇水平降低与男性OSAHS患者伴发MCI具有关联性。
- 韩庆宇赵琳李娟陈晓鹏钱炜
- 关键词：阻塞性睡眠呼吸暂停综合征轻度认知功能障碍睾酮雌二醇
