弓晋灵
- 作品数：4 被引量：18H指数：3
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- 血管内皮生长因子对胃癌BGC-823细胞多药耐药相关蛋白1启动子活性的影响
- 2010年
- 目的:检测血管内皮生长因子(VEGF)对多药耐药相关蛋白1(MRP1)基因启动子转录活性的影响并初步探讨其作用机制。方法:合成MRP1启动子片段,克隆到荧光素酶报告基因载体PGL3-Basic中;用脂质体2000将重组的报告基因载体与内参质粒β-半乳糖苷酶(β-gal)瞬时共同转染人胃癌BGC-823细胞,检测VEGF作用后MRP1启动子活性的改变;继之,采用PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002预处理转染的细胞,再检测VEGF对MRP1启动子转录活性的影响。结果:酶切鉴定和DNA序列分析表明成功地构建了重组PGL3-Basic-MRP1载体;荧光素酶活性分析表明重组PGL3-Basic-MRP1在BGC-823细胞中具有启动子活性(144±3.0),与空载体PGL3-Basic(60±4.910)相比,转录活性增高2.4倍,差异有统计学意义(P<0.01);VEGF能以剂量依赖的方式上调MRP1启动子区的转录活性,与无VEGF作用组(171±6.083)相比,最大活性(924±19.975)增高5.4倍(P<0.05);LY294002能够显著抑制VEGF对MRP1启动子区的转录激活,当LY294002浓度为50μmol/ml时,MRP1启动子活性(392±25.541)与无LY294002作用组(1001±11.533)相比下降2.5倍(P<0.05)。结论:VEGF对MRP1启动子活性具有上调作用,PI3K/AKT信号通路在这一过程中发挥了重要作用。
- 李娟许文林弓晋灵杨靖吴晓君陈巧云
- 关键词：多药耐药相关蛋白1血管内皮生长因子荧光素酶报告基因启动子活性
- YB-1表达对乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响被引量：7
- 2010年
- 目的:观察Y-盒结合蛋白-1(YB-1)对肿瘤细胞迁移和侵袭能力的影响。方法:通过脂质体介导的方法将YB-1 shRNA重组载体转染入人类乳腺癌MCF-7细胞,经G418筛选及克隆化培养后获得稳定转染株。运用RT-PCR和蛋白质印迹方法检测MCF-7细胞中YB-1 mRNA和YB-1蛋白的表达水平,运用划痕实验和Transwell小室法检测细胞运动、迁移和侵袭能力的变化,同时运用RT-PCR和蛋白质印迹方法检测细胞中MMP-2的表达水平,并用明胶酶谱法检测MMP-2蛋白的活性。结果:稳定转染YB-1 shRNA的细胞中YB-1的表达明显低于转染随机片段的细胞和未转染组细胞,且细胞的运动、迁移和侵袭能力以及MMP-2的表达及活性也较后两组细胞明显下降。转染随机片段的细胞和未转染组细胞间无明显差异。结论:YB-1 shRNA可以沉默乳腺癌MCF-7细胞中YB-1的表达,并降低细胞的迁移和侵袭能力以及MMP-2的表达及活性。
- 杨靖许文林李娟弓晋灵吴晓君陈巧云王法春
- 关键词：MCF-7SHRNAMMP-2
- 一种新CD44变异体(CD44v17)在乳腺癌组织中的表达及其临床意义被引量：8
- 2010年
- 目的:探讨一种新CD44变异体(CD44v17)在乳腺癌组织中的表达及其临床意义。方法:根据本实验室在MCF-7/Adr中新发现的一种CD44剪切拼接变异体CD44v17(基因库NO.FJ216964)设计特异性引物,应用SYBRG reenⅠ荧光染料,采用实时PCR法检测了52例乳腺癌组织及相应癌旁组织CD44v17 mRNA的表达情况,根据标准曲线计算出CD44v17 mRNA的表达量,分析CD44v17 mRNA表达与乳腺癌临床生物学特性之间的关系。结果:乳腺癌组织CD44v17 mRNA表达(3.10±1.12)明显高于相应癌旁正常组织(2.31±0.84)(P<0.01);乳腺癌淋巴结转移组(4.07±1.13)显著高于无淋巴结转移组(2.75±0.89)(P<0.01);肿瘤组织>5 cm组CD44v17 mRNA表达(4.18±0.95)明显高于肿瘤组织≤5 cm组(2.96±1.07)(P<0.05);髓样癌(5.27±0.30)显著高于导管内癌(3.28±1.08)和浸润性导管癌(2.92±1.04)(P<0.05),导管内癌和浸润性导管癌CD44v17 mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05);乳腺癌临床Ⅲ期CD44v17 mRNA表达(4.18±0.92)明显高于Ⅰ期(2.73±0.97),Ⅱ期(2.76±0.96)(P<0.05);乳腺癌CD44v17 mRNA表达与雌激素受体、孕激素受体(progesterone receptor,PR)和cerbB-2表达无明显相关性(P>0.05)。结论:CD44v17 mRNA在乳腺癌组织中高表达,在乳腺癌的发生发展中起重要作用,可能与乳腺癌的侵袭、转移及预后有关。
- 弓晋灵许文林李娟杨靖吴晓君陈巧云
- 关键词：实时荧光定量PCR乳腺癌
- CD44基因变异体对人乳腺癌细胞株MCF-7的侵袭作用被引量：4
- 2010年
- 目的探讨一种新的CD44基因变异体（CD44v17）对人乳腺癌细胞株MCF-7侵袭能力的影响及其机制。方法以人乳腺癌耐阿霉素细胞株（MCF-7／ADR）cDNA为模板，采用聚合酶链反应（PCR）扩增目的片段，将其T．A克隆后，进行测序；构建CIM4v17质粒真核表达载体（pcDNA3．1-CD44v17）；应用脂质体转染法将pcDNA3．1-CD44v17转染入MCF-7细胞中，采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）及明胶酶谱法测定转染细胞基质金属蛋白酶（MMP）-2和MMPO的表达；Transwell法检测CD44v17对MCF-7细胞的侵袭力；Western blot检测胞外信号调节蛋白激酶（ERK）及磷酸化蛋白激酶（p-ERK）变化。结果限制性内切酶消化证实，重组载体已正确克隆；DNA序列分析显示，CD44v17包含CD44基因1～4号外显子、16～17号外显子、18号外显子1～205位碱基（GeneBank NO．FJ216964）。MCF-7细胞转染pcDNA3．1-CD44v17后，CD44mRNA表达量和蛋白表达率分别为0．92±0．22和（70．0±2．5）％；透明质酸（HA）处理后，MMP-2mRNA表达量和蛋白活性分别为0．72±0．22和1．14±0．12，MMPOmRNA表达量和蛋白活性分别为0．85±0．19和1．23±0．25，细胞侵袭能力明显增加，侵袭细胞数目为352±33个／视野，而CD44单抗可以阻断这种作用；CD44单抗和促分裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路抑制剂预处理转染细胞后，显著阻断了p-ERK的表达。结论在MCF-7／ADR细胞中发现CD44v17，并成功克隆和建立pcDNA3．1-CD44v17；HA与CD44v17受体结合，通过CD44→ras→MAPK信号传导通路调节MMP-2和MMPO的表达，从而增加MCF-7细胞的侵袭力。
- 房新建许文林弓晋灵陈琛方莉莉陈巧云
- 关键词：基质金属蛋白酶-2基质金属蛋白酶-9肿瘤侵袭
