唐华
- 作品数：3 被引量：6H指数：2
- 供职机构：中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家重点实验室开放基金国际科技合作与交流专项项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- A型口蹄疫合成肽疫苗的免疫效力评价被引量：3
- 2013年
- 【目的】研制A型口蹄疫(foot-and-mouth disease,FMD)新型合成肽疫苗,为畜牧业减少经济损失。【方法】应用两种含有口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)AF/72株VP1[131-159]、VP4[20-35]、3A[21-35]和3B[29-42]4个抗原表位的合成肽联合CpG寡聚脱氧核苷酸(5'-TCGCGAACGTTCGCCCGATCGTCGGTA-3')在豚鼠上进行了免疫效力评价。【结果】2.5μg/只的合成肽364能保护4/5的豚鼠免受FMDV AF/72株的攻击,灭活苗组获得完全保护,其他组的保护效力仅为3/5;保护效力最高的两组的外周血CD4+T淋巴细胞含量高达33.7%和36.6%,而其他组不超过27.7%,PBS组仅为18.1%。【结论】本研究筛选出一组免疫效力较好的口蹄疫A型合成肽疫苗,可以作为候选疫苗进行进一步评价。
- 唐华刘新生方玉珍蒋守田潘丽吕建亮张中旺周鹏张永光王永录
- 关键词：合成肽CPG寡聚脱氧核苷酸CD4+T淋巴细胞
- A型口蹄疫病毒真核表达载体的构建及其在BHK-21细胞中的表达被引量：2
- 2013年
- 为了构建A型口蹄疫重组表达质粒,并鉴定其在BHK-21细胞中的表达效果及免疫活性,通过设计引物及酶切位点,获得A型口蹄疫毒株AF/72的P1,2A及3C编码区的目的基因片段,利用设计的BamHⅠ及XbaⅠ酶切位点,定向将片段克隆于真核表达载体pcDNA3.1(+),经筛选、鉴定及序列分析后,将重组阳性质粒pcDNA3.1/P12A3C转染BHK-21细胞,通过双抗体夹心ELISA方法、间接免疫荧光标记方法及电镜透射法,检测细胞中表达的蛋白。结果表明:目的片段正确克隆到pcDNA3.1真核表达载体上,转染BHK-21细胞后,几种方法都能够检测表达蛋白。由此得出结论,构建的A型pcDNA3.1/P12A3C重组质粒能够在BHK-21细胞中正确表达目的蛋白并能组装成病毒空衣壳,表达蛋白具有良好的免疫活性,为进一步研究该质粒的动物免疫试验奠定了基础。
- 胡文发张永光王永录张攀唐华方玉珍蒋守田吕建亮周鹏张中旺刘新生潘丽
- 关键词：口蹄疫病毒BHK-21细胞电镜
- Asia 1型口蹄疫病毒多抗原表位真核表达质粒的构建及表达被引量：1
- 2013年
- 为了构建Asia 1型口蹄疫病毒多抗原表位真核表达质粒,采用多表位基因串联策略,合成包括口蹄疫病毒T细胞和B细胞表位基因的基因片段F,该基因片段由结构蛋白VP1上的2个B细胞表位(VP1135-159aa、VP1194-211aa)基因、非结构蛋白3A和3D上的T细胞表位(3A21-35aa、3D795-803aa)基因组成。利用限制性内切酶HindⅢ、XbaⅠ将基因片段F克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)。经酶切鉴定、序列分析正确后,利用LipofectamineTM2000将阳性重组质粒pc-F转染至BHK-21细胞。Western-blot和IFA分析结果显示,所表达的蛋白大小约25.4ku,能够与Asia 1型口蹄疫病毒标准兔抗血清发生特异性反应,证实所表达的蛋白具有较好的反应原性。结果表明,Asia 1型口蹄疫病毒多抗原表位真核表达质粒pc-F构建成功,且能在BHK-21细胞中正确表达。
- 张攀张永光王永录潘丽胡文发唐华方玉珍蒋守田吕建亮周鹏张中旺刘新生
- 关键词：ASIABHK-21细胞
